葉菜類農(nóng)藥殘留快速檢測方法

田婭王素萍石遵銘陳晶羅文輝

（1.湖北省大冶市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全管理辦公室 435100；2.湖北省大冶市農(nóng)業(yè)執(zhí)法大隊(duì) 435100；

3.湖北省大治市陳貴鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心 435124；4.湖北省大冶市微生物實(shí)驗(yàn)站 435100；5.湖北省大冶市植保站 435100）

葉菜類農(nóng)藥殘留快速檢測方法

田婭1王素萍2石遵銘3陳晶4羅文輝5

（1.湖北省大冶市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全管理辦公室 435100；2.湖北省大冶市農(nóng)業(yè)執(zhí)法大隊(duì) 435100；

3.湖北省大治市陳貴鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心 435124；4.湖北省大冶市微生物實(shí)驗(yàn)站 435100；5.湖北省大冶市植保站 435100）

利用有機(jī)磷和氨基甲酸酯農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶的活性的抑制作用，使這種酶在含有有機(jī)磷和氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留的蔬菜樣品中不能被水解，從而無顯色反應(yīng)原理，采用吸光度對比法計(jì)算抑制率，判斷葉菜類蔬菜中是否存在有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留，方法簡便、快捷、經(jīng)濟(jì)，是保障農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的重要手段。

葉菜；有機(jī)磷；氨基甲酸酯；農(nóng)藥殘留；快速檢測

葉菜類富含維生素、無機(jī)鹽、粗纖維等多種營養(yǎng)成份，是人民日常生活中不可缺少的蔬菜，因生長嫩綠，易致菜青蟲、小菜蛾、斜紋夜蛾、甜菜夜蛾等多種害蟲為害，農(nóng)民噴施農(nóng)藥防治不可避免。隨著人民生活水平的不斷提高，人們對食品安全越來越關(guān)注。為保證葉菜類的質(zhì)量安全，加強(qiáng)農(nóng)藥殘留的檢測工作勢在必行。由于葉菜類產(chǎn)量高，品種多，種植點(diǎn)多面廣，樣品數(shù)量很大?？焖贆z測以其方法簡便、快捷、經(jīng)濟(jì)、適用的特點(diǎn)，特別適合對葉菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留檢測，已成為保障葉菜產(chǎn)品質(zhì)量安全的重要手段。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑材料及規(guī)格

緩沖試劑粉7.5g；乙酰膽堿酯酶粉0.1mg；底物粉125mg；顯色劑粉120mg。

1.1.2 儀器

農(nóng)殘快速測定儀，波長412nm；冰箱；恒溫箱；振蕩器。

1.1.3 檢測工具

電子天平、燒杯、試管、剪刀、吸管、刻度滴管、移液器、比色皿、計(jì)時(shí)器。

1.2 方法

1.2.1 抽樣方法

在蔬菜成熟上市前，根據(jù)地形情況確定取樣方法。采用單對角線、雙對角線、五點(diǎn)式、棋盤式和蛇形式方法抽樣。生產(chǎn)基地種植面積小于10hm2，每1hm2～3hm2設(shè)一個(gè)抽樣單元；種植面積大于10 hm2，每3hm2～5hm2設(shè)一個(gè)抽樣單元。設(shè)施地每個(gè)大棚為一個(gè)抽樣單元，每個(gè)抽樣單元內(nèi)抽樣點(diǎn)不少于5個(gè)，每個(gè)抽樣點(diǎn)面積1m2左右，蔬菜單個(gè)個(gè)體大于0.5kg時(shí)，抽樣樣本不少于10個(gè)，單個(gè)個(gè)體大于1kg時(shí)，抽取樣本不少于5個(gè)。批發(fā)市場散裝樣視堆高從上、中、下分層抽樣，每層從中間和四角五點(diǎn)取樣。堆垛商品取樣時(shí)，在堆垛兩側(cè)的不同部位上、中、下和四角抽取相應(yīng)數(shù)量的樣本。

1.2.2 試劑配制方法

a）緩沖溶液

取緩沖試劑粉7.5g，加入500mL蒸餾水或純凈水，溶解攪拌均勻，即得pH=8.0緩沖溶液。

b）酶液

向乙酰膽堿酯酶粉0.1mg瓶中加入3mL緩沖溶液，溶解、混勻即可。4℃下保存，配好的酶液在4℃下可使用7d。切勿冷凍至結(jié)冰。

c）底物

向底物粉125mg瓶中加入15mL蒸溜水或純凈水，溶解、混勻即可。4℃下保存，配好的底物在4℃下可使用3d。冷凍保存可使用15d。

d）顯色劑

向顯色劑粉120mg瓶中加入15mL緩沖溶液，溶解、混勻即可。

a）樣品提取

擦掉樣品表面泥土，剪成1cm左右見方的碎片；取樣品1g，放入燒杯或提取瓶中，加入5mL緩沖溶液，振蕩2min；倒出樣品溶液，靜置3min，備用。

b）對照測試（空白溶液測試）

在試管中加入2.5mL緩沖液，再加入0.1mL酶液、0.1mL顯色劑，搖勻，置于37℃恒溫箱中放置15min；取出后加入0.1mL底物搖勻，立即倒入比色皿中并放入儀器比色池中進(jìn)行對照測試，測試時(shí)間以3min為準(zhǔn)。

c）樣品測試

用定量移液器吸取2.5mL樣品溶液于試管中，依次加入0.1mL酶液，0.1mL顯色劑，搖勻后置于37℃恒溫箱中放置15min；取出后加入0.1mL底物搖勻，立即倒入比色皿中并放入儀器比色池中進(jìn)行樣品測試，測試時(shí)間以3min為準(zhǔn)。

d）計(jì)算方法

此外，黑水虻幼蟲體內(nèi)還發(fā)現(xiàn)了大量其它的抗菌物質(zhì)，例如月桂酸、蛋白酶、P450解毒酶、水解酶等，經(jīng)免疫反應(yīng)產(chǎn)生的BF64抗菌蛋白和BD2抗菌蛋白，具有特別強(qiáng)的抗菌能力，是青霉素的幾百倍。黑水虻幼蟲體內(nèi)豐富的抗菌物質(zhì)，使其在醫(yī)藥領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景，可以開發(fā)制備更多具有抗菌、保健的醫(yī)藥產(chǎn)品。

式中：

△A空白：對照溶液反應(yīng)3min吸光度變化值；

△A樣品：樣品溶液反應(yīng)3min吸光度變化值。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測原理及內(nèi)容

乙酰膽堿酯酶水解后，水解產(chǎn)物可與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥可以抑制乙酰膽堿酯酶的活性，使這種酶不能被水解，從而無顯色反應(yīng)。根據(jù)這個(gè)原理，利用膽堿酯酶的催化反應(yīng)的抑制法，通過顏色變化直觀檢測方法，快速檢測葉類蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留。

2.2 檢測結(jié)果

根據(jù)樣品和對照中的吸光度變化值的檢測，按抑制率計(jì)算方法，檢測結(jié)果抑制率大于50%時(shí)檢測結(jié)果為陽性，注意對于陽性樣品要有2次以上重復(fù)檢測。

2.3 判定依據(jù)和標(biāo)準(zhǔn)

樣品檢測為陽性，依據(jù)GB2763-2014進(jìn)行判定，為有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留超標(biāo)。監(jiān)測項(xiàng)目全部合格者，判定為“該產(chǎn)品所檢項(xiàng)目符合GB2763-2014的要求”。

3 問題與探討

3.1 操作與試劑保存

a）溶解、配制試劑時(shí)要小心操作，注意不能使瓶蓋上沾染的部分試劑粉末損失，以免影響檢測精確程度。

b）顯色時(shí)間3min時(shí)，對照測試（空白溶液測試）吸光度變化應(yīng)在0.3以上。

c）試劑溶解前冷凍保存的保質(zhì)期為1年；冷藏保存時(shí)間不建議過長。

d）酶粉溶解后要盡快用完，可短期冷藏保存；如1星期內(nèi)不能用完，應(yīng)冷凍保存，但反復(fù)凍融不可超過3次，冷凍保存不超過30d。

e）底物和顯色劑溶解后需冷藏保存，保持期1個(gè)月；可冷凍長期保存。

3.2 特種蔬菜檢測方法

蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，因?yàn)楹猩?、纖維素、次生物質(zhì)等較多的蔬菜樣品在農(nóng)藥殘留檢測過程中會(huì)導(dǎo)致假陽性比較高，一般建議的處理如下方式：

a）對一些含葉綠素較高的蔬菜（如：香菜、韭菜）等可采取整株（體）蔬菜浸提的方法，減少色素的干擾；

b）含色素明顯的蔬菜樣品（如：蘿卜）在樣品處理中，加1g～2g活性碳振蕩過濾2min，然后提取濾液中的上清液檢測；

c）含纖維素多的蔬菜樣品（如：茭白）等在樣品處理過程中，用密性濾紙過濾，然后提取濾液中的上清液檢測。

[1]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)GB/T 5009.199-2003.

[2]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)GB 2763-2014.

[3]蔣新.果蔬中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留快速檢測方法研究進(jìn)展[J].農(nóng)業(yè)災(zāi)害研究,2013,3（07）:55-57.

[4]劉亞平,張金艷,孫東立.酶抑制率法在4種蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測中的應(yīng)用[J].安徽農(nóng)業(yè)科技,2014,42（2）：427-428,470.

S131+2

B

1005-6114（2017）01-010-003

2016-07-25

田婭（1987-），女，助理農(nóng)藝師，從事農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測工作。