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    帶血管腓骨復(fù)合異體骨重建節(jié)段性骨缺損動(dòng)物模型建立

    2017-02-27 09:29:17朱皓東姬傳磊王臻樊俊俊賀杰馮俊凱劉冬陳國(guó)景李靖
    關(guān)鍵詞:大白兔大段異體

    朱皓東 姬傳磊 王臻 樊俊俊 賀杰 馮俊凱 劉冬 陳國(guó)景 李靖

    . 論著 Original article .

    帶血管腓骨復(fù)合異體骨重建節(jié)段性骨缺損動(dòng)物模型建立

    朱皓東 姬傳磊 王臻 樊俊俊 賀杰 馮俊凱 劉冬 陳國(guó)景 李靖

    目的 本實(shí)驗(yàn)觀察帶血管腓骨復(fù)合異體骨重建節(jié)段性骨缺損動(dòng)物模型建立。方法 選 52 只新西蘭大白兔,對(duì) 18 只成年新西蘭大白兔在全麻下無(wú)菌取雙側(cè)兔脛骨,取下的兔脛骨無(wú)菌下反復(fù)沖洗、處理髓腔,再放入無(wú)菌容器內(nèi)在 -196 ℃ 液氮滅菌 40 min,常溫下復(fù)溫,作為實(shí)驗(yàn)用兔異體骨。再對(duì)另外 34 只新西蘭大白兔分批在全麻下行單側(cè)兔脛骨人為制造骨缺損,骨缺損范圍約為 1.2~1.5 cm,再選取粗細(xì)、長(zhǎng)度相同的兔異體脛骨復(fù)合兔自體帶蒂腓骨瓣修復(fù)骨缺損,鋼板固定,平均手術(shù)時(shí)間 1.5 h。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)的 34 只兔術(shù)后單側(cè)脛骨骨缺損用兔同種異體骨復(fù)合兔自體帶蒂腓骨瓣修復(fù)骨缺損中,1 只兔在術(shù)中麻醉意外死亡,1 只在術(shù)后麻醉蘇醒活動(dòng)后出現(xiàn)肢體畸形,急查 X 線片顯示:內(nèi)固定斷裂、骨頭碎裂,對(duì)麻醉意外、內(nèi)固定斷裂、骨頭碎裂的 2 只兔在實(shí)驗(yàn)中放棄。其余 32 只兔手術(shù)成功,術(shù)后復(fù)查 X 線片觀察,兔脛骨骨缺損用兔同種異體骨復(fù)合兔自體帶蒂腓骨瓣修復(fù)骨缺損后,有 3 只術(shù)后 5 個(gè)月復(fù)查 X 線片顯示骨未愈合,其余 29 只骨完全愈合,愈合時(shí)間為平均 4 個(gè)月。結(jié)論 兔脛骨、腓骨解剖結(jié)構(gòu)和人類脛骨、腓骨解剖結(jié)構(gòu)類似,兔適合行自體帶蒂腓骨瓣移植,不用行腓骨瓣血管吻合,腓骨有豐富血供,能促進(jìn)異體骨與宿主骨愈合,腓骨愈合后能提供中晚期力學(xué)支撐。臨床用同種異體骨復(fù)合自體帶血管腓骨移植修復(fù)大段骨缺損手術(shù)方案與此動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)P拖鄬?duì)應(yīng),該模型的建立為臨床手術(shù)提供了更有力的依據(jù)。

    腓骨;骨移植;同種異體復(fù)合組織移植物;骨重建

    臨床上由于創(chuàng)傷、骨感染、腫瘤、戰(zhàn)時(shí)火器傷所致的大段骨缺損并不少見(jiàn),目前采用的治療方法主要為同種異體骨移植和帶血管自體腓骨移植[1]。大段異體骨復(fù)合自體帶血管腓骨移植修復(fù)四肢大段骨缺損,保存了大段異體骨的物理強(qiáng)度,并且可提供豐富血供加速異體骨活化促進(jìn)骨愈合,很好地解決四肢大段骨缺損修復(fù)的難題[2]?,F(xiàn)國(guó)內(nèi)外用同種異體骨復(fù)合自體帶血管腓骨修復(fù)大段骨缺損報(bào)道很多,但沒(méi)有動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)與臨床相對(duì)應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)34 只成年新西蘭大白兔模型建立為大段骨缺損采用同種異體骨復(fù)合自體帶血管腓骨移植修復(fù)骨缺損的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

    資料與方法

    一、一般資料

    1. 材料和儀器:選取 52 只新西蘭大白兔,3~4 個(gè)月齡,體重約 1.5~3.5 kg,雌雄性不限,購(gòu)自第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)實(shí)驗(yàn)中心。刮勺、骨銼、指接骨鋼板、螺絲釘、電鉆、擺鋸 ( 強(qiáng)生 ),該實(shí)驗(yàn)在第四軍醫(yī)大學(xué)外科實(shí)驗(yàn)中心完成。

    2. 材料制備:先對(duì) 18 只成年新西蘭大白兔在全麻下無(wú)菌取雙側(cè)兔脛骨剔除軟組織 ( 圖 1a ),取下的兔脛骨經(jīng)過(guò)無(wú)菌反復(fù)沖洗、處理髓腔,慶大霉素混合液清洗 3 次,放入無(wú)菌容器內(nèi)在 -196 ℃ 液氮滅菌 40 min,常溫下復(fù)溫,裝袋,用60Co 滅菌 ( 照射72 h ) 后做細(xì)菌、厭氧菌培養(yǎng),儲(chǔ)存在 -80 ℃ 冰箱1 年 ( 抗原處理 ),作為實(shí)驗(yàn)兔異體骨。

    二、動(dòng)物模型建立

    分批次取實(shí)驗(yàn)用兔 ( 34 只,右側(cè)脛骨 19 例;左側(cè) 15 例 ),稱體重,于兔耳緣靜脈注射 2% 戊巴比妥 1 ml / kg;鹽酸賽拉嗪速眠新 0.3~0.4 ml / kg 肌肉注射進(jìn)行全身麻醉,術(shù)中必要時(shí)可進(jìn)行兔耳緣靜脈追加戊巴比妥 ( 1 ml / kg ) 確保良好的麻醉狀態(tài),兔仰臥位四肢伸展,腿部去毛,采用 0.5% 碘伏消毒,鋪無(wú)菌手術(shù)單。在脛骨前外側(cè)處做一弧形切口長(zhǎng)約4 cm ( 圖 1b ),切開(kāi)皮膚、皮下組織及深筋膜,顯露脛骨遠(yuǎn)近端外側(cè)。用擺鋸分別在脛骨近端關(guān)節(jié)面下約 3.5~4.0 cm 處及遠(yuǎn)端截骨,制造 1.2~1.5 cm 脛骨骨缺損 ( 圖 2a ),髓腔擴(kuò)大后在近端自體脛骨后側(cè)開(kāi)小槽以防止復(fù)合時(shí)腓骨蒂部受壓,再截取同等粗細(xì)、長(zhǎng)度的兔異體脛骨 ( 圖 2b ),截取的異體骨用骨刀、刮勺骨銼等將其表面和髓腔處理,后修整成規(guī)則的原始解剖形狀。處理后的異體骨用過(guò)氧化氫、生理鹽水反復(fù)清洗。外側(cè)取同側(cè)腓骨,取腓骨長(zhǎng)度為制造的骨缺損長(zhǎng)度的 2~3 倍作移植腓骨瓣。腓骨瓣游離后僅留血管蒂部與其相連,在腓骨瓣血管蒂一側(cè)每隔 1 cm 用 5 號(hào)針頭開(kāi)孔,確??籽蹆?nèi)有血液滲出。將腓骨瓣插入異體骨,確保血管蒂位于開(kāi)槽處避免受壓,接骨板固定 ( 圖 3a、b )??p合手術(shù)切口,平均手術(shù)時(shí)間 1.5 h。術(shù)后給慶大霉素 4 萬(wàn)單位肌注 1 次預(yù)防切口感染。

    三、術(shù)后觀察

    1. X 線片復(fù)查:完成實(shí)驗(yàn)的 32 只術(shù)后當(dāng)天和術(shù)后每月 X 線片復(fù)查 ( 圖 4a、b ),觀察異體骨復(fù)合自體腓骨瓣修復(fù)大段骨缺損愈合情況。

    2. Van Gieson 染色:觀察骨愈合情況。

    結(jié) 果

    納入本研究的 34 只新西蘭大白兔,1 只術(shù)中死于麻醉意外,1 只術(shù)后麻醉蘇醒活動(dòng)后出現(xiàn)肢體畸形,X 線片顯示:內(nèi)固定斷裂、骨頭碎裂,放棄實(shí)驗(yàn)。其余 32 只無(wú)局部感染與其它并發(fā)癥,完成實(shí)驗(yàn)。

    完成實(shí)驗(yàn)的 32 只中,29 只行異體骨復(fù)合帶血管腓骨移植重建階段骨缺損,異體骨與自體腓帶血管骨與宿主骨骨痂形成良好,骨完全愈合 ( 圖 5a,b )。其中 7 只在術(shù)后 3.8 個(gè)月骨完全愈合;5 只在術(shù)后4.3 個(gè)月骨完全愈合;8 只在術(shù)后 3.2 個(gè)月骨完全愈合;9 只在術(shù)后 4.5 個(gè)月骨完全愈合。3 只未愈合兔,術(shù)后每月攝 X 線片復(fù)查,直至術(shù)后 5 個(gè)月仍未見(jiàn)骨愈合跡象 ( 圖 6a,b )。

    圖1 a:兔異體骨;b:術(shù)前切口設(shè)計(jì) Fig.1 a: Rabbit allograft; b: Preoperative incision design圖2 a:人為制造骨缺損;b:截取同等異體骨 Fig.2 a: Artif cial bone defect; b: The same allograft was captured

    圖3 a:游離帶蒂腓骨;b:異體骨復(fù)合帶血管腓骨重建鋼板固定圖4 a:術(shù)后 1 個(gè)月復(fù)查 X 線片;b:術(shù)后 4.5 個(gè)月復(fù)查 X 線片F(xiàn)ig.3 a: The free f bula; b: Reconstuction of the allograft combined wih vascular f bula, and the plate was f xedFig.4 a: The X-ray f lms were reviewed at 1 month after the operation; b: The X-ray f lms were reviewed at 4.5 months after the operation

    圖5 a:術(shù)后 4 個(gè)月骨完全愈合;b:Van Gieson 氏法染色骨完全愈合 ( × 20 )圖6 a:術(shù)后 5 個(gè)月骨未愈合;b:Van Gieson 氏法染色骨未愈合 ( × 20 )Fig.5 a: Bone union was realized at 4 months after the operation; b: Van Gieson’s method of dyeing showed bone union completely ( × 20 )Fig.6 a: Bone nonunion was noticed at 5 months after the operation; b: Van Gieson’s method of dyeing showed bone nonunion ( × 20 )

    討 論

    對(duì)于臨床上用異體骨復(fù)合自體帶血管腓骨、自體瘤骨復(fù)合帶血管腓骨修復(fù)重建四肢大段骨缺損的方法和結(jié)果不斷有報(bào)道,但沒(méi)有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)P团c臨床相對(duì)應(yīng)。

    本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)新西蘭大白兔同種異體骨復(fù)合自體帶蒂腓骨瓣修復(fù)骨缺損,本次實(shí)驗(yàn)選取大白兔為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,是因?yàn)榇蟀淄妹劇㈦韫堑慕馄式Y(jié)構(gòu)與人類脛、腓骨解剖結(jié)構(gòu)相似,適合做自體腓骨移植,實(shí)驗(yàn)中自體帶血管蒂腓骨瓣優(yōu)點(diǎn)為:脛、腓骨在解剖結(jié)構(gòu)相鄰,行腓骨瓣復(fù)合異體骨修復(fù)骨缺損操作簡(jiǎn)單、方便,而帶蒂腓骨瓣不用行腓動(dòng)、靜脈血管吻合,腓骨有血運(yùn)豐富,術(shù)后血管危象幾率低,腓骨成活幾率高,促 進(jìn)了異體骨與宿主骨愈合,對(duì)本次實(shí)驗(yàn)增加成功幾率。目前臨床對(duì)于骨缺損治療方法主要有:自體骨移植、同種異體骨移植、生物醫(yī)用材料 ( 人工骨 ) 填充骨缺損。而自體骨移植被認(rèn)為是修復(fù)骨缺損的“金標(biāo)準(zhǔn)”,但是自體骨提供的植骨量、結(jié)構(gòu)和強(qiáng)度是有限的,無(wú)法提供結(jié)構(gòu)均相同的大段異體骨相比,后期存在移植骨易吸收、骨折等問(wèn)題,但是同種異體骨在骨量、結(jié)構(gòu)和強(qiáng)度可彌補(bǔ)這些缺陷。實(shí)驗(yàn)選兔同種異體骨復(fù)合自體腓骨瓣修復(fù)大段骨缺損實(shí)驗(yàn)?zāi)P偷慕ⅲ鶕?jù)本 次實(shí)驗(yàn)結(jié)論再次與臨床相對(duì)應(yīng)。在以前的臨床報(bào)道中有單純用異體骨移植修復(fù)骨缺損;有單純用自體腓骨修復(fù)骨缺損,兩者都有不足之處。

    一、同種異體骨移植、骨未愈合原因分析

    內(nèi)固定固定穩(wěn)定度差、實(shí)驗(yàn)兔劇烈運(yùn)動(dòng),重建端不穩(wěn)定,導(dǎo)致自體帶血管腓骨發(fā)生血管危象,腓骨無(wú)血供,腓骨壞死,綜合因素導(dǎo)致重建后異體骨、自體腓骨與宿主骨未愈合。

    二、同種異體骨移植的優(yōu)點(diǎn)與不足

    1. 優(yōu)點(diǎn):人體同種異體骨移植不受形狀與數(shù)量的限制,可達(dá)到及時(shí)的骨量要求,骨愈合過(guò)程與傳統(tǒng)的大段自體移植骨類似,同種異體骨在修復(fù)骨缺損時(shí)它的支架、結(jié)構(gòu)和強(qiáng)度作用大大解決了臨床難題。

    2. 不足:異體骨在無(wú)菌滅菌處理過(guò)程缺乏自身成骨作用,經(jīng)骨庫(kù)制備的同種異體骨細(xì)胞成分已死亡,無(wú)成骨能力,其愈合是依靠骨傳導(dǎo)和骨誘導(dǎo)作用[3]。所以移植后骨愈合過(guò)程緩慢,骨易吸收、骨折、骨不愈合率高,遠(yuǎn)期效果不理想,不能早期負(fù)重[4],單純大段異體骨移植最后的結(jié)局往往失敗,同種異體骨始終無(wú)法與自體骨移植相比,但同種異體骨移植臨床效果并不亞于其它替代物[5]。同種異體骨由于具備低毒且較易被耐受,來(lái)源廣泛,作為支架材料具有良好的結(jié)構(gòu)和強(qiáng)度,為骨缺損修復(fù)的有效方法之一[6]。

    三、自體帶血管腓骨移植的優(yōu)點(diǎn)與不足

    1. 優(yōu)點(diǎn):自體骨移植素有“活骨移植”之稱,在大段骨缺損時(shí),受區(qū)血管和軟組織條件具備者,行單純患側(cè)或健側(cè)自體帶血管腓骨移植[7],修復(fù)骨缺損,自體腓骨移植包含有成骨活性的骨細(xì)胞,有豐富的血供,愈合過(guò)程由爬行替代可轉(zhuǎn)化為一般的骨折愈合過(guò)程,成功率高,可一期修復(fù)大段骨缺損。

    2. 不足:?jiǎn)渭冏泽w帶血管腓骨移植雖然修復(fù)是有了支架、骨愈合優(yōu)勢(shì),但缺乏穩(wěn)定、結(jié)構(gòu)和強(qiáng)度,雖然有獨(dú)立和豐富的血供,其愈合過(guò)程由爬行替代轉(zhuǎn)化為一般 的骨折愈合過(guò)程愈合時(shí)間短,即使有感染、血供差的部位也能成活,其成功率高,能一期修復(fù)骨缺損,被譽(yù)為最佳骨移植,但數(shù)量有限,由于其結(jié)構(gòu)的局限,不能早期負(fù)重[8-10]。

    所以不管用單純同種異體骨或自體腓骨移植修復(fù)骨缺損,都會(huì)存在不足,如果用同種異體骨與自體帶血管腓骨結(jié)合起來(lái)修復(fù)骨缺損,兩者優(yōu)點(diǎn)相結(jié)合互補(bǔ),解決了支架、結(jié)構(gòu)、強(qiáng)度和骨愈合等難題,自體帶血管腓骨移植包含有成骨活性的骨細(xì)胞,有豐富的血供,愈合過(guò)程由爬行替代可轉(zhuǎn)化為一般的骨折愈合過(guò)程,成功率高,可一期修復(fù)大段骨缺損,異體骨骨量充足,結(jié)構(gòu)和強(qiáng)度等優(yōu)勢(shì),兩者結(jié)合,在臨床上不管是創(chuàng)傷、骨感染、腫瘤、戰(zhàn)時(shí)火器傷所致的大段骨缺損修復(fù)重建方面解決了支架、結(jié)構(gòu)、強(qiáng)度和骨愈合等難題。Capanna 等[11]在1993 年最早報(bào)道將異體骨和帶血管腓骨復(fù)合的組合生物重建技術(shù)用于骨腫瘤切除后下肢大段骨缺損的重建。其中,異體骨提供骨量、早期力學(xué)支撐及對(duì)腓骨的保護(hù),帶血管腓骨促進(jìn)了異體骨與宿主骨愈合,腓骨愈合后能提供中晚期力學(xué)支撐。組合方法通過(guò)取長(zhǎng)補(bǔ)短達(dá)到最大程度功能恢復(fù)和降低并發(fā)癥的目的。近年來(lái)與自體帶血管腓骨組合修復(fù)大段骨缺損重建的方法和結(jié)果不斷報(bào)道[12-16]。在腫瘤方面,用巴士滅活瘤骨、照射滅活瘤骨與帶血管腓骨復(fù)合成為重要生物組合方式[17-19]。降低骨不連、骨折、感染等并發(fā)癥,液氮自體瘤骨滅活復(fù)合自體帶血管腓骨組合重建方式行腫瘤保肢,臨床證實(shí)自體帶血管腓骨利于復(fù)合體愈合[20]。

    為了實(shí)驗(yàn)結(jié)果與臨床相一致,而實(shí)驗(yàn)不可能在人體上進(jìn)行觀察研究。兔脛骨、腓骨解剖結(jié)構(gòu)和人類脛骨、腓骨解剖結(jié)構(gòu)類似,所以通過(guò)本研究觀察到帶血管腓骨復(fù)合異體骨重建節(jié)段性骨缺損,異體骨與自體骨的骨愈合機(jī)制、轉(zhuǎn)歸及組織學(xué)特點(diǎn),通過(guò)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí),由于自體腓骨能有血運(yùn)豐富,腓骨成活幾率高,加速了異體骨活化、促進(jìn)了骨一期愈合,結(jié)合異體骨保存了大段異體骨的物理強(qiáng)度和保護(hù)了移植的腓骨。此實(shí)驗(yàn)?zāi)P偷慕⑴c臨床手術(shù)技術(shù)的可行性,且為利用此次動(dòng)物模型進(jìn)行同種異體骨復(fù)合自體帶血管腓骨修復(fù)大段骨缺損手術(shù)技術(shù)相對(duì)應(yīng)。為臨床提供了更有力的依據(jù)。

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    ( 本文編輯:裴艷宏 )

    Reconstruction of segmental bone defect with vascular f bula compound allograft in the animal model

    ZHU Hao-dong, JI Chuan-lei, WANG Zhen, FAN Jun-jun, HE Jie, FENG Jun-kai, LIU Dong, CHEN Guo-jing, LI Jing. Department of Orthopedic Oncology, Xijing Hospital, the fourth Military Medical University, Xi’an, Shanxi, 710032, China

    LI Jing, Email: zyfmmu@fnnu.edu.cn

    ObjectiveTo observe reconstruction of segmental bone defect with vascular f bula compound allograft in the animal model.MethodsA total of 52 New Zealand white rabbits were selected, and bilateral tibia was taken from 18 adult New Zealand white rabbits under general anesthesia and sterile conditions. The removed tibia was repeatedly washed, and the tibial medullary cavity was processed under sterile conditions. It was put in a sterile container and underwent liquid nitrogen sterilization at minus 196 degrees Celsius within 40 minutes. And then it was rewarmed at room temperature, which was taken as the experimental rabbit allograft. Artif cial bone defects were made from the unilateral tibia of the other 34 New Zealand white rabbits under general anesthesia in batches, which were in the range of about 1.2 - 1.5 cm. The bone defects were repaired with the combination of allogeneic tibia and autologous tibia with pedicled f bular f ap of the same thickness and length, and the plate was f xed. The average operation time was 1.5 h.ResultsAmong the 34 experimental rabbits whose unilateral tibia bone defects were repaired with the combination of allogeneic tibia and autologous tibia with pedicled f bular f ap, 1 rabbit died in an intraoperative anesthesia accident, and 1 rabbit had limb deformities when it walked after waking from anesthesia after surgery. The X-ray was checked hurriedly, and breakage of internal f xation and bone fracture were found. The 2 rabbits with anesthesia accident, breakage of internal f xation and bone fracture were given up. Successful operations were realized in the other 32 rabbits. The postoperative X-ray showed that among the rabbits whose bone defects were repaired with the combination of allogeneic tibia and autologous tibia with pedicled f bular f ap, bone nonunion was noticed in 3 rabbits at 5 months after the operation, and bone union in the other 29 rabbits, with 4 months of healingtime.ConclusionsThrough this experiment, the anatomy of the rabbit tibia and f bula is similar to that of human tibia and f bula, and rabbits are suitable for autologous pedicled f bular f ap transplantation. Vascular anastomosis of the f bular f ap isn’t needed. The f bula with rich blood supply can promote the healing of allograft bone and host bone, and middle and late mechanical support can be provided after the healing of the f bula. Clinical surgery of massive bone defects with the combination of allogeneic bone and autologous bone with pedicled f bular f ap corresponds to the animal experimental model, which provides more powerful basis for clinical surgery.

    Fibula; Bone transplantation; Composite tissue allografts; Bone remodeling

    10.3969/j.issn.2095-252X.2017.02.012

    R683, R687.3

    710032 西安,第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院骨腫瘤科

    李靖,Email: zyfmmu@fnnu.edu.cn.

    2016-11-08 )

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