犬發(fā)情鑒定技術(shù)研究及應(yīng)用現(xiàn)狀

王春亮，熊 前，葉俊華，李川武

(1.公安部南昌警犬基地， 江西 南昌 330100；2.江西省警犬良種繁育與行為科學(xué)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 江西 南昌 330100)

專論綜述

犬發(fā)情鑒定技術(shù)研究及應(yīng)用現(xiàn)狀

王春亮，熊 前，葉俊華，李川武

(1.公安部南昌警犬基地，江西南昌330100；2.江西省警犬良種繁育與行為科學(xué)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西南昌330100)

由于母犬相對(duì)獨(dú)特的生殖生理特點(diǎn)，造成很難準(zhǔn)確確定母犬的配種時(shí)間，進(jìn)而致使犬的受孕率和繁殖力低下。人們對(duì)犬的發(fā)情鑒定等相關(guān)領(lǐng)域進(jìn)行了大量研究，但迄今為止，在臨床實(shí)踐中，仍未找到一種準(zhǔn)確判定犬排卵時(shí)間的方法。本文著重對(duì)犬發(fā)情周期中陰道細(xì)胞學(xué)、激素和B型超聲診斷技術(shù)及其他一些新的指示物等相關(guān)的研究進(jìn)行了簡要論述和探討，旨在提高母犬的生產(chǎn)力，并以期為相關(guān)領(lǐng)域的研究和應(yīng)用提供理論參考。

犬；發(fā)情；雌二醇；孕酮；促黃體素；陰道上皮細(xì)胞

母犬開始排出的卵子尚未成熟，處于初級(jí)卵母細(xì)胞階段，必須在輸卵管中經(jīng)過減數(shù)分裂，放出第一極體而變?yōu)榇渭?jí)卵母細(xì)胞，才能獲得受精能力。這種不同于其他絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物獨(dú)特的生殖生理特點(diǎn)，造成犬繁育工作者很難準(zhǔn)確確定配種時(shí)間。如何正確地掌握母犬的排卵時(shí)間，確定最佳受孕期，對(duì)提高母犬受孕率和繁殖力具有重要意義。因品種和成年體重的不同，犬的第一個(gè)發(fā)情期從6～20個(gè)月不等，犬發(fā)情期包括發(fā)情前期、發(fā)情期、間情期、乏情期[1]。正常犬的發(fā)情周期可以用幾種不同的方式描述，包括行為方面、臨床癥狀、激素值、陰道細(xì)胞學(xué)的變化。而其中陰道細(xì)胞學(xué)變化和激素值相關(guān)方面的研究，已成為鑒定母犬發(fā)情排卵領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。本文綜述了犬發(fā)情周期陰道細(xì)胞學(xué)和激素方面的研究，并探討了其他一些新的發(fā)情鑒定指示物及方法，以期為相關(guān)領(lǐng)域的研究提供借鑒。

1 犬發(fā)情周期陰道細(xì)胞學(xué)變化的特征及研究

引起犬發(fā)情的生殖激素，主要包括雌二醇(E2)、孕酮(P4)和促黃體素(LH)。雌二醇(E2)是發(fā)情周期中第一重要的激素，E2的變化導(dǎo)致母犬發(fā)情的臨床癥狀，陰道壁、外陰的腫脹及血性分泌物的發(fā)生。Olson等研究表明，在雌激素的作用下陰道上皮細(xì)胞發(fā)生角質(zhì)化成為“角質(zhì)化細(xì)胞”，表面細(xì)胞變得大而扁平，核小或沒有核。陰道上皮能響應(yīng)的血液雌激素變化，陰道上皮周期性的變化可預(yù)測卵巢激素的血液濃度。

細(xì)胞學(xué)的變化反映機(jī)體潛在的內(nèi)分泌活動(dòng)周期。Bouchard等研究發(fā)現(xiàn)，角質(zhì)化上皮細(xì)胞比例達(dá)到80%，LH達(dá)到峰值。母犬發(fā)情周期中陰道上皮細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化與激素變化是一致的。追蹤陰道上皮細(xì)胞的形態(tài)變化，提供了一種分析激素水平變化的簡便方法。陰道上皮細(xì)胞涂片法總是比行為學(xué)方法更能準(zhǔn)確預(yù)測最佳受孕時(shí)間。

陰道上皮細(xì)胞在母犬發(fā)情各個(gè)時(shí)期呈一定規(guī)律性的變化。在乏情期，陰道上皮細(xì)胞以中間型和副基底細(xì)胞占主導(dǎo)，無或僅見少量表層上皮細(xì)胞，幾乎沒有中性粒細(xì)胞。在發(fā)情前期，陰道上皮細(xì)胞從發(fā)情前期的早期到后期將揭示一個(gè)從中間型和副基底細(xì)胞到角質(zhì)化細(xì)胞漸進(jìn)的轉(zhuǎn)變過程。通常，有血紅細(xì)胞大量出現(xiàn)，中性粒細(xì)胞一般也可見。在發(fā)情期，角質(zhì)化細(xì)胞占絕大多數(shù)，母犬進(jìn)行完全角質(zhì)化，陰道上皮細(xì)胞幾乎完全是無核表層上皮細(xì)胞。間情期開始是以角質(zhì)化細(xì)胞的數(shù)量急劇下降，中間型和副基底細(xì)胞的再現(xiàn)為特征，一天內(nèi)細(xì)胞輪廓變化從100%角質(zhì)化細(xì)胞到不足20%角質(zhì)化細(xì)胞。Newberry等研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)角質(zhì)化上皮細(xì)胞占主導(dǎo)，無嗜中性白細(xì)胞，有核上皮細(xì)胞和紅細(xì)胞也很少時(shí)，母犬進(jìn)入發(fā)情期，開始排卵。此階段母犬接受公犬爬跨，表明母犬已真正進(jìn)入發(fā)情盛期，此時(shí)配種受孕率較高。徐永志等研究發(fā)現(xiàn)，絕大多數(shù)自然發(fā)情的母犬，在陰道第1次滴血后第9～13天，角質(zhì)化上皮細(xì)胞比率高于80%。因此，表明陰道細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果，能輔助確定母犬發(fā)情的排卵時(shí)間。賀星亮等研究發(fā)現(xiàn)，在角化程度較低時(shí)進(jìn)行配種，受胎率和窩產(chǎn)仔數(shù)均降低，角化細(xì)胞率達(dá)到90%～100%時(shí)為最佳受孕時(shí)間。 研究發(fā)現(xiàn)，陰道上皮細(xì)胞檢查法主要用于輔助對(duì)母犬進(jìn)行發(fā)情鑒定，尤其對(duì)于發(fā)情異常犬或陰部觀察判斷難以準(zhǔn)確的犬，采取上皮細(xì)胞檢查法進(jìn)行發(fā)情鑒定具有很好的效果[2]。

2 犬發(fā)情周期生殖激素變化的特征及研究

王新蕾等研究發(fā)現(xiàn)，母犬血液中雌、孕激素變化較復(fù)雜，但仍有一定的規(guī)律性，可為犬的繁殖計(jì)劃提供理論參考。Concannon等研究發(fā)現(xiàn)，E2在發(fā)情前期的早期持續(xù)升高，在大多數(shù)母犬體內(nèi)由5～10 pg/mL升高到最高值45～120 pg/mL，其峰值一般出現(xiàn)在LH峰值前的1～3 d，即在LH脈沖式波動(dòng)出現(xiàn)前的0.5～2 d。然而，不同母犬的雌激素水平變化很大，與排卵相關(guān)性不是很準(zhǔn)確。 LH峰值的出現(xiàn)比E2峰值出現(xiàn)晚24 h，P4在E2達(dá)到峰值的時(shí)候濃度開始升高[3]。李旭等研究發(fā)現(xiàn)，LH的檢測值不穩(wěn)定，其規(guī)律不容易把握。P4的含量變化是相對(duì)有規(guī)律和穩(wěn)定的，曲線變化具有臨床特征性指征。最近研究發(fā)現(xiàn)孕酮可以準(zhǔn)確預(yù)測排卵時(shí)間[4]。

促黃體素LH是排卵的生物學(xué)觸發(fā)器，LH峰值是母犬發(fā)情周期的關(guān)鍵定時(shí)器，母犬雌激素水平的升高激發(fā)LH激增，排卵發(fā)生在LH峰值后的2 d。母犬卵巢剛排出的卵母細(xì)胞是不成熟的，不具有受精能力，2～3 d后在輸卵管里完成減數(shù)分裂，成熟的卵子能存活1～3 d。LH峰值算作第0天，母犬的排卵高峰期在LH峰值后的4、5或6 d。但，確定準(zhǔn)確的LH峰值需要每天進(jìn)行血液LH測試，而LH峰值可以使卵母細(xì)胞從分泌雌激素到分泌孕酮的轉(zhuǎn)變，LH峰值可以通過測定血液孕酮水平進(jìn)行預(yù)測。Gier等研究發(fā)現(xiàn)，在發(fā)情前期，LH峰值一般在E2峰值出現(xiàn)后1～3 d出現(xiàn)，LH濃度在達(dá)到最高值前的12～24 h劇烈升高，在達(dá)到峰值后12～36 h下降到基礎(chǔ)濃度，LH在發(fā)情前期的脈沖式波動(dòng)平均持續(xù)1.5 d(跨度大約為24～60 h)。LH的檢測方法，由于密集的血液檢測不僅浪費(fèi)時(shí)間而且昂貴，當(dāng)陰道上皮細(xì)胞角質(zhì)化大于60%時(shí)，需要每天檢測血液LH才能準(zhǔn)確確定LH峰值。其雖然可以提高凍精和冷藏精液人工授精時(shí)的受孕率，但定量檢測LH在實(shí)際應(yīng)用不廣泛。

孕激素對(duì)維持妊娠等生殖活動(dòng)各方面具有至關(guān)重要的作用。孕激素開始時(shí)候很低，在LH峰出現(xiàn)前，孕酮濃度小于0.5 ng /mL。 研究發(fā)現(xiàn)，德國牧羊犬發(fā)情第9～14天，血清孕酮值基本都超過10 ng /mL，此時(shí)為母犬最佳受孕時(shí)間[5]。初始的的孕激素上升與LH峰值密切相關(guān)，可以作為預(yù)測最佳受孕時(shí)間的依據(jù)。血液孕酮檢測是一種確定最佳受孕時(shí)間的準(zhǔn)確方法，也是快速確定母犬所處發(fā)情周期階段的最好工具。有許多獸醫(yī)以及實(shí)驗(yàn)室提供及時(shí)、有償?shù)脑屑に囟糠治觥Ｈ澜鐩]有一個(gè)快速的檢測方法，但有一些商業(yè)性的半定量孕酮試劑盒。這些試劑盒能夠快速檢測孕酮，在一些不是很復(fù)雜的配種上很實(shí)用，但對(duì)冷藏和冷凍精液進(jìn)行的人工授精或母犬輸精時(shí)，精子質(zhì)量低，采用定量方法測定孕酮，才能提供一個(gè)更準(zhǔn)確的結(jié)果。

3 B超及犬發(fā)情周期其他一些新的指示物及方法

B型超聲診斷技術(shù)亦可用于母犬的排卵鑒定[6]。在國外此方法已經(jīng)作為一種排卵時(shí)間確定的重要輔助手段，但國內(nèi)尚未見有成功的報(bào)道。但人們正嘗試研究使用一些新的方法來對(duì)犬的排卵時(shí)間進(jìn)行鑒定，如Pardo等研究發(fā)現(xiàn)，唾液結(jié)晶隨母犬發(fā)情周期的變化而呈現(xiàn)明顯的規(guī)律性變化，可以作為確定母犬最佳配種時(shí)間的一種新指示物。龔劍鋒等研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)情期唾液結(jié)晶的形狀為典型羊齒狀或松針狀，主梗直而粗硬，分枝密而長。范泉水等研究發(fā)現(xiàn)，陰道分泌物中的葡萄糖含量是發(fā)情期的重要指示物。當(dāng)葡萄糖含量出現(xiàn)陰性時(shí)，角化細(xì)胞與嗜酸性細(xì)胞出現(xiàn)峰值，為母犬最佳受孕期。但這兩種方法目前未見推廣應(yīng)用，準(zhǔn)確程度也需要進(jìn)一步驗(yàn)證。劉賀等研究發(fā)現(xiàn)，血液中NO的峰值與犬的排卵時(shí)間存在很大的關(guān)聯(lián)性，可作為預(yù)測排卵時(shí)間的一種新方法。NO的檢測方法相對(duì)簡便易行，但該方法尚需要進(jìn)一步研究。研究發(fā)現(xiàn),發(fā)情周期陰道黏液電阻值測定方法，可以為母犬配種提供參考[7]。該方法快速、準(zhǔn)確率高，具有一定的推廣價(jià)值。有研究發(fā)現(xiàn),采用氣質(zhì)聯(lián)用方法檢測母犬陰道分泌物中某些化合物的相對(duì)含量，發(fā)現(xiàn)在母犬發(fā)情前后有顯著差異[8]，預(yù)示其在犬發(fā)情鑒定方面具有潛在的研究價(jià)值。但上述這些指示物及方法能否準(zhǔn)確確定母犬的排卵時(shí)間，尚需要進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

4 小結(jié)及展望

國外確定母犬的排卵時(shí)間更多的是把陰道細(xì)胞學(xué)檢查、B超檢查和孕酮檢測方法結(jié)合起來，以便較準(zhǔn)確地確定母犬的排卵時(shí)間。目前，國內(nèi)臨床實(shí)踐中通常根據(jù)母犬陰道出血時(shí)間、接受交配情況、陰道細(xì)胞學(xué)檢查、陰唇的腫脹程度來進(jìn)行發(fā)情鑒定。一些新的指示物與母犬排卵的關(guān)聯(lián)性，尚需要進(jìn)一步研究。

綜上所述，迄今為止在臨床實(shí)踐中也尚未找到一種非?？煽康拇_定母犬排卵時(shí)間的方法。但，B超檢查和孕酮檢測在母犬發(fā)情鑒定的研究中是一種非常有潛力的研究方向。相信隨著B超檢查和孕酮檢測技術(shù)的深入研究及發(fā)展，不久的將來B超檢查和孕酮檢測，可能會(huì)成為臨床上準(zhǔn)確可靠的確定母犬排卵時(shí)間實(shí)用技術(shù)手段。

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S829.2

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： 1005-2739(2017)05-0003-03

2017-07-03

“十三五”國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2016YFD0501008)；江西省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(201201ZDYJ008)

王春亮(1987-)，男，碩士，研究方向?yàn)閯?dòng)物遺傳育種與繁殖。 E-mail:1486161197@qq.com

葉俊華(1957-)，男，研究員，主要研究方向?yàn)榫敝撑c育種。 E-mail:yjh575757@163.com 李川武(1964-)，男，研究員，研究方向?yàn)榫敝撑c育種。 E-mail:lchuanw@163.com