不同方法測(cè)定齊墩果酸脂質(zhì)體的包封率

羅 肖，徐小超，高男男，何仲貴*

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不同方法測(cè)定齊墩果酸脂質(zhì)體的包封率

羅 肖1，徐小超2，高男男1，何仲貴2*

（1. 沈陽(yáng)藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧沈陽(yáng)，110016；2. 沈陽(yáng)藥科大學(xué)藥學(xué)院，遼寧沈陽(yáng)，110016）

目的建立齊墩果酸脂質(zhì)體包封率測(cè)定方法。方法建立高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定齊墩果酸脂質(zhì)體含量的分析方法，并分別采用低速離心法、過(guò)膜法、陰離子交換樹(shù)脂-微柱離心法和微柱離心法來(lái)分離脂質(zhì)體和游離藥物，比較該4種方法測(cè)定脂質(zhì)體包封率的結(jié)果。結(jié)果低速離心法、過(guò)膜法和陰離子交換樹(shù)脂-微柱離心法都不能將脂質(zhì)體和游離藥物完全分離，不適合齊墩果酸脂質(zhì)體包封率的測(cè)定。微柱離心法測(cè)得脂質(zhì)體的包封率為( 85.36±0.21 )%(=3)。結(jié)論最終選擇微柱離心法測(cè)定脂質(zhì)體包封率，該方法簡(jiǎn)便易行、準(zhǔn)確可靠，可作為齊墩果酸脂質(zhì)體的包封率測(cè)定方法。

藥劑學(xué)；脂質(zhì)體；高效液相色譜；齊墩果酸；包封率

齊墩果酸（oleanolic acid，簡(jiǎn)稱(chēng)OA，化學(xué)結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1），又名慶四素，具有保肝降酶、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、降血糖血壓、抗心律失常、抑制血小板聚集和抗多氧化等多方面的藥理作用[1]，目前主要用于治療急性黃疸型肝炎和慢性病毒性肝炎以及抗結(jié)核輔助用藥。。

脂質(zhì)體作為一種新型藥物載體，以其能夠提高難溶性藥物的溶解性、保護(hù)被包封藥物、促進(jìn)腸黏膜吸收等優(yōu)勢(shì)成為研究的熱點(diǎn)。齊墩果酸由于溶解度低、腸黏膜透過(guò)性差和嚴(yán)重的肝腸首過(guò)效應(yīng)，導(dǎo)致生物利用度很低且個(gè)體間差異大[2]。為了提高其生物利用度，作者制備了齊墩果酸脂質(zhì)體，建立了齊墩果酸體外分析方法，并考察低速離心法、過(guò)膜法和微柱離心法3種測(cè)定包封率的方法，以選出最合適的齊墩果酸脂質(zhì)體包封率測(cè)定方法。

Fig.1 Structure of oleanolic acid

1 儀器與材料

2695 Waters高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司），KQ-100超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司），RE-52 A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、SZ-96 A自動(dòng)純水蒸餾器（上海亞榮生化儀器廠(chǎng)），JY92-2D超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（寧波新芝科器研究所），AR1140電子分析天平（美國(guó)Ohaus公司），ZEN 1600粒徑測(cè)定儀（英國(guó)Malvern儀器有限公司），EU-pH 700 pH計(jì)（美國(guó)Eutech公司），LDZ5-2低速自動(dòng)平衡離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠(chǎng)）。

齊墩果酸（四川世坤藥物原料有限公司，純度質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98.00%，批號(hào)20130212），注射級(jí)大豆卵磷脂（上海太偉藥業(yè)有限公司，純度質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98.00%，規(guī)格100 g，批號(hào)20140202），膽固醇（天津博迪化工有限公司，純度質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.6%，批號(hào)20110712），葡聚糖凝膠G-50（上海如吉生物科技有限公司，規(guī)格25 g），磷酸二氫鉀、氫氧化鈉（天津博迪化工有限公司），甲醇（天津康科德化學(xué)試劑廠(chǎng)），磷酸（分析純，沈陽(yáng)化學(xué)試劑廠(chǎng)），二次重蒸水（實(shí)驗(yàn)室自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 空白脂質(zhì)體的制備

取處方量的大豆卵磷脂和膽固醇，溶于一定量的二氯甲烷中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)，溶劑蒸干后呈半透明均勻薄膜，然后將pH值7.4的磷酸鹽緩沖液作為水化介質(zhì)，于45 ℃下水化，探頭超聲后，即得空白脂質(zhì)體混懸液。

2.2 齊墩果酸脂質(zhì)體的制備

取處方量的大豆卵磷脂、齊墩果酸和膽固醇，溶于一定量的二氯甲烷中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)，溶劑蒸干后呈半透明均勻薄膜，然后將pH值7.4的磷酸鹽緩沖液作為水化介質(zhì)，于45 ℃下水化，探頭超聲，即得齊墩果酸脂質(zhì)體混懸液。經(jīng)動(dòng)態(tài)激光散射法測(cè)得脂質(zhì)體的平均粒徑為163.7 nm，多分散指數(shù)為0.3，zeta電位為-30.6 mV。

2.3 HPLC法測(cè)定齊墩果酸脂質(zhì)體中的藥物含量

2.3.1 色譜條件

色譜柱：COSMOSIL 5 C18-AR-Ⅱ柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-體積分?jǐn)?shù)0.2%磷酸水溶液（體積比90∶10）；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：215 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.3.2 對(duì)照溶液的配制

取齊墩果酸原料藥約40 mg，精密稱(chēng)定。置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻作為儲(chǔ)備液備用。精密量取齊墩果酸對(duì)照儲(chǔ)備液1.0 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配制成質(zhì)量濃度為40 mg·L-1齊墩果酸溶液，作為對(duì)照溶液。

2.3.3 供試溶液的配制

精密吸取齊墩果酸脂質(zhì)體溶液0.2 mL，置于10 mL量瓶中，加入適量甲醇，超聲使脂質(zhì)體破壞，然后甲醇定容至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過(guò)濾，作為供試溶液。

2.3.4 方法專(zhuān)屬性試驗(yàn)

取空白脂質(zhì)體0.2 mL，按“2.3.2”和“2.3.3”條方法配制對(duì)照溶液和供試溶液，其對(duì)照溶液和供試溶液終質(zhì)量濃度均為40 mg·L-1。分別取空白溶劑、對(duì)照溶液和供試溶液各20 μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)圖2。

Fig. 2 HPLC chromatograms of solvent (A), blank liposome (B), oleanolic acid (C) and oleanolic acid-liposome (D)

齊墩果酸的出峰時(shí)間約為7.7 min，結(jié)果表明，空白溶劑和空白脂質(zhì)體不干擾齊墩果酸的測(cè)定。

2.3.5 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備

精密稱(chēng)取一定量的齊墩果酸粉末，加甲醇溶解制成質(zhì)量濃度為200 mg·L-1的儲(chǔ)備液。精密量取一定量?jī)?chǔ)備液用甲醇稀釋成質(zhì)量濃度分別為8、20、40、80、160和200 mg·L-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精密量取上述溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積，以質(zhì)量濃度（，mg·L-1）為橫坐標(biāo)，峰面積（）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程為=5 735.4-3 755.5，2=0.999。結(jié)果表明，齊墩果酸的質(zhì)量濃度在8~200 mg·L-1內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.3.6 色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取質(zhì)量濃度為40 mg·L-1的齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果表明，6次進(jìn)樣后峰面積RSD為0.34%，表明儀器精密度良好。

2.3.7 方法穩(wěn)定性考察

準(zhǔn)確配置質(zhì)量濃度為40 mg·L-1的齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，于室溫下放置，分別于0、2、4、6、8和12 h按“2.3.1”條色譜條件測(cè)定齊墩果酸峰面積并計(jì)算齊墩果酸含量。結(jié)果表明，12 h內(nèi)峰面積RSD為0.56%，可知溶液在室溫下12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.8 精密度試驗(yàn)

取“2.3.5”條系列標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)溶液中的低（20 mg·L-1）、中（40 mg·L-1）、高（160 mg·L-1）3種質(zhì)量濃度的齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)質(zhì)量濃度的樣品分別測(cè)定3次，記錄色譜圖和峰面積。計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）作為日內(nèi)精密度；另外同一樣品連續(xù)測(cè)定3 d，計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）作為日間精密度，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果精密度RSD值小于2%，可知儀器精密度良好。

Table 1 Precision of the method for determination of oleanolic acid

2.3.9 回收率試驗(yàn)

分別精密稱(chēng)定齊墩果酸約3.2、4.0 和4.8 mg各3份，置于100 mL量瓶中，按處方量加入空白脂質(zhì)體，用甲醇定容，搖勻，然后按“2.2.2”條方法配制對(duì)照溶液。分別取供試溶液和質(zhì)量濃度為40 mg·L-1的對(duì)照溶液各20 μL注入高效液相色譜儀，記錄峰面積。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品濃度，并計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果平均回收率為99.97%，RSD小于2%，可知回收率良好。

Table 2 Recovery of oleanolic acid by HPLC

2.4 測(cè)定齊墩果酸脂質(zhì)體包封率方法學(xué)的考察

2.4.1 齊墩果酸與空白脂質(zhì)體混懸液的制備

取處方量的齊墩果酸，溶于一定量的二氯甲烷中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)，溶劑蒸干后，加入pH值7.4的磷酸鹽緩沖液，于45 ℃下旋轉(zhuǎn)溶解齊墩果酸，然后探頭超聲得齊墩果酸混懸液。精密量取上述混懸液5 mL置于量瓶中，用空白脂質(zhì)體定容至10 mL，振蕩混勻，即得含齊墩果酸與空白脂質(zhì)體的混懸液。

2.4.2 分離度的計(jì)算

不同的脂質(zhì)體包封率測(cè)定的分離度計(jì)算公式如下：分離度 =（1-樣/總）×100%。

式中樣為齊墩果酸與空白脂質(zhì)體混懸液經(jīng)過(guò)處理后，測(cè)得的游離藥物質(zhì)量濃度；總為未經(jīng)處理的藥物總質(zhì)量濃度。

2.4.3 低速離心法對(duì)游離藥物和脂質(zhì)體分離作用的考察

取 “2.4.1”條下所制備的混懸液5 mL，精密量取上清液0.2 mL，加入甲醇溶解并定容至10 mL，測(cè)定游離藥物總量。另取“2.4.1”條下所制備的混懸液5 mL，于3 500 r·min-1離心10 min，精密量取上清液0.2 mL，加入甲醇溶解并定容于10 mL的量瓶中，測(cè)定未被沉淀的游離藥物含量?？疾斓退匐x心是否能將脂質(zhì)體與游離藥物完全分離，平行操作3次。結(jié)果表明，低速離心法對(duì)游離藥物與脂質(zhì)體的分離度為80.05%、81.21%和81.07%。說(shuō)明低速離心法不能將脂質(zhì)體與游離藥物完全分離，故此方法不適合測(cè)定齊墩果酸脂質(zhì)體的包封率。

2.4.4 過(guò)膜法對(duì)游離藥物和脂質(zhì)體分離作用的考察

取“2.4.1”條下所制備的混懸液5 mL，精密量取上清液0.2 mL，加入甲醇溶解并定容至10 mL，測(cè)定游離藥物總量。另取“2.4.1”條下所制備的混懸液5 mL，用0.22 μm的微孔濾膜過(guò)濾，精密吸取上述續(xù)濾液0.2 mL加入甲醇溶解并定容于10 mL的量瓶中，測(cè)定未被濾膜濾過(guò)的游離藥物的含量，考察微孔濾膜對(duì)游離藥物和脂質(zhì)體的分離作用。結(jié)果表明，過(guò)膜法對(duì)游離藥物和脂質(zhì)體的分離度為88.02%、87.98%和89.01%。說(shuō)明過(guò)膜法不能將脂質(zhì)體與游離藥物完全分離，此方法不適合測(cè)定齊墩果酸脂質(zhì)體的包封率。

2.4.5 陰離子交換樹(shù)脂-微柱離心法對(duì)游離藥物和脂質(zhì)體分離作用的考察

2.4.5.1 微型陰離子交換樹(shù)脂柱的制備

將樹(shù)脂置飽和食鹽水溶液中浸泡20 h，然后放凈食鹽水，用蒸餾水洗至排出水不帶黃色。然后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的鹽酸溶液浸泡4 h，放凈酸液，用蒸餾水洗至中性。最后使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%的氫氧化鈉溶液浸泡4 h后，放凈堿液，用蒸餾水洗至中性后，裝入底部墊有濾紙片的2.5 mL注射器中，將注射器置于離心機(jī)中，3 000 r·min-1離心3 min，除去水分，待用。

2.4.5.2 微型陰離子交換樹(shù)脂柱分離度的考察

取“2.4.1”條下所制備的混懸液5 mL，精密量取上清液0.2 mL，加入甲醇溶解并定容至10 mL，測(cè)定游離藥物總量。另取“2.4.1”條下所制備的混懸液5 mL，精密量取混懸液0.2 mL上樣于自制的陰離子交換樹(shù)脂柱的頂端，平行操作3份，吸附10 min中后，3 000 r·min-1離心3 min，收集離心液。加入pH值7.4的磷酸鹽緩沖溶液0.2 mL于微型凝膠柱的頂端，3 000 r·min-1離心3 min，分別連續(xù)操作3次，合并4次收集的洗脫液置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，測(cè)定未被柱子吸附的游離藥物的含量，考察陰離子交換樹(shù)柱對(duì)游離藥物的吸附作用。結(jié)果表明，陰離子交換樹(shù)脂柱的分離度為100%。說(shuō)明陰離子交換樹(shù)脂柱可以將脂質(zhì)體和游離藥物分開(kāi)

2.4.6 微柱離心法對(duì)游離藥物和脂質(zhì)體分離作用的考察

2.4.6.1 微型凝膠柱的制備

將葡聚糖凝膠顆粒（Sephadex G-50）浸泡在蒸餾水中，充分溶脹，放置12 h，裝入底部墊有濾紙片的2.5 mL注射器中，待水分自然流下后，將注射器置于離心機(jī)中，2 000 r·min-1離心2 min，使凝膠柱失水皺縮，凝膠部分高約1.5 cm，待用。

2.4.6.2 微柱離心法分離度的考察

取“2.4.1”條下所制備的混懸液5 mL，精密量取上清液0.2 mL，加入甲醇溶解并定容至10 mL，測(cè)定游離藥物總量。另取“2.4.1”條下所制備的混懸液5 mL，精密量取混懸液0.2 mL上樣于自制的微型凝膠柱的頂端，平行操作3份，1 800 r·min-1離心1 min，收集離心液。加入pH值7.4的磷酸鹽緩沖溶液0.2 mL于微型凝膠柱的頂端，2 000 r·min-1離心3 min，分別連續(xù)操作2次，然后同法加入上述緩沖液，1 800 r·min-1離心2 min，合并4次收集的洗脫液置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，測(cè)定未被柱子吸附的游離藥物的含量，考察微型凝膠柱對(duì)游離藥物的吸附作用。結(jié)果表明，微型凝膠柱分離度分別為98.02%、97.98%和99.01%。說(shuō)明微型凝膠柱可以將脂質(zhì)體和游離藥物分開(kāi)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，低速離心法、過(guò)膜法均不能完全將游離藥物和脂質(zhì)體分離，測(cè)得脂質(zhì)體的包封率比實(shí)際偏高些，所以作者選擇陰離子交換樹(shù)脂法和微柱離心法進(jìn)行齊墩果酸脂質(zhì)體包封率的測(cè)定。

2.5 齊墩果酸脂質(zhì)體包封率的測(cè)定

2.5.1 陰離子交換樹(shù)脂-微柱離心法測(cè)定齊墩果酸脂質(zhì)體的包封率

在“2.4.5”條方法的基礎(chǔ)上，作者采用陰離子交換樹(shù)脂-微柱離心法對(duì)齊墩果酸脂質(zhì)體的包封率進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果沒(méi)有測(cè)到脂質(zhì)體的包封率（圖3）。

沒(méi)有測(cè)到包封率可能因?yàn)殡x子交換樹(shù)脂法是根據(jù)游離藥物和脂質(zhì)體所帶電荷的不同而分離的，齊墩果酸是弱酸性藥物荷負(fù)電，游離藥物可以被樹(shù)脂柱完全吸附，但是作者所制備的脂質(zhì)體也是荷負(fù)電，如圖3所示，可以觀(guān)察到荷負(fù)電的脂質(zhì)體也被陰離子交換樹(shù)脂吸附，所以不能進(jìn)行齊墩果酸脂質(zhì)體包封率的測(cè)定。

2.5.2 微柱離心法測(cè)定齊墩果酸脂質(zhì)體的包封率

精密量取齊墩果酸脂質(zhì)體溶液0.2 mL，加入甲醇溶解并定容于10 mL的量瓶中，測(cè)定藥物含量（t）。另精密量取齊墩果酸脂質(zhì)體溶液0.1 mL，緩慢加入已制備好的微型凝膠柱的頂端，1 800 r?min-1離心1 min，收集離心液。然后加入pH值7.4的磷酸鹽緩沖液0.2 mL于微型柱的頂端，2 000 r?min-1離心3 min，連續(xù)操作2次，同法加入上述緩沖液，1 800 r?min-1離心2 min。合并4次收集的洗脫液置于10 mL的量瓶中，用甲醇溶解并定容，測(cè)定藥物含量（in）。計(jì)算齊墩果酸脂質(zhì)體的包封率。公式如下：EE=in/t×100%。

結(jié)果表明，齊墩果酸脂質(zhì)體的包封率為（85.36±0.21）%（=3）。

3 討論

3.1 齊墩果酸含量測(cè)定方法的選擇

文獻(xiàn)報(bào)道齊墩果酸的分析方法有紫外分光光度法[3]、薄層掃描法[4]、高效液相色譜法[5]等，作者通過(guò)參照文獻(xiàn)和《中華人民共和國(guó)藥典》，決定采用高效液相色譜法對(duì)齊墩果酸含量進(jìn)行測(cè)定，該方法準(zhǔn)確、靈敏、專(zhuān)屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好。COSMOSIL 5 C18-AR-Ⅱ與普通的十八烷基鍵合硅膠柱（ODS）相比，抗酸性有了很大的改善。即使分離弱酸性化合物接觸酸性流動(dòng)相，柱效也很穩(wěn)定。

3.2 脂質(zhì)體破膜劑的選擇

在測(cè)定脂質(zhì)體包封率時(shí)需要對(duì)脂質(zhì)體溶液進(jìn)行破壞，破壞脂質(zhì)體雙分子乳化層，釋放出包封藥物，進(jìn)而準(zhǔn)確地測(cè)定藥物的含量。常用的方法為有機(jī)溶劑萃取法、有機(jī)溶劑破壞法、乳化劑破壞法等。傳統(tǒng)的脂質(zhì)體破膜劑為乳化劑曲拉通（Triton-X100）溶液，作者根據(jù)脂質(zhì)體膜材和齊墩果酸的溶解性質(zhì)，考慮到甲醇對(duì)齊墩果酸有良好的溶解作用，而且破乳完全，測(cè)定藥物峰形較好，回收率符合要求。所以選擇甲醇作為齊墩果酸脂質(zhì)體的破膜劑。

3.3 包封率測(cè)定方法的選擇

包封率是脂質(zhì)體制劑質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)，脂質(zhì)體包封率的測(cè)定是先將游離藥物與被包封藥物分離，再進(jìn)行包封率的計(jì)算[6]。常用的包封率測(cè)定方法有透析法、低速離心法、超速離心法[7]、葡聚糖凝膠柱色譜法[8]、離子交換樹(shù)脂法和微柱離心法[9]等。齊墩果酸極難溶于水，未被包封的藥物呈結(jié)晶狀態(tài)，透析法不能將游離藥物除去，而且透析法測(cè)定脂質(zhì)體包封率時(shí)耗時(shí)長(zhǎng)[10]。超速離心法適合水溶性藥物的分離，而且要有超速冷凍離心機(jī)，通常離心1 h左右，成本較高，樣品批間重現(xiàn)性差[11]。有文獻(xiàn)報(bào)道采用葡聚糖凝膠柱色譜法測(cè)定齊墩果酸脂質(zhì)體的包封率，存在著洗脫介質(zhì)用量大、用時(shí)長(zhǎng)，洗脫過(guò)程中可能存在藥物析出的問(wèn)題[8]，在葡聚糖凝膠柱的基礎(chǔ)上，作者嘗試用微柱離心法實(shí)現(xiàn)脂質(zhì)體與游離藥物的分離。作者先后比較了低速離心法、過(guò)膜法、陰離子樹(shù)脂法和微柱離心法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)低速離心法和過(guò)膜法均不能將游離藥物和脂質(zhì)體完全分離，離子交換樹(shù)脂法是根據(jù)游離藥物和脂質(zhì)體所帶電荷的不同而分離的，齊墩果酸是弱酸性藥物荷負(fù)電，而作者所制備的脂質(zhì)體也是荷負(fù)電，所以陰離子交換樹(shù)脂法不適合齊墩果酸脂質(zhì)體包封率的測(cè)定。而微柱離心法能將脂質(zhì)體里包封的藥物順利地洗脫下來(lái)，并且游離藥物能完全吸附在微型凝膠柱上，具有方便、快捷、所需樣品量少和重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，因此選擇微柱離心法來(lái)測(cè)定齊墩果酸脂質(zhì)體包封率。

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(本篇責(zé)任編輯：趙桂芝)

Different methods for the determination of entrapment efficiency of oleanolic acid (OA) liposome

LUO Xiao1, XU Xiaochao2, GAO Nannan1, HE Zhonggui2*

(1.,,110016,; 2.,,110016,)

Objective To establish a method for the determination of entrapment efficiency of oleanolic acid (OA) liposomes. Methods The high efficient liquid chromatography (HPLC) method for the determination of the content of OA liposomes was developed. Low-speed centrifugation, filtration membrane, micro-column centrifugation of the anion-exchange resins and micro-column centrifugation method were used for separating free drugs and OA liposome, and these four methods for the determination of the entrapment efficiency of liposomes were compared. Results Low-speed centrifugation, filtration membrane and micro-column centrifugation of the anion-exchange resins could not separate free drugs and OA liposome completely, which couldn’t be used to determine the entrapment efficiency of OA liposomes. By micro-column centrifugation method, the entrapment efficiency of OA liposomes was (85.36±0.21)%. Conclusion Micro-column centrifugation method is finally selected to determine the entrapment efficiency of liposomes, which is simple, accurate and reliable, and can be used for the determination of the entrapment efficiency of OA liposomes.

pharmaceutics; liposome; HPLC; oleanolic acid; entrapment efficiency

（2017）01–0013–08

10.14146/j.cnki.cjp.2017.01.003

R 94

A

2015-05-28

羅肖(1991-), 女(漢族), 河南開(kāi)封人, 碩士研究生, E-mail luoxiao201607@qq.com;

何仲貴(1965-), 男(漢族), 寧夏鹽池人, 教授, 博士, 博士生導(dǎo)師, 主要從事生物藥劑學(xué)與新劑型研究,Tel.024-23986321,E-mailhezhgui-student@yahoo. com.cn。