針刀干預(yù)下小白鼠正常骨骼肌及筋膜微觀結(jié)構(gòu)變化的實(shí)驗(yàn)研究

齊丹丹，李殿寧，李開(kāi)平，蘆 娟，王 丹

(南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京210046)

自1976年朱漢章發(fā)明針刀以來(lái)，應(yīng)用針刀治療軟組織損傷性疾病取得了良好的臨床療效。朱漢章認(rèn)為［1］針刀醫(yī)學(xué)是一種精密的體外操作的微創(chuàng)手術(shù)方法。但是，對(duì)于針刀干預(yù)下骨骼肌及筋膜的組織學(xué)微觀結(jié)構(gòu)變化，目前尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。筆者在南京中醫(yī)藥大學(xué)李殿寧導(dǎo)師指導(dǎo)下，觀察針刀干預(yù)下?lián)p傷組織自發(fā)的一系列炎癥修復(fù)過(guò)程，以及探討針刀醫(yī)學(xué)治療學(xué)的基礎(chǔ)機(jī)理，采用組織學(xué)HE染色方法，從骨骼肌及筋膜微觀結(jié)構(gòu)入手進(jìn)行了相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)研究情況報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 研究對(duì)象 選擇小白鼠(18 g±2 g)26只，均由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，隨機(jī)分為5組:空白對(duì)照組2只，針刀干預(yù)組1、針刀干預(yù)組2、針刀干預(yù)組3和針刀干預(yù)組4各6只，并對(duì)每組小白鼠依次進(jìn)行編號(hào)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)器材 針刀0.4 mm×40 mm、飼養(yǎng)籠5個(gè)、無(wú)菌手套若干、飼料、墊料、照相機(jī)(像素1 000萬(wàn))、剪刀、碘酒、75%酒精、創(chuàng)可貼、自制固鼠板2個(gè)，無(wú)水乙醇(分析醇)、10%福爾馬林溶液(4%甲醛溶液)，TSJ－Ⅱ型全自動(dòng)脫水機(jī)、BMJ－Ⅲ型包埋機(jī)、BMJ－Ⅲ病理組織包埋冷凍臺(tái)、石蠟切片機(jī)、QP－9切片漂烘溫控儀(常州郊區(qū)中威電子儀器廠)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 空白對(duì)照組 將該組小白鼠捆綁固定，對(duì)股部大轉(zhuǎn)子下定點(diǎn)部位去毛、消毒后，取該處肌肉組織一塊，其長(zhǎng)、寬約為0.5～1.0 mm、厚度約為1.0 mm，制作出石蠟切片后，于顯微鏡下觀察切片中骨骼肌的正常形態(tài)。

1.2.2 針刀干預(yù)組 參照人體針刀治療四步操作法［2］進(jìn)行針切。以針刀干預(yù)組1為例，先將針刀干預(yù)組1的小白鼠依次固定于固鼠板上(腹部向下，背部向上)，然后按照:定點(diǎn)——在小白鼠后腿伸直位股骨大轉(zhuǎn)子下定位為進(jìn)針點(diǎn)標(biāo)記后消毒;定向——針刃方向與局部骨骼肌纖維、血管神經(jīng)走向一致，避免針刃損傷深部組織結(jié)構(gòu);加壓——以左手拇指為押指，在進(jìn)針點(diǎn)下按壓;進(jìn)針與針切——用針刀(型號(hào)為0.4 mm×40 mm)迅速刺入進(jìn)針點(diǎn)皮下組織層達(dá)骨骼肌部位，并對(duì)病變部位行使縱向稍有間隔的連續(xù)切割3～5次后出針。比照針刀干預(yù)組1的干預(yù)方法，對(duì)針刀干預(yù)組2、針刀干預(yù)組3和針刀干預(yù)組4的小白鼠依次進(jìn)行針刀干預(yù)。

1.2.3 針刀干預(yù)后的HE染色 將針刀干預(yù)組1、針刀干預(yù)組2、針刀干預(yù)組3和針刀干預(yù)組4小白鼠分別于針刀干預(yù)1 d、2 d、5 d和10 d后拉頸斷髓處死。然后，以各小白鼠針刀針切進(jìn)針點(diǎn)為中心，取相同部位肌肉組織一塊，其長(zhǎng)、寬約為0.5～1.0 mm，厚度約為1.0 mm，將組織塊放于4%甲醛溶液內(nèi)固定24 h后制作出石蠟切片，顯微鏡下觀察針切部位骨骼肌切片中組織結(jié)構(gòu)改變情況。

2 結(jié)果

利用組織學(xué)HE染色技術(shù)［3］，觀察到正常骨骼肌經(jīng)針刀干預(yù)后在不同時(shí)間段所呈現(xiàn)的微觀結(jié)構(gòu)變化如圖1～圖4所示。其中:圖1針刀干預(yù)組1(針刀干預(yù)1 d后)，在損傷部位可以觀察到:針切部位有肌纖維斷裂，肌組織與肌組織之間的結(jié)締組織即筋膜出現(xiàn)大量與肌細(xì)胞核大小、嗜堿性程度、部位均不同的炎癥細(xì)胞，且以成纖維細(xì)胞和巨噬細(xì)胞為主，并伴有紅細(xì)胞存在;圖2針刀干預(yù)組2(針刀干預(yù)2 d后)，在損傷部位可以觀察到:肌纖維損傷，且在受損的肌細(xì)胞之間結(jié)締組繼續(xù)產(chǎn)生以巨噬細(xì)胞為主的炎癥反應(yīng)，并伴有紅細(xì)胞存在;圖3針刀干預(yù)組3(針刀干預(yù)5 d后)，在損傷部位可以觀察到:結(jié)締組織出現(xiàn)的巨嗜細(xì)胞處于消退狀態(tài)，有新生成的毛細(xì)血管、紅細(xì)胞存在;圖4針刀干預(yù)組4(針刀干預(yù)10 d后)，在損傷部位可以觀察到:結(jié)締組織填充在針切部位，并沒(méi)有形成肉芽組織或瘢痕組織。

圖1 40倍 針刀干預(yù)組1(針切后1天)

圖2 40倍 針刀干預(yù)組2(針切后2天)

將空白組(如圖5所示)與針刀干預(yù)組(如圖1～圖4所示)比較，可以將觀察結(jié)果概括為:小白鼠股部大轉(zhuǎn)子下定點(diǎn)部位的正常骨骼肌及筋膜組織經(jīng)針刀干預(yù)后，出現(xiàn)了以血管為中心、巨噬細(xì)胞聚集的反應(yīng)性炎變，以及之后發(fā)生的一系列修復(fù)過(guò)程，修復(fù)結(jié)果趨向于正常骨胳肌及筋膜結(jié)構(gòu)。

3 討論

針刀針切軟組織導(dǎo)致肌與筋膜組織的連續(xù)性中斷并出現(xiàn)針切反應(yīng)性炎變，其反應(yīng)主要表現(xiàn)為針切后的1 d和2 d內(nèi)，針切部位出現(xiàn)以血管為中心、大量巨噬細(xì)胞和成纖維細(xì)胞聚集及紅細(xì)胞溢出情況，發(fā)生炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，成纖維細(xì)胞活躍［4～5］，炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)可生成過(guò)氧化物(H2O2)，而一氧化氮可降低因H2O2激活的白細(xì)胞的侵襲性，保護(hù)肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的完整性［6～8］。巨噬細(xì)胞的大量產(chǎn)生對(duì)損傷的修復(fù)起到3個(gè)重要作用:第一，巨噬細(xì)胞的產(chǎn)生可以吞噬細(xì)胞碎片、壞死組織和少量細(xì)菌，起到“清道夫”的作用［9］;第二，巨噬細(xì)胞對(duì)于血管生成也有重要作用，巨噬細(xì)胞的大量增多促進(jìn)了局部毛細(xì)血管的生成，為局部缺血缺氧的骨骼肌重建提供了良好的血運(yùn);第三，據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，巨噬細(xì)胞吞噬細(xì)胞碎片的同時(shí)可以分泌生長(zhǎng)因子，從而激活肌肉組織存在于肌纖維膜和基膜之間的再生性干細(xì)胞——衛(wèi)星細(xì)胞。肌衛(wèi)星細(xì)胞的聚集和激活是肌組織再生的關(guān)鍵。針刀針切5 d后巨噬細(xì)胞消退，受損肌纖維修復(fù)情況良好，有新生毛細(xì)血管出現(xiàn)。經(jīng)過(guò)10 d修復(fù)，干預(yù)部位的骨骼肌和筋膜經(jīng)過(guò)一系列修復(fù)過(guò)程，趨向于正常組織，修復(fù)情況良好。

圖3 40倍針刀干預(yù)組3(針切后5天)

圖4 40倍針刀干預(yù)組4(針切后10天)

圖5 10倍正常骨胳肌

筆者觀察針刀干預(yù)小鼠股部定點(diǎn)部位后骨骼肌和筋膜結(jié)構(gòu)的變化規(guī)律，發(fā)現(xiàn)在針刀干預(yù)后小鼠的肌組織和筋膜組織修復(fù)情況良好，無(wú)中性粒細(xì)胞出現(xiàn)的感染情況。雖然小鼠皮膚的結(jié)構(gòu)不同于人體，無(wú)法觀察皮膚的愈合情況，但是根據(jù)外科學(xué)研究推斷，針刀在進(jìn)行治療的過(guò)程中，因嚴(yán)格遵循外科手術(shù)的無(wú)菌操作，無(wú)代表炎癥反應(yīng)的中性粒細(xì)胞等出現(xiàn)，針刀干預(yù)人體皮膚后所形成的自身組織修復(fù)是創(chuàng)口小、清潔、無(wú)感染、不產(chǎn)生或很少產(chǎn)生肉芽組織的愈合，屬于傷口一期愈合［10］。筆者認(rèn)為針刀針切過(guò)程，盡管是對(duì)皮膚、皮下組織、骨骼肌和筋膜連續(xù)性的破壞過(guò)程，但同時(shí)可以達(dá)到骨骼肌的再生而重建原有的正常結(jié)構(gòu)與功能，完全性病理性再生［11］?？煞只募?xì)胞，在基因的調(diào)控下分化發(fā)育成為不同種類的組織和器官。

4 結(jié)論

為了填補(bǔ)針刀治療的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，筆者觀察針刀干預(yù)小白鼠正常組織后，HE染色觀察小鼠骨骼肌的微觀結(jié)構(gòu)變化可以概括為:針切反應(yīng)性炎變－基因調(diào)控－組織重建過(guò)程，即針刀針切組織可在基因調(diào)控下定向修復(fù)和重建，從而恢復(fù)病變組織的重建過(guò)程。這一結(jié)論為針刀醫(yī)學(xué)治療學(xué)的基礎(chǔ)機(jī)理研究提供了形態(tài)學(xué)依據(jù)，具有積極的意義。

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