中藥復(fù)方作為免疫增強(qiáng)劑在疫苗中的應(yīng)用及可行性分析

姬星宇，焦金英，喬云龍，胡玉勝，李自波，李國輝，郭平霞

（商丘美蘭生物工程有限公司，河南 商丘 476000）

免疫佐劑是指當(dāng)一種先于抗原或者與抗原混合或同時(shí)注射于動(dòng)物體內(nèi)，能非特異的改變或增強(qiáng)機(jī)體對(duì)該抗原的特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)。其作用特點(diǎn)是：能明顯增強(qiáng)多糖或多肽等抗原性微弱的物質(zhì)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答；用最少量的抗原和最少的接種次數(shù)刺激機(jī)體產(chǎn)生足夠的免疫應(yīng)答和高滴度的抗體，在血液和黏膜表面能維持較長的時(shí)間，發(fā)揮持久效果［1］。

研究表明，許多單味中藥、中藥成分，乃至中藥復(fù)方都具有免疫增強(qiáng)作用，事實(shí)上，臨床上早已使用中藥方劑來提高免疫，如補(bǔ)中益氣湯、黃連解毒湯、四君子湯、四物湯、小柴胡湯、當(dāng)歸散、玉屏風(fēng)散、七補(bǔ)散、仙方活命飲和加減消毒飲等。中藥來源天然，安全可靠，與化合物免疫增強(qiáng)劑相比，具有毒副作用小、多效性、雙向調(diào)節(jié)性和無依賴性的特點(diǎn)，而且不易在畜產(chǎn)品中產(chǎn)生有害殘留，具有獨(dú)特優(yōu)勢。

1 中藥復(fù)方免疫增強(qiáng)劑的研究進(jìn)展

1.1 清熱解毒類

清熱解毒類中藥對(duì)畜禽感染性疾病的防治具有獨(dú)特的優(yōu)勢，除能抑制大多數(shù)病原微生物生長繁殖外，還能增強(qiáng)動(dòng)物的免疫功能。此類藥物中具有免疫增強(qiáng)的方劑有小柴胡湯、黃連解毒湯、清營湯、白虎湯等。長谷川格［2］探討了小柴胡湯對(duì)B細(xì)胞增殖與抗體產(chǎn)生系統(tǒng)有關(guān)的IL-4、誘導(dǎo)B細(xì)胞最終產(chǎn)生抗體的IL-6的影響，表明小柴胡湯能夠促進(jìn)抗體生成，同時(shí)，小柴胡湯可作用于B細(xì)胞，使多克隆抗體增加，表明小柴胡湯具有免疫激活作用。王學(xué)斌［3］以黃連、黃芩、板藍(lán)根、黃芪、山茶葉、甘草等6種中藥組方，與法氏囊病毒疫苗混合后作為佐劑使用，可明顯促進(jìn)抗體產(chǎn)生，提高脾臟和法氏囊指數(shù)以及E-玫瑰花環(huán)形成率。

1.2 補(bǔ)益類

此類藥物大多能提高機(jī)體免疫功能，且大多具有多糖成分。常用的方劑有補(bǔ)中益氣湯、四君子湯、玉屏風(fēng)散等。復(fù)方四君子湯比單味人參煎液更能顯著提高紅細(xì)胞的免疫黏附能力及清除免疫復(fù)合物對(duì)抗抑制因子等作用。四君子湯有明顯的抗突變作用。在新城疫Lasota系凍干苗免疫試驗(yàn)雞時(shí)，用加味四君子湯（人參、白術(shù)、茯苓、炙甘草、黃芪、當(dāng)歸）煎劑，給雞自由飲水，連用4d，結(jié)果表明，加味四君子湯能有效提高雞的特異性免疫和非特異性免疫水平，在14、28和42日齡均可極顯著提高雞的淋巴細(xì)胞數(shù)和血液中新城疫的抗體水平［4］。劉倩嫻［5］等研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)中益氣湯20 g/kg、40 g/kg時(shí)對(duì)脾虛小鼠低下的IL-2、INF-γ活性有提高作用，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)中益氣湯整方提高INF-γ活性的作用明顯大于拆方。

1.3 活血化瘀類

常用方劑如四物湯、生化湯、當(dāng)歸補(bǔ)血湯、白術(shù)散等。四物湯煎劑對(duì)小鼠單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的吞噬功能具有明顯促進(jìn)作用，能刺激提高小鼠特異性抗體的產(chǎn)生，能促進(jìn)T細(xì)胞的轉(zhuǎn)化功能。給小鼠灌胃四物湯后，其脾臟、胸腺重量與對(duì)照組相比都明顯增加，且隨藥物劑量的增高而增加。四物湯能提高小鼠酸性酯酶陽性細(xì)胞的百分率，顯著促進(jìn)自發(fā)性和ConA刺激的脾淋巴細(xì)胞增殖，提高抗體滴度和巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的百分率。當(dāng)歸補(bǔ)血湯能顯著抑制小鼠肝癌Hca-F25/16A3淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度，其作用機(jī)制是通過抑制脾細(xì)胞凋亡、增加淋巴細(xì)胞免疫活性來實(shí)現(xiàn)的［6］。

2 中藥復(fù)方免疫增強(qiáng)劑在疫苗中的應(yīng)用

單味中藥可以增強(qiáng)免疫，但是，不同中藥對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)增強(qiáng)的側(cè)重點(diǎn)不同，并非每味中藥都可以全面提高機(jī)體的免疫功能；另外，對(duì)不同的疫苗，中藥的免疫增強(qiáng)效果存在著差異，正是單味中藥成分在免疫增強(qiáng)方面的局限性，使得多種中藥成分組成的中藥復(fù)方作為免疫增強(qiáng)劑引起人們的重視。孫峻嶺［7］等分別用淫羊藿多糖加蜂膠黃酮、黃芪多糖加人參皂苷制成2個(gè)中藥成分復(fù)方，同時(shí)用相應(yīng)的淫羊藿、蜂膠、黃芪和人參的提取物制成相應(yīng)成分含量相同的2個(gè)中藥復(fù)方。試驗(yàn)1用2個(gè)中藥成分復(fù)方分別配合兔瘟滅活苗免疫家兔，于免疫后用血凝抑制試驗(yàn)法測定血清抗體效價(jià)的動(dòng)態(tài)變化；試驗(yàn)2將4個(gè)復(fù)方分別與滅活的新城疫強(qiáng)毒混合制成疫苗免疫雛雞，以白油佐劑苗、無佐劑苗和生理鹽水為對(duì)照，于免疫后用MTT法和血凝抑制試驗(yàn)法檢測外周血淋巴細(xì)胞增殖和血清抗體效價(jià)的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果表明，2個(gè)中藥成分復(fù)方能顯著提高家兔血清的兔瘟抗體效價(jià)，4個(gè)復(fù)方均能顯著促進(jìn)雛雞淋巴細(xì)胞增殖和提高血清抗體效價(jià)，效果與白油佐劑苗相當(dāng)。劉瑞生［8］等將黃芪多糖、淫羊藿多糖、左旋咪唑、維生素E及亞硒酸鈉制備成緩控釋復(fù)方免疫增強(qiáng)劑，在給雞注射ND-IB二聯(lián)弱毒疫苗時(shí)，配合使用緩控釋復(fù)方免疫增強(qiáng)劑，結(jié)果表明，緩控釋復(fù)方免疫增強(qiáng)劑可以顯著提高ND和IB的抗體效價(jià)；極顯著升高T淋巴細(xì)胞ERFC形成率。李星艷［9］等將由黃芪、茯苓、熟地、補(bǔ)骨脂、何首烏、淫羊藿、當(dāng)歸、黨參、川芎、山楂、麥冬等中藥組成的復(fù)方，制備復(fù)方總多糖，連續(xù)給雞注射7 d后，接種禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗，采用β-微量法測定AI抗體效價(jià)，結(jié)果顯示，相較于單糖，復(fù)方多糖可以促進(jìn)抗體更早產(chǎn)生，并且快速達(dá)到高峰；紅細(xì)胞免疫功能檢測結(jié)果顯示，不同濃度的復(fù)方多糖均能不同程度的提高紅細(xì)胞-C3b花環(huán)率和紅細(xì)胞-IC花環(huán)率。顏新艷［10］等通過篩選的3個(gè)硫酸化多糖：硫酸化黃芪多糖sAPS、硫酸化淫羊藿多糖sEPS、硫酸化香菇多糖sLNT組 成 4 個(gè) 成 分 復(fù) 方 ，復(fù) 方 1（sEPS-sAPS）,復(fù) 方 2（sEPS-sAPS-sLNT），復(fù) 方 3（sAPS-sLNT），復(fù) 方 4（sEPS-sLNT）在給雛雞接種新城疫疫苗時(shí)，分別注射復(fù)方多糖，結(jié)果表明，各復(fù)方均能明顯或顯著提高新城疫疫苗的免疫應(yīng)答，提高血清HI抗體效價(jià)，促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，降低攻毒后的發(fā)病率和死亡率，提高免疫保護(hù)率。黃雪泉［11］等將四君子湯提取液和滅活雞新城疫抗原混合成水相，制備成肉雞新城疫滅活油乳劑疫苗注射肉雞，研究引起的免疫反應(yīng)。試驗(yàn)結(jié)果表明：四君子湯提取液具有免疫調(diào)節(jié)作用的小分子多肽，促進(jìn)B細(xì)胞的分化增殖；提高機(jī)體免疫功能，可明顯促進(jìn)正常機(jī)體的抗體產(chǎn)生，提高肉雞新城疫抗體效價(jià)（P＜0.05），其中以四君子湯提取液含量為14%時(shí)效果最佳；四君子湯提取液能顯著提高血清超氧化物歧化酶（SOD）活性，增強(qiáng)其清除自由基的能力，使機(jī)體內(nèi)自由基的產(chǎn)生和清除保持平衡。

3 中藥復(fù)方作為疫苗免疫增強(qiáng)劑可行性分析

中藥復(fù)方是在中醫(yī)理論的指導(dǎo)下，以君、臣、佐、使的組方原則，通過方內(nèi)諸藥配伍調(diào)節(jié)藥物之間的關(guān)系來調(diào)整組合藥力。復(fù)方中藥對(duì)動(dòng)物疫苗具有協(xié)同作用，有研究表明中藥增強(qiáng)劑復(fù)方在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)的抗體效價(jià)顯著高于無增強(qiáng)劑組，顯示中藥復(fù)方具有較好免疫增強(qiáng)作用。

3.1 中藥復(fù)方免疫增強(qiáng)劑對(duì)免疫器官的影響

動(dòng)物免疫器官是動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)的主要場所。免疫器官主要由中樞免疫器官：骨髓、胸腺、腔上囊及外周免疫器官：脾臟、淋巴組織等組成。骨髓是造血干細(xì)胞生長、分化及發(fā)育的場所，可提供各種免疫細(xì)胞的前體細(xì)胞，B細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、NK細(xì)胞、血小板和紅細(xì)胞也在此分化成熟。胸腺的免疫功能主要是誘導(dǎo)T細(xì)胞的分化和成熟，胸腺衍化的T細(xì)胞輔助B細(xì)胞產(chǎn)生抗體。腔上囊是鳥類特有的中樞免疫器官，來自骨髓的淋巴干細(xì)胞在其內(nèi)誘導(dǎo)分化為成熟的B細(xì)胞，經(jīng)淋巴和血液循環(huán)到外周淋巴器官參與體液免疫；脾臟是機(jī)體內(nèi)最大的免疫器官，內(nèi)含大量的免疫細(xì)胞，在體液免疫中的地位極其重要。因此中藥對(duì)機(jī)體免疫器官的作用是研究中醫(yī)藥免疫調(diào)節(jié)作用的一個(gè)重要方面。張樂萃［12］等給雞注射復(fù)方多糖（黃芪多糖和香菇多糖）增強(qiáng)劑油乳苗，能明顯增加試驗(yàn)雞免疫器官的重量。呂殿紅［13］等由黃芪、靈芝、淫羊藿等按比例組成復(fù)方增強(qiáng)劑A，由黃芪、黨參等按比例組成復(fù)方增強(qiáng)劑B，與雞新城疫弱毒苗、法氏囊弱毒苗配合使用，結(jié)果表明，兩個(gè)復(fù)方增強(qiáng)劑均在不同程度上提高了ND和IBD疫苗的免疫反應(yīng)，促進(jìn)免疫器官的發(fā)育，增強(qiáng)了T淋巴細(xì)胞的活性。

3.2 中藥復(fù)方免疫增強(qiáng)劑對(duì)細(xì)胞免疫的影響

細(xì)胞免疫主要由T細(xì)胞介導(dǎo)。機(jī)體通過致敏階段和反應(yīng)階段，T細(xì)胞分化成效性淋巴細(xì)胞并產(chǎn)生細(xì)胞因子。T細(xì)胞能抵抗細(xì)胞內(nèi)寄生的細(xì)菌、病毒、真菌及原蟲的感染；T細(xì)胞具有免疫監(jiān)視作用，被腫瘤抗原致敏的T細(xì)胞通過直接殺傷和釋放細(xì)胞因子等可直接或間接地殺傷腫瘤細(xì)胞。一定程度上中藥提高機(jī)體免疫的途徑之一就是促進(jìn)T淋巴細(xì)胞分化。四物湯煎劑對(duì)小鼠單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的吞噬功能具有明顯促進(jìn)作用，能刺激提高小鼠特異性抗體的產(chǎn)生，能促進(jìn)T細(xì)胞的轉(zhuǎn)化功能。給小鼠灌胃四物湯后，其脾臟、胸腺重量與對(duì)照組相比都明顯增加，且隨藥物劑量的增高而增加。范云鵬［14］選擇淫羊藿多糖、淫羊藿黃酮、淫羊藿提取物、蜂膠黃酮、蜂膠提取物等組成藿蜂酮復(fù)方免疫增強(qiáng)劑，并制備中藥復(fù)方禽流感滅活苗及中藥復(fù)方新城疫滅活苗，試驗(yàn)結(jié)果顯示，藿蜂酮復(fù)方增強(qiáng)劑滅活苗能夠顯著促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，提高血清抗體效價(jià)，效果優(yōu)于無增強(qiáng)劑組和有增強(qiáng)劑組。

3.3 中藥復(fù)方免疫增強(qiáng)劑對(duì)體液免疫的影響

體液免疫是由B細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，是由B細(xì)胞通過對(duì)抗原的識(shí)別、活化、增殖，最后分化成漿細(xì)胞并分泌抗體來實(shí)現(xiàn)的，抗體是介導(dǎo)體液免疫的重要分子，在體內(nèi)可發(fā)揮多種免疫功能。許多研究表明中藥免疫增強(qiáng)劑可以促進(jìn)抗體的產(chǎn)生。以當(dāng)歸多糖、黃芪多糖、板藍(lán)根多糖和淫羊藿多糖等組成的中藥復(fù)方成分增強(qiáng)劑可以顯著提高新城疫弱毒苗免疫雛雞的抗體效價(jià)。四君子湯提取液和滅活雞新城疫抗原混合成水相，制備成肉雞新城疫滅活油乳劑疫苗注射實(shí)驗(yàn)肉雞可明顯促進(jìn)正常機(jī)體的抗體產(chǎn)生，提高肉雞新城疫抗體效價(jià)［11］。

4 結(jié)語

“防重于治”一直是我國養(yǎng)殖生產(chǎn)秉持的理念，怎樣有效提高抗體水平，一直是人們普遍關(guān)注的一個(gè)問題，而免疫佐劑是提高疫苗免疫水平不可或缺的一個(gè)成分。此外，隨著生活品質(zhì)的提高，食品安全問題也得到人們的重視，逐漸形成了“高品質(zhì)、低藥殘、無公害”的消費(fèi)理念。傳統(tǒng)的鋁膠佐劑、白油佐劑、黏膜佐劑、微生物佐劑等佐劑，都會(huì)或多或少地產(chǎn)生一些毒副作用，因此，尋找安全可靠的新型免疫增強(qiáng)劑是解決疫苗免疫效果的一個(gè)必要之舉。中藥免疫增強(qiáng)劑經(jīng)研究表明，確實(shí)具有一定的免疫促進(jìn)效果，但是單一的中藥免疫增強(qiáng)劑作用有限，而把許多單味中藥合理配伍，可形成具有免疫增強(qiáng)效果的方劑。此外，一些經(jīng)典方劑，如四君子湯、四物湯、小柴胡湯、玉屏風(fēng)散等，都可以被開發(fā)成中藥復(fù)方免疫增強(qiáng)劑，不僅是對(duì)新型免疫增強(qiáng)劑種類的一個(gè)補(bǔ)充，也是對(duì)我國寶貴的中草藥資源、經(jīng)典方劑的充分利用。

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