急性肝損傷大鼠肝組織HSP60的變化及意義

急性肝損傷大鼠肝組織HSP60的變化及意義

曹 東，朱美意，吳江文，周 濤，歐陽軍

目的 觀察大鼠急性肝損傷過程中熱休克蛋白60（heat shock protein 60，HSP60）的變化及其與肝損傷的相關(guān)性。方法 126只清潔級SD大鼠，隨機分為空白組（n=42）、非肝損傷組（n=42）和肝損傷組（n=42）?？瞻捉M不作任何處理；非肝損傷組大鼠進行左腿大腿骨折處理，肝損傷組用改良型BIM-Ⅳ（biological impact machine-Ⅳ）生物撞擊機撞擊誘導急性肝損傷。各組處理后于6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d取血液檢測丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase, ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase, AST）水平；之后殺鼠取肝，蘇木精—伊紅染色法（hematoxylin-eosin,HE）染色觀察肝組織病理變化；免疫組化染色檢測HSP60蛋白表達。結(jié)果 （1）空白組與非肝損傷組在上述各時間段的ALT、AST表達水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；與空白組及非肝損傷組相比，肝損傷組于6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d血清ALT、AST含量顯著增高（P＜0.05），且在6 h顯著升高[（104.17±4.07）U/L，（271.00±15.84）U/L]，12 h達到頂峰[（424.50±10.84）U/L，（787.70±32.68）U/L]，之后不斷下降，在3 d時恢復正常；（2）HE染色示，肝損傷組肝小葉結(jié)構(gòu)排列紊亂，氣球樣變明顯，在12 h最為明顯；（3）免疫組化HSP60染色，肝損傷組織在6 h開始顯著高于空白組和非肝損傷組，12 h達到頂峰，1～3 d持續(xù)高于空白組和非肝損傷組，5 d時恢復正常水平；（4）HSP60蛋白表達與血清中ALT（r=0.9064，P＜0.05)、AST（r=0.9294, P＜0.05）表達呈正相關(guān)。結(jié)論 大鼠急性肝損傷過程中HSP60的表達量有明顯的動態(tài)變化規(guī)律, 與大鼠肝臟損傷程度變化一致。

大鼠；肝損傷； HSP60；丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶；天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶

熱休克蛋白（ heat shock proteins, HSPs） 是生物體在受到缺氧、感染、寒冷、中毒、機械損傷等刺激時發(fā)生應激反應而合成的高度保守的蛋白質(zhì)，廣泛存在于微生物和動、植物體內(nèi)[1]。1962年Ritossa將果蠅幼蟲的飼養(yǎng)溫度從25℃提高到30℃后30 min,觀察到其唾液腺染色體上出現(xiàn)了特殊的“膨突”[2]。直到1974 年，Tissieres研究證實這種現(xiàn)象是因為溫度升高增強了這一區(qū)域的基因轉(zhuǎn)錄，相應生成了一系列蛋白質(zhì)，被命名為HSPs[3]。HSPs按照蛋白分子量不同分為五類，分別是HSP100、HSP90、HSP70、HSP60和小分子熱休克蛋白[4]。早期研究證明，HSPs具有保護細胞不受刺激傷害，并促進細胞在各種刺激引起的損傷中自我修復的功能[5]。其中HSP60是線粒體蛋白，不僅在細胞周期進程和細胞程序性死亡中起著重要的作用，而且在翻譯后的蛋白質(zhì)修飾過程中可作為分子伴侶，幫助重新折疊錯誤構(gòu)象的多肽鏈和蛋白質(zhì)，還可以幫助清除已經(jīng)發(fā)生不可逆損傷的蛋白，具有變性蛋白優(yōu)先結(jié)合能力，從而保護細胞不受應激傷害[6]。肝臟是人體最大的腺體，參與體內(nèi)消化、代謝、排泄、排毒及免疫等多種功能?，F(xiàn)代工業(yè)的發(fā)展、生活方式的改變及各種暴力所致的肝損傷乃至肝病、肝衰竭嚴重影響患者預后。肝臟損傷或部分切除后，其預后主要取決于肝臟損傷后的修復再生能力。而肝臟再生能力的基礎(chǔ)是其具有的結(jié)構(gòu)與功能的可塑性，然而，肝細胞再生修復可塑性的分子機制至今仍未完全闡明。本實驗主要研究HSP60蛋白在生物撞擊誘導的大鼠急性肝損傷中的動態(tài)變化規(guī)律，進一步探討HSP60蛋白在急性肝損傷中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 取8周齡、清潔級雌性SD大鼠126只，體重（180±20）g，由新疆醫(yī)科大學動物飼養(yǎng)中心提供，實驗動物許可證號[XJZZQ（XK）200301]。

1.2 試劑和儀器 2%戊巴比妥鈉（45 mg/kg）；肝素（20 U/ml）；免疫組織化學鏈霉素卵白素（streptavidinperosidase，SP）試劑盒（北京博奧森生物技術(shù)有限公司）；HSP60抗體（一抗為單克隆抗體，型號UB59457,購自于美國Abcam公司，相應二抗購于北京中杉金橋公司）；丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase, ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase, AST）試劑盒（北京中杉金橋公司）；BIM-Ⅳ型生物撞擊機改良型：由鋼球、鋼管、二次撞擊頭、動物固定臺、支架等組成；多功能生理監(jiān)護儀（上海玉研科學儀器有限公司）；Sartorius電子天平（深圳朗普電子科技有限公司）；鼠板；CHK Olympus 顯微鏡 （Olympus 公司，日本）。

1.3 分組和模型制備 將大鼠適應性喂養(yǎng)1周，實驗前8 h禁食，不禁水，并經(jīng)普通觀察無異常后，將 126 只大鼠采用區(qū)組隨機化的方法分為3組：空白組、非肝損傷組、肝損傷組，每組 42 只；各組又隨機化分亞組6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d，每組6只；大鼠先用2%戊巴比妥鈉腹腔內(nèi)注射麻醉后，取仰臥位固定于鼠板，腹部及右腹股溝部備皮。分離右股動脈并肝素化。右股動脈插管，通過壓力傳感器連接于多功能生理監(jiān)護儀，監(jiān)測心率及血壓并用于取血。插管成功后，空白組不給予任何干預措施；非肝損傷組機械外力致傷大鼠左大腿造成骨折；肝損傷組將其置于BIM-Ⅳ改良型生物撞擊機打擊頭下，采用質(zhì)量363 g的鋼球自撞擊機導管1 m高處以自由下落的方式對打擊頭進行撞擊，打擊頭直徑1.2 cm。打擊頭獲得動能和動量，對動物劍突與右肋弓夾角處行二次打擊致肝臟鈍性撞擊破裂傷。

撞擊過程的動力學參數(shù)：撞擊動能E=mgh，g=9.8 m/s2；撞擊動量P=mv；撞擊速度v= 2gh≈4.427 m/s；自由落體運動時間T≈0.452 s；打擊面積S=πr2≈3.14×0.62=1.1304 cm2；E=0.363×9.8×1≈3.557 J，P=0.363×4.427≈1.607 kg/（m·s）。

各組大鼠于處理后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d股動脈取血2 ml裝于促凝管中，血液室溫靜置30 min后3000 r/min離心10 min，取血清（即造模后血清）分裝4℃保存,待統(tǒng)一進行血清指標檢。取血后處死大鼠，分離出肝臟標本，置于10%甲醛溶液中固定，石蠟包埋。

1.4 血清肝功能 血清ALT、AST含量測定，均按照試劑盒說明書操作，采用全自動生化分析儀檢測。

1.5 肝組織病理學觀察 取肝組織石蠟塊，制備切片（4～10 μm），蘇木精—伊紅染色法（hematoxylin-eosin stainin，HE）染色，顯微鏡下觀察（×200）肝組織病理學變化。

1.6 免疫組化檢測HSP60表達 取肝組織石蠟塊，切片（4～10 μm），脫蠟后EDTA抗原修復液高壓修復法修復抗原，恢復室溫后3%的H2O2滅活內(nèi)源性過氧化物酶，蒸餾水洗 3次，血清封閉液37℃封閉30 min，加入一抗[抗體濃度1∶200，溶于磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline，PBS）中]，4℃孵育過夜后用PBS洗滌3次，再加二抗室溫孵育30 min，用PBS洗滌3次，最后二氨基聯(lián)苯氨（diaminobezidin，DAB）顯色，HE輕度復染。脫水，透明，封片，光鏡觀察。每次實驗均以PBS替代一抗體作為陰性對照。

1.7 評定標準 細胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒判定為HSP60蛋白染色陽性。結(jié)果由2位病理醫(yī)師獨立判定評分，在高倍鏡下隨機取五個視野，免疫組化得分（immunoreactivity score，IS）由染色面積×染色強度來判斷。A為染色面積，按切片中顯色細胞比例評分，1分為顯色細胞占切片中細胞總數(shù)的1/3 以下；2 分為1/3～2/3細胞顯色；3分為2/3 以上細胞顯色。B為染色強度，按切片中細胞顯色有無及深淺評分，0分為細胞無著色；1分為顯色淺黃色；2分為顯色深黃色；3分為顯色棕褐色。每例樣本IS積分=A×B，按積分高低區(qū)分，＜1分為陰性（－）；2～4分為陽性（+）；＞5分為強陽性（++）。

1.8 統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0進行分析，計量資料以x ±s表示，其中符合正態(tài)分布的計量資料,三組間差異比較采用單因素ANOVA檢驗，組間兩兩比較采用LSD檢驗進行。正態(tài)分布資料采用Pearson相關(guān)，非正態(tài)分布資料采用Spearman相關(guān)分析。所有檢驗以雙側(cè)P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 三組處理對大鼠肝功能影響 為觀察誘導的急性肝損傷鼠肝臟功能的動態(tài)變化，用生化法檢測大鼠血清ALT、AST水平?？瞻捉M、非肝損傷組及肝損傷組大鼠在處理后6、12 h及1、2、3、5、7 d時血清ALT、AST水平的變化，見表1。在各個時間段，非肝損傷組大鼠肝臟ALT、AST水平與空白組比較，差異無統(tǒng)計學意義；在6 h時，肝損傷組ALT、AST水平較空白組及非肝損傷組有顯著升高（P＜0.05），并且在12 h時ALT水平達到高峰（P＜0.05），提示造模成功；在 1、2 d時，肝損傷組ALT、AST水平有所下降，但仍顯著高于空白組及非肝損傷組 （P＜0.05），3 d時肝損傷組ALT、AST表達仍高于空白組及非肝損傷組，但差異無統(tǒng)計學意義；5、7 d時ALT、AST表達恢復正常水平，其他組間差異無統(tǒng)計學意義。

2.2 三組處理后大鼠肝臟組織病理學的變化 為了進一步確定肝組織損傷情況，采用HE染色檢測肝組織病理損傷情況，結(jié)果顯示，空白組和非肝損傷組大鼠肝組織肝小葉結(jié)構(gòu)正常、排列整齊；肝損傷組6 h時肝小葉結(jié)構(gòu)排列紊亂，鏡下肝細胞腫脹氣球樣，肝細胞點狀和小片狀壞死；肝損傷組12 h時，肝細胞發(fā)展為大片狀壞死，由圖可見本研究成功地建立了急性肝損傷模型（圖1）。

2.3 各實驗組大鼠肝組織HSP60的表達 采用免疫組化技術(shù)觀察急性肝損傷大鼠肝臟HSP60表達的動態(tài)變化（圖2、圖3），結(jié)果發(fā)現(xiàn)，空白組和非肝損傷組大鼠肝臟中HSP60均有一定的基礎(chǔ)表達，但兩組表達差異無統(tǒng)計學意義；肝損傷組大鼠在處理后6 h的HSP60表達顯著增強（P＜0.05），12 h達到高峰（P＜0.05）； 1、2、3 d時肝細胞特異性染色明顯減弱，但仍高于空白組和非肝損傷組（P＜0.05）；5、7 d時HSP60表達恢復到基礎(chǔ)水平。

表1 三組處理后大鼠的血清ALT、AST表達

圖1 三組急性肝損傷大鼠肝臟病理切片（HE×200）

圖2 三組處理后大鼠肝臟組織HSP60蛋白表達（免疫組化染色×200）

圖3 三組處理后大鼠肝臟組織HSP60蛋白表達免疫組化評分

2.4 HSP60與肝損傷的相關(guān)性 相關(guān)性分析顯示：HSP60表達與肝損傷大鼠血清中ALT之間存在顯著的正相關(guān)（r=0.9064, P＜0.05，圖4），同時HSP60與肝損傷大鼠血清AST也呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.9294, P＜0.05，圖5）。

3 討 論

圖4 HSP60表達與肝損傷大鼠血清中ALT呈正相關(guān)性（Person相關(guān)）

圖5 HSP60表達與肝損傷大鼠血清AST呈正相關(guān)性（Person相關(guān)）

急性肝損傷是由于各種肝臟相關(guān)疾病、藥物性肝損傷、大量飲酒、鈍性撞擊等所誘導的急性病變，如不及時治療可發(fā)展為急性肝功能衰竭，病死率高[7]。因此，早期診斷、治療急性肝功能損傷在臨床上具有十分重要的意義。急性肝損傷可刺激機體產(chǎn)生應激反應，通過各種信號分子的傳導從而增強機體的保護能力[8]。近年研究表明，預熱和缺血預處理都會使肝臟組織HSP增加，HSPs在肝臟應激中起保護作用[9，10]。如在受熱刺激的肉雞肝臟中，HSP90累積，提高肝臟的耐熱性[11]。大鼠經(jīng)熱休克處理24 h后，其心、肝、腦、肺、腎等五種組織中的HSP70含量均較正常對照組顯著增加。在肝臟手術(shù)切除創(chuàng)傷研究中發(fā)現(xiàn)，HSP70表達的量與創(chuàng)傷程度呈正相關(guān)，因此，HSP70可作為評斷手術(shù)創(chuàng)傷嚴重程度的指標。HSP70在大鼠酒精性肝損傷中同樣具有重要的保護作用。相對于HSP70而言，HSP60作為熱休克蛋白家族重要的一員，其在肝臟損傷及修復過程中的變化及作用卻一直未被研究。因此，本研究制備了生物撞擊機撞擊誘導大鼠急性肝損傷的模型，觀察空白組、非肝損傷組和肝損傷組大鼠肝臟組織的病理變化，檢測了各組大鼠血清 ALT、AST 的變化趨勢及肝組織中HSP60的動態(tài)表達，從而探討HSP60在生物撞擊誘導的大鼠急性肝損傷和肝再生中的作用。肝臟病理組織學結(jié)果和各組血清ALT、AST的變化趨勢進一步證明了大鼠急性肝損傷的病理過程中伴隨著肝臟的再生修復過程。在這個過程中，HSP60的表達量也隨著急性肝損傷的加重，呈現(xiàn)出一定變化規(guī)律，說明HSP60可能與肝臟的應激保護機制存在密切聯(lián)系。

ALT、AST主要分布于肝組織肝細胞的細胞漿和線粒體中，而血清中ALT、AST含量很少。當肝實質(zhì)細胞受損或壞死時，細胞膜通透性增加并導致線粒體損傷，胞質(zhì)中ALT、AST大量流出，血清中ALT、AST水平就明顯升高，提示肝細胞破壞，所以ALT、AST是肝細胞損傷的敏感指標[12]。本實驗過程中,肝損傷組采用生物撞擊法處理大鼠，與空白組比較,血清中ALT、AST含量顯著增高,提示肝細胞受損嚴重；而肝損傷組與非肝損傷組比較, ALT、AST 的增加，并且非肝損傷組ALT、AST水平與空白組無差別，說明ALT、AST升高主要由肝損傷引起，從而排除生物撞擊引起其他組織損傷對ALT、AST水平的影響。進一步肝組織病理學檢測發(fā)現(xiàn)，肝損傷組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)破壞及肝細胞腫脹、壞死，空白組和非肝損傷組肝組織正常。

HSP60是熱休克蛋白家族的一員，是一種線粒體蛋白，也是在機體損傷刺激導致的應激反應中起保護作用的一類高度保守的蛋白質(zhì)[13]。HSP60在大鼠睪丸的缺血－再灌注后，表達高于正常水平，而相應的細胞凋亡減少，因此推測HSP60在缺血狀態(tài)應激高表達，暫時抑制細胞凋亡，保護機體以減少損傷，這共同說明HSP60在機體損傷過程中起保護作用[14]。這可能與HSP60的各種重要生物學保護功能有關(guān)[15]：（1）分子伴侶作用，HSP10通過結(jié)合HSP60來調(diào)節(jié)其與底物的結(jié)合及三磷酸腺苷（adenosinetriphosphatase，ATP）酶的活性，從而幫助重新折疊錯誤構(gòu)象的多肽鏈和蛋白質(zhì)，并且?guī)椭宄l(fā)生不可逆損傷的蛋白，使細胞不受應激傷害。（2）抗細胞凋亡的作用，有直接和間接兩種方式。直接作用是指HSP60影響線粒體內(nèi)的凋亡相關(guān)因子，抑制線粒體凋亡通路的激活；間接作用為HSP60通過維持正常的呼吸鏈運作，減少自由基的產(chǎn)生從而抑制凋亡。（3）抗氧化作用，應激時氧自由基增多，通過氧化脂質(zhì)會對生物膜的液態(tài)性、流動性、通透性產(chǎn)生影響，而對細胞及亞細胞器如線粒體、溶酶體等造成破壞。HSP60與脂膜結(jié)合，防止自由基對脂膜的損傷。另外，HSP60可直接釋放和增加內(nèi)源性過氧化酶如超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）水平，催化氧自由基發(fā)生歧化反應從而清除氧自由基。本實驗結(jié)果證實，在急性肝損傷中，HSP60表達量與肝損傷進程密切相關(guān)：6、12 h, 肝損傷組ALT、AST不斷增加，說明肝損傷逐漸加重，HSP60的表達量逐漸上升，可能是其對肝臟保護作用逐漸增強的表現(xiàn)。12 h后，血清標記物ALT、AST和組織觀察肝臟的損傷程度也逐漸降低，HSP60的表達量開始下降，說明可能隨著肝損傷逐漸得到修復，HSP60的保護作用下降；肝損傷在第3天恢復至正常，HSP60蛋白在第5天恢復正常，說明在肝損傷恢復正常過程中，HSP60的保護作用也逐漸消失。在整個急性肝損傷過程中, HSP60的表達量也隨著肝損傷的加重或修復，呈現(xiàn)出一定變化規(guī)律，說明HSP60可能與肝臟的應激保護機制有關(guān)。綜上所述，在生物撞擊處理誘導的急性肝損傷過程中，肝臟產(chǎn)生HSP60增多與肝損傷程度呈正相關(guān)，因此HSP60可作為急性肝損傷的分子標記物，并可能在肝損傷過程中起保護作用，但其在肝損傷修復過程中的具體作用機制，仍有待深入研究。

[1]陳明帥，徐 超，宋新超.熱休克蛋白的研究進展[J].經(jīng)濟動物學報，2016, 20（1）：44-53. DOI: 10.13326/j. jea.2016.1116.

[2]Luo J, Shen W L, Montell C. TRPA1 mediates sensation of the rate of temperature change in Drosophila larvae [J]. Nat Neurosci, 2017, 20（1）: 34-41. DOI: 10.1038/nn.4416.

[3]喻荷淋，陳 雋.熱休克蛋白在動脈粥樣硬化中的作用研究進展[J].重慶醫(yī)學，2013, 42（5）：585-587. DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2013.05.042.

[4]栗振義，龍瑞才.植物熱激蛋白研究進展[J].生物技術(shù)通報, 2016, 32（2）: 7-13. DOI: 10.13560/j.cnki.biotech. bull.1985.2016.02.003.

[5]Yan Z, Wei H, Ren C, et al. Gene expression of Hsps in normal and abnormal embryonic development of mousehindlimbs [J]. Hum Exp Toxicol, 2015, 34（6）: 563-574. DOI: 10.1177/0960327114555927.

[6]Shi J, Fu M, Zhao C, et al.Characterization and function analysis of Hsp60 and Hsp10 under different acute stresses in black tiger shrimp, Penaeus monodon [J]. Cell Stress and Chaperones, 2016, 21（2）: 1-18. DOI: 10.1007/s12192-015-0660-6.

[7]齊 芬，任曉非，許建明.急性藥物性肝損傷的臨床研究[J].安徽醫(yī)藥, 2016, 20（8）: 1603-1605. DOI: 10.3969/j.issn.1008-1704.2016.05.003.

[8]陳欣黎，孟 強，劉克辛. STAT3信號通路在肝損傷保護中的作用[J].世界華人消化雜志, 2014（8）: 1051-1057. DOI: 10.11569/wcjd.v22.i8.1051.

[9]張 翌，蔡 遜，潘明新. 供肝缺血預處理保護作用的實驗研究[J].華南國防醫(yī)學雜志，2011, 25（3）: 181-183.

[10]韓效帆, 張培建.熱休克蛋白70保護肝缺血再灌注損傷的研究進展[J]. 中國普通外科雜志, 2013, 22（1）: 98-103. DOI: 10.7659/j.issn.1005-6947.2013.01.023.

[11]雷 蕾, 鮑恩東.急性熱應激肉雞組織中Hsp90的表達與應激損傷[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學, 2008, 41（11）：3816-3821. DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.11.050.

[12]雷 箴，溫 韜.松果菊苷對刀豆蛋白A所致急性肝損傷小鼠的保護作用及對細胞外組蛋白的影響[J].解放軍醫(yī)學雜志， 2016, 41（2）: 97-102. DOI: 10.11855/j. issn.0577-7402.2016.02.03.

[13]張國銳,王元星.誘導熱休克蛋白70形成預處理對心肌保護的研究進展[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生, 2016, 32（14）: 2199-2201. DOI: 10.3969/j.issn.1009-5519.2016.14.029.

[14]周利敏,姚冬梅.小鼠睪丸缺血-再灌注損傷過程中Hsp60的變化及其作用[J]. 成都醫(yī)學院學報，2013，8（6）: 640-643. DOI: 10.3969/j.issn.1674-2257.2013.06.002.

[15]Speciale A, Chirafisi J, Saija A. Nutritional antioxidants and adaptive cell responses: an update [J]. Current Molecular Med, 2011, 11（9）: 770-789. DOI：10.2174/ 156652411798062395.

（2016-11-30收稿 2016-01-10修回）

（本文編輯 羅發(fā)菊）

Changes and significance of hepatic HSP60 in acute liver injury in rats

CAO Dong, ZHU Meiyi, WU Jiangwen, ZHOU Tao, and OUYANG Jun. Department of Emergency, The First Affiliated Hospital of Medical College, Shihezi University, Xinjiang Uygur Autonomous Region, Shihezi 832000, China

OUYANG Jun, E-mail：ouyang-jzk@163.com

Objective This study was designed to observe the changes of heat shock protein 60 (HSP60) in the development of acute hepatic injury and analyze the relationship between HSP60 and acute hepatic injury in rats. Methods 126 SD rats were randomly allocated into three groups: blank control group, non-liver injury group and liver injury group. Rats in the control group received no injury, rats in the non-liver injury group received a left leg fracture and rats in the liver injury group received an acute hepatic injury induced by a modified biological impact machine-IV(BIM-Ⅳ). Blood samples from the three groups were collected at 6 hours, 12 hours, 1 day, 2 days, 3 days, 5 days and 7 days to determine the alanine aminotransferase (ALT) and aspartate transaminase (AST) levels. The samples were cut and the livers of rats were disected soon after, and pathomorphological changes of liver tissue samples were examined under a microscope by means of hematoxylin-eosin (HE) stainning. Immunohistochemical staining was also used to detect the changes of HSP60 during acute liver injury in rats. Results (1) The levels of ALT and AST in non-hepatic injury group did not significantly change compared to the control group at each time point as mentioned above（P＞0.05）. Compared with the blank group and non-liver injury group, the serum ALT and AST levels in liver injury group were significantly higher at 6 hours, 12 hours, 1 day, 2 days, 3 days, 5 days and 7 days respectively (P＜0.05 ), and they increased significantly at the 6 hour mark [(104.17±4.07) U/L, (271.00±15.84) U/L] and peaked at 12 hours [(424.50±10.84) U/L, (787.70±32.68) U/L], then went down and returned normal levels on the 3rd day. (2) HE staining showed inflammatory cell infiltration and cell degeneration in hepatic injury group, the damage was most marked at 12 hours. (3) The immunohistochemical staining showed the levels of HSP60 in the hepatic injury group was significantly increased compared to the control group at both the 6 and 12 hour mark and reached the its highest level at 12 hours. The expression of HSP60 went down on the 1st, 2nd, and 3rd day, but was still higher than the control group until the 5th day, when it returned to the basal level. (4) There was significant correlation between the level of HSP60 and ALT (r=0.9064, P＜0.05) and AST (r=0.9294, P＜0.05). Conclusions The expression of HSP60 significantly changes during acute liver injury, which is consistent with the change of degree of liver injury in rats.

rats; hepatic injury; heat shock protein 60; alanine aminotransferase; aspartate aminotransferase

R332；R364

10.13919/j.issn.2095-6274.2017.02.004

國家自然科學基金（81560312）

832000，新疆維吾爾自治區(qū)石河子大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院急診科

歐陽軍，E-mail：ouyang-jzk@163.com