按摩聯(lián)合針刺療法對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)型骨骼肌損傷的保護(hù)作用

詹祥粉 史曙生

(南京審計(jì)大學(xué)體育教學(xué)部，江蘇 南京 211815)

按摩聯(lián)合針刺療法對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)型骨骼肌損傷的保護(hù)作用

詹祥粉 史曙生1

(南京審計(jì)大學(xué)體育教學(xué)部，江蘇 南京 211815)

目的 探討按摩聯(lián)合針刺療法對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)型骨骼肌損傷肱三頭肌超微結(jié)構(gòu)及磷酸肌酸激酶的影響及對(duì)運(yùn)動(dòng)型骨骼肌損傷的保護(hù)作用。方法 將130只SD大鼠隨機(jī)分為非運(yùn)動(dòng)組(安靜對(duì)照組)和運(yùn)動(dòng)組，運(yùn)動(dòng)組按照干預(yù)方式不同分為運(yùn)動(dòng)對(duì)照組、按摩組、針刺組、聯(lián)合組，每一運(yùn)動(dòng)組又按照樣品采集時(shí)間不同分為以下亞組，包括即刻組、24 h組、48 h組。共計(jì)13組，每組10只大鼠。運(yùn)動(dòng)組在大鼠跑臺(tái)上進(jìn)行持續(xù)性下坡跑，做力竭離心運(yùn)動(dòng)。力竭運(yùn)動(dòng)后對(duì)照組不做任何處理，按摩組每日二次給予肱三頭肌的揉捏推壓和牽引按摩5 min。針刺組給予每日一次毫針斜刺肱三頭肌，留針5 min。聯(lián)合組在給予按摩治療同時(shí)給予針刺療法。實(shí)驗(yàn)方案完成后在運(yùn)動(dòng)后即刻、24 h、48 h取大鼠血清行磷酸肌酸激酶檢測(cè)。取肱三頭肌組織在鏡下觀察超微結(jié)構(gòu)的變化，主要為細(xì)胞結(jié)構(gòu)的異常與Z線的異常。結(jié)果 力竭離心運(yùn)動(dòng)后大鼠肱三頭肌超微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，包括細(xì)胞結(jié)構(gòu)異常(肌纖維排列紊亂，細(xì)胞膜模糊、溶解，線粒體腫脹、空泡樣改變)和Z線異常(包括Z線流、Z線模糊、Z線扭曲和Z線消失)。這些超微結(jié)構(gòu)異常改變?cè)谶\(yùn)動(dòng)后24 h最明顯，48 h 有所恢復(fù)。而磷酸肌酸激酶在運(yùn)動(dòng)后即刻開(kāi)始顯著升高，48 h 有所恢復(fù)，但仍高于安靜對(duì)照組。各治療組超微結(jié)構(gòu)損害在24 h和48 h 均較運(yùn)動(dòng)對(duì)照組減輕，聯(lián)合治療組損傷最輕；磷酸肌酸激酶值在24 h和48 h 較運(yùn)動(dòng)對(duì)照組降低。聯(lián)合治療組磷酸肌酸激酶值最低。結(jié)論 (1)力竭離心運(yùn)動(dòng)可引起骨骼肌超微結(jié)構(gòu)損害和磷酸肌酸激酶升高。(2)磷酸肌酸激酶更能早期反映骨骼肌的損傷。(3)按摩聯(lián)合針刺療法可以減輕骨骼肌超微結(jié)構(gòu)的損害和降低磷酸肌酸激酶，說(shuō)明兩者聯(lián)合對(duì)運(yùn)動(dòng)型骨骼肌損傷具有保護(hù)作用。

運(yùn)動(dòng)型骨骼肌損傷；針刺；按摩；超微結(jié)構(gòu)；磷酸肌酸激酶

運(yùn)動(dòng)型骨骼肌損傷(EIMD)是指由于運(yùn)動(dòng)而導(dǎo)致的骨骼肌損傷，在運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練和體育鍛煉中發(fā)生率非常高，尤其是高強(qiáng)度的運(yùn)動(dòng)員。發(fā)生機(jī)制主要為在運(yùn)動(dòng)時(shí)或者訓(xùn)練中，因局部的肌肉負(fù)荷過(guò)大或者用力過(guò)度，從而超出了機(jī)體所能承受的能力范圍，受損的肌肉功能得不到充分的休息與恢復(fù)，從而發(fā)生EIMD。當(dāng)EIMD后，局部的肌肉會(huì)發(fā)生緊張，長(zhǎng)時(shí)間不能放松，并會(huì)伴有肢體的疼痛與腫脹感。輕者影響工作、學(xué)習(xí)、損害健康，重者則會(huì)造成殘疾，甚至危害生命。EIMD的治療方法包括中醫(yī)傳統(tǒng)治療方法(按摩、針刺、穴位注射等)、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療方法(生長(zhǎng)因子療法、干細(xì)胞移植療法、遠(yuǎn)紅外線干涉療法、低強(qiáng)度激光療法等)。中醫(yī)藥是祖國(guó)醫(yī)學(xué)瑰寶，按摩及針刺療法在治療運(yùn)動(dòng)性損傷方面取得了良好的療效，但是將兩者聯(lián)合應(yīng)用于EIMD治療及動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究較少。本研究觀察肌肉超微結(jié)構(gòu)及磷酸肌酸激酶的改變，探討兩者聯(lián)合是否對(duì)EIMD具有保護(hù)作用。

1 動(dòng)物與方法

1.1 動(dòng)物 選取健康7周齡雄性SD大鼠130只，平均體重(200±20)g。隨機(jī)分為安靜對(duì)照組和運(yùn)動(dòng)組。運(yùn)動(dòng)組按照干預(yù)方式不同分為運(yùn)動(dòng)對(duì)照組、按摩組、針刺組、聯(lián)合組，每一運(yùn)動(dòng)組又按照樣品采集時(shí)間不同分為以下亞組，包括即刻組、24 h組、48 h組，共計(jì)13組，每組10只大鼠。組間大鼠體重?zé)o明顯差異，按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動(dòng)物飼料條件(室內(nèi)溫度20℃～25℃，濕度45%±5%)分籠飼養(yǎng)，自由飲水，自然晝夜節(jié)律變化光照。

1.2 方法 實(shí)驗(yàn)前3 d對(duì)所有受試大鼠進(jìn)行預(yù)先適應(yīng)跑臺(tái)訓(xùn)練，預(yù)速度為10 m/min，時(shí)間為10 min，坡度為0°。正式實(shí)驗(yàn)采用一次力竭性跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)，速度為16 m/min，總運(yùn)動(dòng)時(shí)間為200 min(先運(yùn)動(dòng)100 min，休息5 min，再運(yùn)動(dòng)100 min)，坡度為-16°。運(yùn)動(dòng)組大鼠在運(yùn)動(dòng)開(kāi)始時(shí)無(wú)異常表現(xiàn)，速度較均勻，步態(tài)穩(wěn)定，但隨著時(shí)間的推移，大鼠開(kāi)始出現(xiàn)不能持續(xù)運(yùn)動(dòng)，四肢沉重?zé)o力不能支撐軀體，漸漸地大鼠腹部接近跑臺(tái)，甚至出現(xiàn)臥位跑最終移向跑到末端。當(dāng)運(yùn)動(dòng)到200 min時(shí)，大鼠腹部皮毛濕潤(rùn)，四足腫脹，呼吸不均，精神呆滯，反應(yīng)遲緩，逃避反應(yīng)極差。根據(jù)大鼠力竭的標(biāo)準(zhǔn)可以認(rèn)為大鼠已力竭。干預(yù)治療方式：按摩組大鼠給予每日二次按摩，主要為肱三頭肌的揉捏推壓和牽引，每次持續(xù)時(shí)間5 min。針刺組大鼠給予每日一次針刺治療，采用33號(hào)1寸毫針斜刺肱三頭肌，每次留針5 min。聯(lián)合組在給予按摩治療同時(shí)給予針刺療法。

1.3 標(biāo)本的取材處理與觀察指標(biāo) 按照實(shí)驗(yàn)預(yù)先設(shè)計(jì)的時(shí)間點(diǎn)，選取相應(yīng)組別大鼠，腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血5 ml，4℃，3 000 r/min，10 min離心，取血清，應(yīng)用磷酸肌酸底物法，嚴(yán)格按照磷酸肌酸激酶測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)所示程序進(jìn)行操作，在波長(zhǎng)340 nm處測(cè)定吸光度值，計(jì)算磷酸肌酸激酶含量。腹主動(dòng)脈取血后，迅速取肱三頭肌內(nèi)側(cè)頭肌腱肌腹交界處約1.0 mm×1.0 mm×0.2 mm肌組織塊，放入2%戊二醛固定液中4℃保存，用以制作透射電鏡切片。切片制作完畢后，置于放大倍數(shù)為2 000倍的低倍視野中尋找觀察區(qū)域，然后在放大8 000～10 000倍的視野內(nèi)觀察鼠肌纖維的損傷程度。做好記錄，選好拍片范圍并準(zhǔn)確記錄底片號(hào)碼，備份到電腦上。骨骼肌超微結(jié)構(gòu)變化從細(xì)胞結(jié)構(gòu)異常(肌纖維排列紊亂，細(xì)胞膜模糊、溶解，線粒體腫脹、空泡樣改變)和Z線異常(包括Z線流、Z線模糊、Z線扭曲和Z線消失)兩個(gè)方面進(jìn)行量化統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié) 果

2.1 力竭運(yùn)動(dòng)后肱三頭肌鏡下超微結(jié)構(gòu)的改變 安靜對(duì)照組：鏡下觀察肌節(jié)具有完整結(jié)構(gòu)，形態(tài)無(wú)變化；肌纖維正常排列，A 帶、H帶、I帶和M線規(guī)律清晰排列，呈現(xiàn)明暗相間的橫紋；Z 線完整、清晰；肌纖維細(xì)胞膜完整，細(xì)胞核無(wú)大小變化，核膜完整光滑，核仁清晰。肌間和胞質(zhì)內(nèi)線粒體大小正常但數(shù)量較多，具有完整的外膜和嵴。運(yùn)動(dòng)后即刻組：鏡下觀察發(fā)現(xiàn)超微結(jié)構(gòu)有一定改變，肌纖維排列輕微紊亂，肌絲腫脹。Z 線一般正常，偶爾可見(jiàn)異常。肌纖維細(xì)胞膜出現(xiàn)模糊、甚至溶解，細(xì)胞核稍腫脹、核膜皺縮。肌纖維間部分線粒體出現(xiàn)腫脹、破裂現(xiàn)象，內(nèi)部可見(jiàn)空泡樣改變，線粒體嵴有缺損，衛(wèi)星細(xì)胞核出現(xiàn)皺縮。運(yùn)動(dòng)后24 h組：超微結(jié)構(gòu)的損傷程度更加明顯。肌纖維細(xì)胞排列明顯不規(guī)則、出現(xiàn)紊亂甚至嚴(yán)重扭曲變形，肌絲間腫脹，A、I 帶區(qū)無(wú)法分清，明暗帶模糊。Z 線往往呈鋸齒狀不規(guī)則排列或局部消失。肌纖維細(xì)胞膜部分溶解、固縮，肌細(xì)胞核濃縮、核膜模糊。線粒體腫脹、多呈空泡樣變性，線粒體嵴部分缺損。運(yùn)動(dòng)后48 h組：肌細(xì)胞損傷程度超微結(jié)構(gòu)顯示較運(yùn)動(dòng)后24 h所有減輕。肌細(xì)胞纖維間腫脹，肌絲水腫。肌細(xì)胞膜有溶解和皺縮現(xiàn)象，細(xì)胞核核膜模糊、腫脹。Z 線局部有錯(cuò)位發(fā)生。線粒體出現(xiàn)絮狀物的改變，線粒體可見(jiàn)空泡變性，外膜有局部破壞，線粒體嵴部分缺損。見(jiàn)表1。

表1 力竭運(yùn)動(dòng)大鼠肱三頭肌鏡下結(jié)構(gòu)異常和Z線異常情況

與安靜對(duì)照組比較：1)P<0.05；運(yùn)動(dòng)對(duì)照組組內(nèi)比較：2)P<0.05

2.2 力竭運(yùn)動(dòng)后磷酸肌酸激酶(CK)的改變 運(yùn)動(dòng)組對(duì)照組與安靜對(duì)照組〔(198.4±22.8)U/L〕比較，運(yùn)動(dòng)后CK值即開(kāi)始升高〔(320.8±29.7)U/L〕。運(yùn)動(dòng)后24 h CK值最高〔(856.3±41.5)U/L〕，達(dá)到峰值。運(yùn)動(dòng)后48 h CK值〔(654.1±34.5)U/L〕較24 h組下降。

2.3 按摩、針刺及兩者聯(lián)合對(duì)肱三頭肌鏡下超微結(jié)構(gòu)的影響 表2可見(jiàn)，經(jīng)按摩、針刺及兩者聯(lián)合治療后，治療組大鼠肱三頭肌鏡下改變與運(yùn)動(dòng)對(duì)照組比較，可見(jiàn)肌纖維排列較規(guī)則，紊亂、扭曲現(xiàn)象較少。Z 線排列較規(guī)則、清晰，Z線異常亦減少。肌細(xì)胞膜相對(duì)較正常。細(xì)胞核及核仁破壞較輕。線粒體損害情況亦較對(duì)照組明顯減輕。其中聯(lián)合治療組損害最輕(P<0.05)，按摩組與針刺組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 治療后各組肱三頭肌鏡下結(jié)構(gòu)異常和Z線異常情況±s,n=10，%)

同一時(shí)間與運(yùn)動(dòng)對(duì)照組比較：1)P<0.05；同一時(shí)間與按摩組比較：2)P<0.05；同一時(shí)間與針刺組比較：3)P<0.05;下表同

2.4 按摩、針刺及兩者聯(lián)合對(duì)CK的影響 經(jīng)按摩、針刺及兩者聯(lián)合治療后，同一時(shí)間治療組大鼠血清CK水平與運(yùn)動(dòng)對(duì)照組比較下降(P<0.05)，其中聯(lián)合組CK值最低(P<0.05)。按摩組與針刺組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 治療后各組CK的情況

3 討 論

EIMI的發(fā)生主要是在訓(xùn)練或運(yùn)動(dòng)時(shí)，由于局部肌肉負(fù)荷過(guò)大或用力超過(guò)機(jī)體所能承受的范圍，而運(yùn)動(dòng)后肌肉功能又未能得到充分休息恢復(fù)，從而導(dǎo)致局部組織發(fā)生損傷。EIMI在運(yùn)動(dòng)員的體育訓(xùn)練中及正常人的日常生活中較常出現(xiàn)，主要損傷有肌肉勞損、肌肉筋膜炎、肌肉延遲性疼痛，患者的臨床體征較常見(jiàn)的有肌肉疼痛、肌肉緊張及肌肉放松能力下降。同時(shí)，患者肌纖維還會(huì)出現(xiàn)超微結(jié)構(gòu)的異常，并伴有血清酶的改變。日常生活中長(zhǎng)期的損傷，會(huì)導(dǎo)致生活工作質(zhì)量下降、身體健康狀況不佳；而對(duì)于運(yùn)動(dòng)員來(lái)說(shuō)，EIMI的發(fā)生往往直接影響到了運(yùn)動(dòng)賽事的成績(jī)。

導(dǎo)致骨骼肌損傷可能的原因包括：機(jī)械刺激、自由基損傷、細(xì)胞代謝失衡、炎癥反應(yīng)等幾方面。機(jī)械刺激由于力的刺激導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)被破壞，作用力超出肌纖維的承受范圍，細(xì)胞膜、肌漿網(wǎng)膜、肌原纖維等結(jié)構(gòu)均被破壞，肌束中肌纖維受到不同的作用力與反作用力，其收縮不能同步進(jìn)行，部分肌纖維不能承受過(guò)度力的刺激，而致 Z 線破裂、肌纖維受損〔1〕。從細(xì)胞結(jié)構(gòu)角度出發(fā)，過(guò)度的牽拉會(huì)導(dǎo)致肌細(xì)胞膜上的磷脂酶A2被激活，因磷脂酶 A2能促使細(xì)胞膜發(fā)生自溶解，故進(jìn)一步加深肌細(xì)胞收縮蛋白和肌原纖維損傷程度〔2〕。陳秀英〔3〕通過(guò)觀察離心運(yùn)動(dòng)后大鼠骨骼肌肌纖維局部出現(xiàn)desmin陰性纖維、desmin 蛋白表達(dá)量下降，認(rèn)為此結(jié)果預(yù)示肌纖維進(jìn)一步損傷和壞死。

對(duì)損傷骨骼肌進(jìn)行按摩治療具有其他治療手段無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì)：安全、經(jīng)濟(jì)、有效且無(wú)任何毒副作用等。按摩治療骨骼肌損傷能促使局部血管擴(kuò)張，加速血液和淋巴液的循環(huán)，引導(dǎo)血液在體內(nèi)的重新分配，加強(qiáng)局部血液供應(yīng)，改善體內(nèi)組織充血情況和改善局部組織的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)，促進(jìn)新陳代謝。陳宏貞〔4〕認(rèn)為按摩療法有效地減輕骨骼肌損傷后肌細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和肌細(xì)胞的壞死，同時(shí)可以加速肌肉組織修復(fù)。馬玉河〔5〕以兔雙后肢進(jìn)行骨骼肌拉傷模型，每日牽拉后進(jìn)行按摩，然后制作切片進(jìn)行光鏡觀察發(fā)現(xiàn)：肌纖維排列尚規(guī)整，只有部分肌纖維出現(xiàn)波浪狀扭曲和肌漿疏松，個(gè)別肌纖維呈小節(jié)段變性壞死，肌肉內(nèi)血管呈規(guī)律排列，并且有橫向吻合枝生成。謝輝等〔6〕研究證明，通過(guò)對(duì)兔損傷股四頭肌進(jìn)行按摩能夠促進(jìn)肌膠原纖維合成，利于損傷組織的修復(fù)。侯懿烜〔7〕實(shí)驗(yàn)研究按摩兔損傷股四頭肌，可促進(jìn)的組織形態(tài)及細(xì)胞骨架恢復(fù)，可能通過(guò)Desmin、α-Actin相關(guān)基因表達(dá)的上調(diào)來(lái)促進(jìn)受損骨骼肌組織的修復(fù)。張靜〔8〕研究結(jié)果表明：按摩治療組肌肉恢復(fù)情況較好；按摩可以縮短恢復(fù)時(shí)間、促進(jìn)損傷肌組織的修復(fù)同時(shí)減少肌細(xì)胞的壞死和癱痕組織的過(guò)度增生；按摩后肌肉肌動(dòng)蛋白的表達(dá)提高，加快肌肉收縮功能的恢復(fù)。Hu等〔9〕以兔腓腸肌急性挫傷模型為研究對(duì)象，進(jìn)行早期及常規(guī)兩種推拿治療，發(fā)現(xiàn)按摩治療后各組肌衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)量均持續(xù)上升，說(shuō)明早期按摩手法對(duì)衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)增加作用明顯，利于骨骼肌的進(jìn)一步恢復(fù)。田惠林等〔10〕通過(guò)制作兔腓腸肌損傷模型，于損傷后的不同時(shí)期對(duì)其進(jìn)行定量按摩后觀察各組動(dòng)物的腓腸肌形態(tài)學(xué)變化表明：晚期大強(qiáng)度按摩治療組及按摩組的恢復(fù)情況優(yōu)于小強(qiáng)度按摩組和早期按摩組及自然恢復(fù)組，說(shuō)明按摩治療骨骼肌損傷效果明顯。

研究證明〔11〕，針刺能夠較快地恢復(fù)離心運(yùn)動(dòng)后引起的骨骼肌超微結(jié)構(gòu)損傷。針刺療法可有效恢復(fù)骨骼肌超微結(jié)構(gòu)損傷、線粒體數(shù)目也較治療前增加，肌束膜受損程度減輕，并能緩解骨骼肌神經(jīng)纖維、血管所受的張力，二者結(jié)構(gòu)損傷減弱，最終達(dá)到治愈骨骼肌損傷的效果。郭勇力等〔12〕以新西蘭白兔造模后施以特異針刺治療，用酶聯(lián)免疫法測(cè)試不同時(shí)間血清前列腺素E2(PGE2)、五羥色胺和組胺濃度，結(jié)果表明特異針刺療法可有效降低兔急性骨骼肌損傷后的三個(gè)因子的濃度，減輕損傷后疼痛程度。

CK是人血清中不起催化作用的一種非功能性酶，只反映臟器細(xì)胞被破壞或細(xì)胞通透性的情況〔13〕。CK是人體骨骼肌內(nèi)含量最為豐富的酶類之一，也是與能量代謝最為密切的酶。同時(shí)，體內(nèi)往往會(huì)伴隨化學(xué)物質(zhì)的改變，研究證實(shí)〔14〕，伴隨骨骼肌損傷出現(xiàn)變化最多的為血清酶(磷酸肌酸激酶、乳酸脫氫酶、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶等)，其與運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度和運(yùn)動(dòng)時(shí)間關(guān)系密切，其中CPK在劇烈運(yùn)動(dòng)后活性顯著升 高。運(yùn)動(dòng)后CPK活性水平越高，MRI 信號(hào)越強(qiáng)，表明骨骼肌損傷越嚴(yán)重。損傷肌肉也可查到此酶有逸出，故將其作為反映骨骼肌損傷的最好指標(biāo)。Schwane等〔15〕分別利用磁共振影像研究了離心收縮后骨骼肌的機(jī)械損傷與血清CPK活性水平變化的關(guān)系。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)力竭離心運(yùn)動(dòng)后大鼠肱三頭肌超微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，聯(lián)合治療組CPK值最低，說(shuō)明其對(duì)骨骼肌損傷保護(hù)作用最強(qiáng)。按摩與針刺聯(lián)合治療對(duì)骨骼肌損傷的防治起到較理想的效果，為臨床治療運(yùn)動(dòng)損傷提供更好的治療手段。

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〔2016-04-14修回〕

(編輯 袁左鳴)

史曙生(1970-)，男，博士生導(dǎo)師，碩士，教育學(xué)博士，教授，主要從事運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)研究。

詹祥粉(1977-)，男，講師，在讀博士，主要從事體育社會(huì)學(xué)，運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)研究。

R245

A

1005-9202(2017)02-0311-04；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.02.022

1 南京師范大學(xué)體育科學(xué)學(xué)院體育教學(xué)部運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練系