三葉因子家族1和細(xì)胞周期蛋白 D1在胃癌組織中的表達(dá)及意義

王慧慧 金仁順

(延邊腫瘤醫(yī)院病理科，吉林 延吉 133000)

三葉因子家族1和細(xì)胞周期蛋白 D1在胃癌組織中的表達(dá)及意義

王慧慧 金仁順1

(延邊腫瘤醫(yī)院病理科，吉林 延吉 133000)

目的 探討三葉因子家族(TFF)1和細(xì)胞周期蛋白(Cyclin)D1在胃癌組織中的表達(dá)及意義。方法 收集胃癌標(biāo)本72例，采用免疫組化SABC染色方法，觀察癌旁胃黏膜及胃癌組織中的TFF1和CyclinD1的表達(dá)，分析兩者與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系及兩者的相關(guān)性。結(jié)果 TFF1在癌旁黏膜及胃癌組織中陽性表達(dá)率分別為100.0%和63.3%，CyclinD1分別為69.8%和41.7%，兩者差異顯著(P<0.01，P<0.05)；TFF1和CyclinD1在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組分別為76.3%及55.6%，無轉(zhuǎn)移組分別為40.9%和18.5%，兩者差異顯著(P<0.01)；TFF1的表達(dá)與胃癌的分化程度無關(guān)，而CyclinD1在低分化和高中分化腺癌中的表達(dá)分別為53.5%和24.1%，兩者有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；TFF1在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)陽性的同時在細(xì)胞核中也有表達(dá)，其陽性率與腫瘤細(xì)胞的分化程度、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。TFF1和CyclinD1 在胃癌中表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論 TFF1和CyclinD1表達(dá)下調(diào)可能在胃癌發(fā)生過程中起作用，TFF1在胃癌的不同時期、不同階段可能起不同作用，TFF1和CyclinD1的低表達(dá)可作為胃癌的預(yù)后指標(biāo)。

胃癌；三葉因子家族；細(xì)胞周期蛋白D1

三葉因子家族(TFF)是近年研究較多的一種小分子多肽，在正常生理條件下主要表達(dá)于胃腸道黏膜，研究認(rèn)為TFF1不僅對胃腸黏膜起保護(hù)修復(fù)作用，而在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用，而TFF1在不同腫瘤中其表達(dá)意義可能不同〔1,2〕。本研究采用免疫組化方法檢測TFF1和細(xì)胞周期蛋白(Cyclin)D1在胃癌組織中的表達(dá)，分析其與胃癌的臨床病理參數(shù)間的關(guān)系以及兩者之間的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 胃癌標(biāo)本72例，男62例，女10例；年齡34～81(中位年齡63.2)歲,高中分化腺癌29例，低分化腺癌43例；浸潤至漿膜層51例，浸潤至肌層21例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例；賁門癌22例，胃竇癌50例。TFF1檢測有效病例癌旁49例，胃癌60例；Cyclin D1檢測有效病例癌旁63例，胃癌72例。

1.2 方法 所有標(biāo)本經(jīng)10%甲醛溶液固定24～48 h，常規(guī)石蠟包埋，進(jìn)行連續(xù)切片，厚度為4 μm，癌旁黏膜作為內(nèi)對照，分別進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)染色和免疫組化染色，光鏡下觀察染色結(jié)果，免疫組化采用SABC法(TFF1和 CyclinD1及試劑盒購自中彬金橋生物技術(shù)有限公司)，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，陰性對照用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗。

1.3 結(jié)果判斷 TFF1在細(xì)胞質(zhì)和(或)核內(nèi)有棕黃色顆粒為陽性，CyclinD1在細(xì)胞核著色為陽性。判斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)占同類細(xì)胞總數(shù)的百分比及染色強(qiáng)度進(jìn)行分級：①無著色為0分；淡黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分；②計數(shù)500個細(xì)胞，按顯色細(xì)胞占觀察細(xì)胞的比例：<5%為0分；6%～50%為1分；>50%為2分。兩項結(jié)果相加<2分為陰性(-)；2～3分為弱陽性(+)；4～5分為強(qiáng)陽性()。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行χ2檢驗，Spearman等級相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 TFF1和CyclinD1在癌旁組織及胃癌組織中的表達(dá) 在49例癌旁黏膜及60例胃癌組織中，TFF1陽性率分別為100%(49/49)和63.3%(38/60)，兩者間有統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=22.51，P<0.01)；CyclinD1在癌旁黏膜及胃癌組織中陽性率分別為69.8%(44/63)和41.7%(30/72)，兩者間有統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=10.769%，P<0.01)。見圖1,圖2。

2.2 TFF1表達(dá)部位與胃癌的生物學(xué)行為關(guān)系 38例細(xì)胞質(zhì)表達(dá)陽性的胃癌組織中，有14例核同時表達(dá)陽性，其中低分化腺癌12例，浸潤至漿膜層11例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移10例。

圖1 TFF1在癌旁黏膜及胃癌組織中的表達(dá)(DAB,×200)

2.3 TFF1和CyclinD1蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 TFF1在胃癌中的表達(dá)與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.01)，但與

患者的性別、年齡、分化程度和浸潤深度均無相關(guān)。另外，TFF1在賁門癌中的表達(dá)率高于胃竇癌(P<0.01)。CyclinD1在胃癌中的表達(dá)與組織類型和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05，P<0.01)，但與患者的性別、年齡、浸潤深度及胃癌的發(fā)生部位均無相關(guān)(P>0.05)。見表1。

2.4 TFF1和CyclinD1在胃癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 TFF1與CyclinD1表達(dá)呈正相關(guān)性(r=0.272，P=0.035)。

圖2 CyclinD1在癌旁黏膜及胃癌組織中的表達(dá)(DAB,×200)表1 TFF1、CychinD1表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系〔n(%)〕

病理因素TFF1(n=60)nn(%)χ2值P值CyclinD1(n=72)nn(%)χ2值P值性別男5132(62.7)0.0510.8226227(43.5)0.6500.420女96(66.7)103(30.0)年齡(歲)<603020(66.7)0.2870.5923212(37.5)0.4110.521≥603018(60.0)4018(45.0)分化程度高中分化1910(52.6)1.3710.242297(24.1)6.1380.013低分化4128(68.3)4323(53.5)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有3829(76.3)7.5220.0064525(55.6)9.5240.002無229(40.9)275(18.5)浸潤深度至漿膜4729(61.7)0.2490.6185125(49.0)3.8900.049至肌層139(69.2)215(23.8)部位賁門癌2017(85.0)6.9100.0092210(45.5)0.1870.665胃竇癌4020(50.0)5020(40.0)

3 討 論

眾多惡性腫瘤過表達(dá)TFF，但其表達(dá)是腫瘤形成后的下游因素還是促進(jìn)腫瘤形成的上游因素尚不明確。胃腸道是TFFs的主要合成部位，其中TFF1主要表達(dá)在胃黏膜表面上皮，目前認(rèn)為TFF1具有抗增殖抗凋亡雙重作用，其作用可能與靶細(xì)胞、細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境不同及其受體變化有關(guān)〔3〕。

在正常生理條件下，TFF1對正常胃黏膜具有保護(hù)作用，但胃黏膜發(fā)生病變后其表達(dá)下降可能失去正常保護(hù)作用，而TFF1蛋白表達(dá)缺失又可能導(dǎo)致胃黏膜過度增生和缺乏分化，從而造成異型增生，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生，認(rèn)為TFF1對胃腫瘤的發(fā)生可能起抑制作用〔4,5〕。研究發(fā)現(xiàn)在彌漫型進(jìn)展期胃癌中TFF1蛋白的表達(dá)水平高于腸型胃癌，浸潤胃壁全層者高于僅侵及肌層者〔6〕，認(rèn)為TFF1蛋白可能通過旁分泌或自分泌對靶細(xì)胞起到刺激作用從而促進(jìn)腫瘤生長作用，還可能作用于腫瘤細(xì)胞本身，使腫瘤細(xì)胞增殖、黏附力下降或產(chǎn)生分解酶作用于基質(zhì)，或通過其生長因子作用使腫瘤細(xì)胞運(yùn)動能力增強(qiáng)〔7〕，從而影響腫瘤細(xì)胞的侵襲能力和轉(zhuǎn)移，這一觀點(diǎn)說明了TFF1與胃癌轉(zhuǎn)移之間存在著一定的關(guān)系，證明了TFF1有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤作用。本實驗結(jié)果提示TFF1蛋白不僅與腫瘤的浸潤有關(guān)，還與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)，可作為胃癌預(yù)后不良的指標(biāo)。在本實驗中，我們還發(fā)現(xiàn)TFF1在賁門癌中的表達(dá)率高于胃竇癌，在不同部位胃癌中其表達(dá)率不同，其原因尚不清楚，有待于進(jìn)一步研究。

在本研究結(jié)果中，有14例胃癌細(xì)胞質(zhì)和核同時表達(dá)TFF1，這種現(xiàn)象與腫瘤的生物學(xué)行為有關(guān)，即胃癌的惡性度越高、浸潤深度越深及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者其核表達(dá)率越高，因此，認(rèn)為TFF1在胃癌的后期可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，起促癌作用，TFF1核表達(dá)可作為胃癌的預(yù)后不良的重要指標(biāo)。目前，TFF1在核內(nèi)表達(dá)機(jī)制尚不很清楚，有文獻(xiàn)報道TFF1表達(dá)部位從細(xì)胞質(zhì)逐漸向核周聚集時，喪失對胃黏膜上皮細(xì)胞的保護(hù)功能，從而造成胃黏膜的異型增生，最終導(dǎo)致胃癌的發(fā)生〔8〕。

CyclinD1是細(xì)胞周期調(diào)控中的重要分子，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起著正性調(diào)控作用，影響著腫瘤的生物學(xué)行為〔9,10〕。本結(jié)果說明CyclinD1的表達(dá)與胃癌形成有關(guān)，提示在正常胃黏膜中CyclinD1表達(dá)水平較高，但達(dá)到一定水平后，在CyclinD1的刺激下，黏膜上皮細(xì)胞過度生長、分裂及增殖，最終向惡性轉(zhuǎn)化，如一旦發(fā)生惡變其表達(dá)水平隨之下降，因此認(rèn)為CyclinD1不僅參與胃癌的發(fā)生，而且在胃癌發(fā)生的早期階段起作用。另外，在本實驗中CyclinD1與腫瘤的分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，即在低分化腺癌和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中陽性表達(dá)率高于高中分化腺癌和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，可見CyclinD1在腫瘤形成之前其表達(dá)量增加，但胃黏膜發(fā)生惡變后隨之下降，之后隨著腫瘤細(xì)胞的惡性度增高及腫瘤的轉(zhuǎn)移其表達(dá)量又開始上升，即非腫瘤↑→惡變↓→高分化↓→低分化及轉(zhuǎn)移↑，說明CyclinD1的表達(dá)與胃癌的不同時期、不同發(fā)展階段及預(yù)后有密切相關(guān),認(rèn)為檢測CyclinD1蛋白的表達(dá)，對判斷胃癌的惡性程度、轉(zhuǎn)移以及評估預(yù)后也具有重要意義。

目前的研究認(rèn)為，在細(xì)胞周期過程中，TFF1介導(dǎo)細(xì)胞周期蛋白依賴的激酶抑制劑p16及p21的水平增加，抑制CyclinD1和細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白激酶(CDK)4復(fù)合體的活性發(fā)揮作用〔3〕。本研究中TFF1和CyclinD1在癌旁黏膜中的表達(dá)均高于胃癌組織，兩者的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，并在分化差的腺癌中有較高的表達(dá)水平，另外，CyclinD1強(qiáng)表達(dá)組織中TFF1也呈強(qiáng)表達(dá)，提示了在胃癌發(fā)生和進(jìn)展過程中兩者有一定的相關(guān)性，兩者可能協(xié)同促進(jìn)胃癌的發(fā)生、發(fā)展。

1 蔡稼燕，任建林，張 靖.三葉因子的研究與進(jìn)展〔J〕.世界華人消化雜志，2007；15(21)：2273-8.

2 Im S,Yoo C,Jung JH,etal. Reduced expression of TFF1 and increased expression of TFF3 in gastric cancer:correlation with clinicopathological parameters and prognosis〔J〕.Int J Med Sci,2013;10(2):133-40.

3 程曉麗，陳自平.三葉因子1與胃癌〔J〕.國際腫瘤學(xué)雜志，2009;36(12)：938-40.

4 楊 俊，歷朝喜，戴一揚(yáng)，等.三葉因子1蛋白與血清胃蛋白酶原在胃潰瘍中的表達(dá)及其意義〔J〕.中華醫(yī)學(xué)雜志，2012;92(22):1540-3.

5 Shi SQ,Cai JT,Yang JM.Expression of trefoil factors 1 and 2 in precancerous condition and gastric cancer〔J〕.World J Gastroenterol,2006;12(19):3119-22.

6 陸 崠,陳玉麗，劉豫瑞.PS2表達(dá)與胃癌發(fā)生、發(fā)展及其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系〔J〕.福建醫(yī)藥雜志,2005;27(2):40-3.

7 王元杰，肖 蔚，郭 玲.大腸癌組織中ER和PR及pS2表達(dá)的臨床意義〔J〕.腫瘤防治雜志，2005;12(24):1881-3.

8 顧 瑋,李 健,張葉麗，等.pS2/TFFl蛋白在胃癌及其癌前病變組織中表達(dá)的研究〔J〕.胃腸病學(xué)，2010;15(12):725-8.

9 Liang S,Mu K,Wang Y,etal. CyclinD1,a prominent prognostic marker for endometrial diseases〔J〕.Diagn Pathol,2013;15(8):138.

10 Srivastava V,Patel B,Kumar M,etal. Cyclin D1,retinoblastoma and p16 protein expression in carcinoma of the gallbladder〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev,2013;14(5):2711-5.

〔2015-04-18修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)

吉林省教育廳項目〔吉教科合字2012第6號〕

金仁順(1964-)，女，主任醫(yī)師，博士，碩士生導(dǎo)師，主要從事腫瘤病理學(xué)研究。

王慧慧(1981-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤病理學(xué)研究。

R735.2

A

1005-9202(2017)03-0660-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.03.061

1 延邊大學(xué)附屬醫(yī)院病理科