飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉抗氧化能力、免疫力及消化酶活性的影響

張植元，范 澤，魏 東，喬秀亭，白東清，張彥俊，張滕閑

（天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院，天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384）

飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉抗氧化能力、免疫力及消化酶活性的影響

張植元，范 澤，魏 東*，喬秀亭，白東清，張彥俊，張滕閑

（天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院，天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384）

為探究飼料中不同浮萍添加水平對(duì)大正三色錦鯉抗氧化能力、免疫能力以及消化能力的影響。配制浮萍添加水平分別為0%（對(duì)照組）、3%、6%、9%、13%、14%的6種等蛋白（38.6%）飼料，飼養(yǎng)初重為（42.19±1.32）g大正三色錦鯉8周，分別記為Diet 1（0/13）、Diet 2（3/10）、Diet 3（6/7）、Diet 4（9/4）、Diet 5（13/1）、及Diet 6（14/0）6組。每種飼料設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)飼喂10尾魚。結(jié)果表明：（1）飼料中浮萍替代菜粕的量在13%時(shí)，大正三色錦鯉的抗氧化能力最強(qiáng)，肝臟中超氧化物歧化酶（SOD）與過氧化氫酶（CAT）活力較對(duì)照組提高41.99%、20.85%（P＜0.05）。（2）Diet 5（13/ 1）組錦鯉的免疫能力提高并達(dá)到最佳狀態(tài)，血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）與堿性磷酸酶（AKP）較對(duì)照組提高66.61%、73.27%（P＜0.05）。（3）浮萍添加量在13%時(shí)，大正三色錦鯉各項(xiàng)消化酶活性達(dá)到最佳，前腸蛋白酶活性與脂肪酶活性較對(duì)照組提高了38.18%、58.22%（P＜0.05）。因此，建議在飼料中添加13%的浮萍。

大正三色錦鯉；消化酶活性；抗氧化能力；免疫力

錦鯉屬于輻鰭亞綱，鯉形目，鯉科，鯉亞科，鯉屬。錦鯉的體格健碩，色彩絢麗，花紋多變，有很高的觀賞價(jià)值。張璐認(rèn)為雜食性觀賞魚所需要的蛋白質(zhì)含量為40%～45%（張璐，2001）。錦鯉對(duì)于蛋白質(zhì)的需用量，幼魚要比成魚的多，水溫高的要比水溫低的要多。因此飼料中需添加大量的蛋白質(zhì)，而浮萍就是一種蛋白質(zhì)含量很高的植物。浮萍烘干后，粗蛋白質(zhì)含量為35%～50%，幾乎和大豆含量一樣。其經(jīng)濟(jì)價(jià)值主要有兩種，一是可以入藥，一是可以作為飼料成分。雖然在飼料中添加浮萍不是很常見，但在喂養(yǎng)草魚的時(shí)候，會(huì)輔助投食浮萍解決單一使用配合飼料導(dǎo)致魚體后期生長(zhǎng)過快，成活率不高，規(guī)格不齊等問題，還降低了飼料成本（關(guān)洪斌等，2010）。本試驗(yàn)以浮萍作為飼料蛋白源，添加到飼料中飼喂錦鯉，旨在研究其對(duì)錦鯉抗氧化能、免疫能力的影響，以其為浮萍的開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚與飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)魚選自天津藍(lán)科水產(chǎn)有限公司培育的大正三色錦鯉，先對(duì)試驗(yàn)魚經(jīng)行適應(yīng)環(huán)境的馴化，在3 d以后，選取體質(zhì)優(yōu)良、規(guī)格相近、無(wú)傷病，初始體重為（42.19±1.32）g的錦鯉180尾，將其隨機(jī)分為6組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)養(yǎng)殖10條試驗(yàn)魚。養(yǎng)殖水體是曝氣后的自來(lái)水，pH為7.8±0.2，水溫（29±1.1）℃。投餌率3%，每天9∶00和15∶30投喂兩次，試驗(yàn)持續(xù)8周。

1.2 試驗(yàn)飼料 本試驗(yàn)所用的飼料中基礎(chǔ)蛋白質(zhì)有魚粉、豆粕等，浮萍添加水平分別為0%、3%、6%、9%、13%、14%的6種等蛋白（38.6%），分別記為Diet 1（0/13）、Diet 2（3/10）、Diet 3（6/7）、Diet 4 （9/4）、Diet 5（13/1）、及Diet 6（14/0）6組，試驗(yàn)飼料組成與營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（以風(fēng)干為基礎(chǔ)）

1.3 樣本采集 飼養(yǎng)結(jié)束后，對(duì)禁食2 d錦鯉進(jìn)行挑選，每組選20尾魚作為樣品，稱體重、量體長(zhǎng)及體高，之后將其解剖，取其肝胰臟、脾臟、腎臟前中后腸分離后立即速凍，然后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中保存，待測(cè)。

1.4 生化指標(biāo)測(cè)定 肝胰臟等各組織解凍后用預(yù)冷的生理鹽水沖洗干凈并用濾紙吸干后稱重。在預(yù)冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，用移液管加入9倍于組織塊質(zhì)量的預(yù)冷勻漿介質(zhì)（0.85%的氯化鈉注射液），在勻漿器中進(jìn)行勻漿，4℃、4500 r/min離心15 min，取上清液備用。

組織中蛋白質(zhì)含量，淀粉酶和脂肪酶活性測(cè)定試劑盒以及各抗氧化指標(biāo)、免疫指標(biāo)測(cè)定試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。組織中蛋白酶活性測(cè)定采用福林酚法（杜遠(yuǎn)明，2004）。

1.5 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，采用SPASS 18.0對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），若差異達(dá)到顯著水平，則采用Duncan’s法進(jìn)行多重比較，顯著性水平P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉抗氧化能力的影響

2.1.1 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉SOD活力的影響 由表2可知，血清SOD活力整體呈先下降再上升趨勢(shì)，但與其他處理組之間沒有顯著差異（P＞0.05）；各組中腎SOD活力差異均不顯著（P＞0.05）；脾臟SOD活力呈先上升后下降趨勢(shì)，Diet 2 （3/10）組較Diet 1（0/13）組提高了54.62%（P＜0.05）；而與其他處理組之間沒有顯著差異 （P＞0.05）；肝胰臟SOD活力呈先降低再升高再降低的趨勢(shì)，Diet 2（3/10）與Diet 3（6/7）組較對(duì)照組Diet 1（0/13）降低了41.99%、34.90%（P＜0.05）。

表2 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉SOD活力的影響

2.1.2 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉CAT活力的影響 由表3可知，肝胰臟中，Diet 5（13/1）CAT活力最大，且顯著高于 Diet 2（3/10）組，但與其他處理組沒有顯著的差異 （P＞0.05）。脾臟CAT活力整體呈先升高再下降趨勢(shì)，其中Diet 6 （14/0）組較Diet 1（0/13）組提高68.46%（P＜0.05）；中腎中，Diet 5（13/1）CAT活力較Diet 1（0/ 13）組提高37.32%，但沒有顯著差異（P＞0.05）；血清中，Diet 5（13/1）與 Diet 6（14/0）較Diet 1（0/ 13）組提高71.85%、78.78%（P＜0.05）。

2.1.3 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉MDA含量的影響 由表4可知，Diet 5（13/1）組肝臟MDA含量最低，較對(duì)照組降低64.50%（P＜0.05）；整體呈先下降再上升趨勢(shì)，Diet 5（13/1）組中腎MDA較對(duì)照組Diet 1（0/13）降低55.98%，但差異不顯著（P＞0.05）；脾臟中，Diet 5（13/1）組較對(duì)照組降低37.44%（P＜0.05）；血清MDA含量整體呈先上升再下降的趨勢(shì)，且Diet 5（13/1）組較對(duì)照組降低48.29%，但差異不顯著（P＞0.05）。

表3 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉CAT活力的影響

表4 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉MDA含量的影響

2.2 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉免疫力的影響

2.2.1 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉ACP的影響由表5可知，肝胰臟ACP的活力整體呈先下降再上升的趨勢(shì)，Diet 2（3/10）組顯著低于Diet 1（0/13）組（P＜0.05）；脾臟ACP活力各處理組的差異不顯著（P＞0.05）；頭腎ACP中，Diet 5（13/1）組顯著大于其他各組，且較對(duì)照組提高69.82%（P＜0.05）；血清ACP中，Diet 5（13/1）組較對(duì)照組提高了53.65%（P＜0.05）。

表5 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉ACP活力的影響

2.2.2 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉AKP活力的影響 由表6可知，肝胰臟AKP的活力整體呈先上升再下降的趨勢(shì)，各組差異不顯著（P＞0.05）；脾臟中，Diet 5（13/1）組AKP活力顯著高于Diet 1（0/ 13）組，且較之提高了51.34%（P＜0.05）；頭腎中，Diet 5（13/1）組顯著其他各組（P＜0.05），且較對(duì)照組提高33.72%（P＜0.05）；血清中，Diet 5（13/1）與Diet 6（14/0）組顯著高于其他各組，較對(duì)照組分別提高73.27%、70.79%（P＜0.05）。

表6 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉AKP活力的影響

2.2.3 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉GOT活力的影響 由表7可知，肝胰臟GOT的活力整體呈先下降再上升趨勢(shì)，各組差異不顯著 （P＞0.05）；脾臟中，Diet 1（0/13）組GOT活力最小，其他各組較之分別提高了 65.51%、70.95%、71.80%、68.76%、72.79%（P＜0.05）；頭腎中，Diet 5（13/1）與Diet 6（14/0）組GOT的活力均顯著大于對(duì)照組 Diet 1（0/13），較之提高 49.03%、48.76%（P＜0.05）；血清中，Diet 5（13/1）組GOT活力顯著大于Diet 1（0/13）組，且較之提高62.26%（P＜0.05）。

表7 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉GOT活力的影響

2.2.4 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉GPT活力的影響 由表8可知，肝胰臟中，Diet 5（13/1）與Diet 6（14/0）組GPT活力顯著大于對(duì)照組，且較之提高73.36%、68.12%（P＜0.05）；脾臟中，Diet 5 （13/1）與Diet 6（14/0）組GPT活力顯著大于對(duì)照組，且較之提高84.50%、80.84%（P＜0.05）；頭腎中，Diet 5（13/1）與Diet 6（14/0）組顯著大于其他各組，且較對(duì)照組分別提高76.80%、72.29%（P＜0.05）；血清中，Diet 5（13/1）組GPT活力顯著大于對(duì)照組，且較之提高66.61%（P＜0.05）。

表8 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉GPT活力的影響

2.3 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉消化酶活性的影響

2.3.1 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉蛋白酶活性的影響 由表9可知，前腸中，Diet 5（13/1）與Diet 6（14/0）組蛋白酶活性顯著大于對(duì)照組，且較之提高38.18%、36.64%（P＜0.05）；中腸、后腸以及血清中，各組蛋白酶活性差異均不顯著（P＞0.05）。

表9 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉蛋白酶活性的影響

表10 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉淀粉酶活性的影響

2.3.2 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉淀粉酶活性的影響 由表10可知，前腸中，Diet 5（13/1）與Diet 6（14/0）組淀粉酶活性顯著大于其他各組，且較對(duì)照組提高40.61%、31.84%（P＜0.05）；中腸和后腸各處理組之間差異均不顯著（P＞0.05）；血清中，Diet 5（13/1）組淀粉酶活性顯著高于對(duì)照組Diet 1（0/13），且較之提高35.16%（P＜0.05）。

2.3.3 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉脂肪酶活性的影響 由表11可知，前腸中，Diet 5（13/1）組脂肪酶活性顯著高于其他各組，但較對(duì)照組提高58.22%（P＜0.05）；中腸中，Diet 4（9/4）、Diet 5（13/ 1）與Diet 6（14/0）組較對(duì)照組分別提高27.83%、29.76%、27.96%（P＜0.05）；后腸中，各處理組脂肪酶活性差異均不顯著（P＞0.05）；血清中，Diet 5（13/ 1）組與Diet 6（14/0）組差異不顯著，但均顯著高于對(duì)照組，較之提高了61.01%、47.30%（P＜0.05）。

表11 飼料浮萍水平對(duì)大正三色錦鯉脂肪酶活性的影響

3 討論

3.1 不同浮萍添加量對(duì)大正三色錦鯉抗氧化能力的影響 魚體抗氧化能力的強(qiáng)弱可以通過超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）以及丙二醛（MDA）含量多少表示。超氧自由基（O2-）是生物體某些反應(yīng)的中間產(chǎn)物，其化學(xué)性質(zhì)活潑，如果細(xì)胞缺乏自由基的酶時(shí)，機(jī)體會(huì)發(fā)生損傷，SOD和GAT能通過歧化反應(yīng)清除細(xì)胞生成的超氧自由基，從而減少自由基對(duì)機(jī)體的損害。脂質(zhì)過氧化物的主要分解產(chǎn)物為MDA，可以間接地反映組織細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的強(qiáng)度或速率（劉麗等，2008）。抗氧化劑的抗氧化作用主要通過抑制自由基的產(chǎn)生、直接清除自由基，以及通過提高內(nèi)源性抗氧化物質(zhì)的水平來(lái)實(shí)現(xiàn)。浮萍的類胡蘿卜素含量豐富，且葉黃素的含量極高（于斌，2010），而類胡蘿卜素具有很強(qiáng)的抗氧化活性和極強(qiáng)的清除自由基的能力（Ganji等，2005）。本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組抗氧化能力相對(duì)于對(duì)照組均有提高，表明，在錦鯉飼料油脂中浮萍替代菜粕，具有抑制各組織及血清中MDA含量，同時(shí)提高SOD和CAT活力的作用，并且浮萍添加量在13%時(shí)，錦鯉的抗氧化能力達(dá)到最佳狀態(tài)。

3.2 不同浮萍添加量對(duì)大正三色錦鯉免疫能力的影響 動(dòng)物代謝過程中重要的調(diào)控酶有很多，酸性磷酸酶（ACP）和堿性磷酸酶（AKP）就是其中之一。大量研究表明，磷酸酶活力是細(xì)胞和體液免疫的綜合反映，并且性別、年齡、發(fā)育階段對(duì)其存在不同的影響（盧彤巖等，2010）。磷酸酶可催化所有磷酸單酯及磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移，直接參與磷的代謝，對(duì)魚、蝦蟹類鈣質(zhì)的吸取、磷酸鈣沉積、骨骼形成、甲殼素分泌及形成有著重要作用 （孫虎山等，1999）。本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組磷酸酶活力均高于對(duì)照組，說(shuō)明浮萍的添加可促進(jìn)錦鯉細(xì)胞中的物質(zhì)代謝，促進(jìn)其生長(zhǎng)，間接增強(qiáng)其非特異性免疫能力，而綜合各組織磷酸酶結(jié)果，Diet 5（13/1）組表現(xiàn)最高，表明該添加量的浮萍使魚體處于最佳的鈣磷代謝狀態(tài)。谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）在糖、蛋白質(zhì)和脂肪等物質(zhì)代謝過程中起重要作用，是機(jī)體正常生命活動(dòng)不可缺少的酶類之一（崔培等，2013）。本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組GOT、GPT活力均高于對(duì)照組。GPT是反映肝臟是否損傷的主要指標(biāo)，健康動(dòng)物血清中轉(zhuǎn)氨酶濃度較低，當(dāng)肝細(xì)胞膜損傷或肝細(xì)胞壞死時(shí)，血清中GPT濃度增高。而GOT活性升高常反映心臟或肌肉組織發(fā)生障礙。轉(zhuǎn)氨酶活性能夠依營(yíng)養(yǎng)條件而改變，其值能反映氨基酸代謝強(qiáng)度 （崔培等，2013）。本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組GPT和GOT活力與對(duì)照組相比，均有不同程度提高，而Diet 5（13/1）組活力最高，說(shuō)明該添加量的浮萍使魚體轉(zhuǎn)氨酶活力達(dá)到最佳狀態(tài)。

3.3 不同浮萍添加量對(duì)大正三色錦鯉消化酶活性的影響 酶活性是反應(yīng)消化能力最重要的指標(biāo)（石英等，2009）。魚類攝食后，飼料成分會(huì)成為消化酶的底物，影響消化酶的分泌和活力 （楊代勤等，2003）。脂肪是維持魚類生長(zhǎng)、發(fā)育和繁殖的必需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，是必需脂肪酸和能量的主要來(lái)源，又是脂溶性維生素的載體，在魚類生命活動(dòng)過程中發(fā)揮著重要的作用。脂肪在脂肪酶的作用下，分解成甘油酯和自由脂肪酸的混合物而被魚類吸收（Norambuena等，2015）。研究表明，轉(zhuǎn)氨酶活力的增強(qiáng)有利于提高蛋白質(zhì)代謝效率（孫紅梅，2004），本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組的蛋白酶活性較對(duì)照組均有提高，說(shuō)明飼料中浮萍的添加在促進(jìn)錦鯉轉(zhuǎn)氨酶活力提高的同時(shí)，加強(qiáng)了蛋白質(zhì)的代謝，從而提高了體內(nèi)蛋白酶及脂肪酶活性，但對(duì)淀粉酶活性影響不顯著，具體原因還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，飼料浮萍水平在13%時(shí)，錦鯉SOD、CAT活力均顯著高于對(duì)照組，MDA含量顯著低于對(duì)照組，錦鯉的抗氧化能力顯著提高；另外，飼料中添加13%的浮萍，可提高各消化酶的活性，從而促進(jìn)錦鯉細(xì)胞中的物質(zhì)代謝，間接增強(qiáng)其非特異性免疫能力。因此，建議在大正三色錦鯉飼料中添加13%的浮萍替代菜籽粕。

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This experiment was conducted to investigate the effects of dietary duckweed levels（0%，3%，6%，9%，13%and 14%，named as Diet 1（0/13），Diet 2（3/10），Diet 3（6/7），Diet 4（9/4），Diet 5（13/1）and Diet 6（14/0）respectively）on the antioxidant ability，digestive ability and immunity in Tajsho-sanke.A total of 180 average weight of（42.19±1.32）g Tajsho-sanke were randomly allocated to 6 groups with 3 replicates of 10 each.The results showed as follows：（1）compared with the control group，superoxide dismutase（SOD）and catalase（CAT）of hepatopancreas of fish fed with Diet 5（13/ 1）were increased by 41.99 and 20.85%respectively（P＜0.05）.（2）the highest values of glutamic-pyruvic transaminase （GPT）and alkaline phosphatase（AKP）activities of serum were observed in the Diet 5（13/1）group and they were 66.61% and 73.27%higher than the control group（P＜0.05）.（3）the activities of protease and lipase of foregut in the Diet 5（13/1）group were significantly increased by 38.18%and 58.22%（P＜0.05）.Comprehensive antioxidant ability，digestive ability and immunity adding 13%of duckweed feed was the most suitable for the growth of Tajsho-sanke.

Tajsho-sanke；digestive ability；antioxidant ability；immunity

S816.7

A

1004-3314（2017）02-0040-05

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20170210

天津市科技重大專項(xiàng)與工程計(jì)劃項(xiàng)目-優(yōu)質(zhì)錦鯉綜合養(yǎng)殖技術(shù)集成與應(yīng)用（15ZXBFNC00340）

*通訊作者