博落回中1個新的6，6a斷苯菲啶生物堿

楊鵬鄒超蘭　向鋒　夏麗瓊　曾建國

[摘要] 研究博落回的化學成分。采用硅膠柱色譜以及制備液相色譜法進行分離純化，并根據(jù)波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物結(jié)構(gòu)。從博落回葉95%的乙醇提取物中分離鑒定1個生物堿，鑒定為6′羥基2′，3′二甲氧基山椒酰胺（1）?；衔?為新化合物。

[關(guān)鍵詞] 博落回； 6′羥基2′，3′二甲氧基山椒酰胺

A new 6，6aoffbenzophenanthridine alkaloid from Macleaya cordata

YANG Peng1，3， ZOU Chaolan1，3， XIANG Feng1，3， XIA Liqiong1，3， ZENG Jianguo1，2，3*

（1. College of Pharmacy， Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410128， China；

2. National and Provincial Union Engineering Research Center for the Veterinary Herbal Medicine

Resources and Initiative， Hunan Agricultural University， Changsha 410208， China；

3. Hunan Coinnovation Center for Utilization of Botanicals Functional Ingredients， Changsha 410128， China）

[Abstract] A new alkaloid was isolated from the leaves of Macleaya cordata with 95% ethanol extracted and its isolation was by column chromatography and preparation HPLC. The new structure was elucidated as 6′hydroxy2′，3′dimethoxyarnottianamide on the basis of its spectroscopic date.

[Key words] Macleaya cordata； 6′hydroxy2′，3′dimethoxyarnottianamide

doi：10.4268/cjcmm20162218

博落回Macleaya cordata （Willd.） R. Br.系罌粟科博落回屬植物，是多年生草本植物，多以全草入藥。具有殺蟲、解毒、消腫等功效，主要分布在中國以及東南亞，在我國主要分布在湖南、安徽、江蘇等省[1]?，F(xiàn)代研究表明博落回中主要活性成分是生物堿，具有抗炎、抗菌、抗腫瘤[2]、促進動物生長[3]等作用。在本研究團隊對博落回化學成分已有的研究基礎(chǔ)上[48]，選擇博落回不同部位進行更全面的化學成分研究，本實驗利用質(zhì)譜示蹤結(jié)合硅膠柱色譜和制備高效液相色譜法對博落回葉化學成分進行研究。分離得到1個新化合物，通過波譜技術(shù)確定化合物的結(jié)構(gòu)，鑒定為6′羥基2′，3′二甲氧基山椒酰胺。

1 材料

Bruker AV600 MHz型核磁共振儀（瑞士Bruker公司）；HPLCQTOFMS（美國Agilent公司）；安捷倫1200制備液相色譜儀（美國Agilent公司）；安捷倫1260液相色譜儀（美國Agilent公司）；FTIR7600傅里葉變換紅外光譜儀（澳洲Lambda公司）；華普C18HC反向柱（20 mm×250 mm， 10 μm， 100 A）；安捷倫ZORBAX SBC18反相柱（9.4 mm×250 mm， 5 μm）；柱色譜硅膠（300～400目）、GF254薄層硅膠高效板（青島海洋化工廠）；實驗用乙醇、甲醇、二氯甲烷、正己烷、丙酮、三乙胺、濃氨水均為分析純；色譜純甲醇、乙腈、甲酸（德國Merck公司）；實驗用水為蒸餾水和MilliQ超純水。

博落回新鮮葉2014年10月采自湖南邵陽，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學楊廣民教授鑒定為罌粟科博落回屬植物博落回M. cordata，標本存放于國家中藥材生產(chǎn)（湖南）技術(shù)中心。

2 提取與分離

取博落回新鮮葉100 kg委托湖南美可達生物資源有限公司提取，清水洗凈，95%乙醇浸泡12 h，多功能提取罐回流提取2次，每次提取時間為1 h，回收溶劑，濃縮得到博落回流浸膏16 kg，流浸膏換用20 L旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀繼續(xù)濃縮，得到浸膏6 kg，浸膏加入10倍量稀硫酸溶液，攪拌，調(diào)pH至3，靜止12 h，濾去沉淀，濾液加濃氨水調(diào)pH到10，攪拌，靜止12 h，除去上清液，得到沉淀，濃縮干燥后得到280 g浸膏。浸膏用300 g硅膠（200～300目）拌樣，用3 kg硅膠（200～300目）柱色譜，依次用石油醚乙酸乙酯（3∶1， 2∶1， 1∶1， 0∶1）和甲醇梯度洗脫，收集流分，共5個組分。每個組分進行LCMS分析初步推斷有哪些化合物，在查閱相關(guān)文獻后，確定第3部分為分離目標。第3部分26.4 g浸膏用30 g硅膠（300～400目）拌樣，用300 g硅膠（300～400目）柱色譜，石油醚乙酸乙酯（2∶1）等度洗脫得到4個組分。運用LCMS分析確定第3部分為分離目標，第3部分浸膏3.9 g用甲醇溶解，采用華普C18HC反向柱（100A， 20 mm×250 mm， 10 μm），以50%甲醇為流動相，體積流量為20 mL·min-1，收集15.4 min的色譜峰，得到化合物粗品。粗品用甲醇溶解，采用安捷倫ZORBAX SBC18 反相柱（9.4 mm×250 mm， 5 μm）進行純化，以35%乙腈為流動相，體積流量4 mL·min-1，收集9.2 min的色譜峰， 分離得到化合物1 （7.8 mg），結(jié)構(gòu)見圖1。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 黃色粉末，UV （MeOH） λmax 228， 265 nm； IR （KBr） υmax 3 348， 2 922， 1 650， 1 608， 1 532， 1 462， 1 350， 1 120， 922， 832 cm-1。HRESIMS m/z 382.127 8 [M+H]+（計算值m/z 382.128 5[M+H]+），與實際值相差1.87，可以確定化合物分子式為C21H19NO6。其紅外光譜顯示化合物中有羥基（3 348 cm-1）、酰胺（1 650 cm-1）和芳環(huán)（1 608， 1 532， 1 462 cm-1）信號。化合物1的1HNMR（CDCl3，600 MHz）譜的主要信號與文獻報道的山椒酰胺相似，在低場區(qū)顯示出2組AB偶合的芳香氫質(zhì)子信號δH 7.66 （1H， d， J=8.4 Hz）和7.24 （1H， d， J=8.4 Hz），6.73 （1H， d， J=8.4 Hz）和6.47 （1H， d， J=8.4 Hz）；2個孤立的芳香氫質(zhì)子單峰信號δH 7.13 （1H， s）， 7.01 （1H， s）；1個孤立的醛氫質(zhì)子單峰信號δH 8.09 （1H， s）；2個與芳香環(huán)相連的甲氧基質(zhì)子信號δH 3.86 （3H， s）， 3.83 （3H， s）；1個亞甲二氧基δH 6.01（2H，s）和1個氮甲基信號δH 2.93 （3H， s）。

13CNMR（CDCl3，150 MHz）和DEPT譜顯示出21個碳信號，與文獻[9]報道的山椒酰胺的碳信號幾乎一致，只有其中幾個碳信號化學位移稍有改變。這21個碳信號包括1個氮甲基碳信號（δC 33.0）；2個甲氧基碳信號（δC 61.2， 55.9）；1個亞甲二氧基碳信號（δC 101.5）；1個醛基碳信號（δC 164.6）；6個芳香叔碳信號（δC 127.5， 127.4， 125.1， 104.3， 104.0， 99.3）；6個氧化或氮化的芳香叔碳信號（δC 152.0， 149.3， 148.1， 146.7， 135.6， 135.7）；4個芳香季碳信號（δC 133.5， 131.2， 128.7， 118.6）。

在HMBC譜中，δH 6.73 （H4′）與[δC 135.7 （C3′）， 152.0 （C2′）， 146.1 （C6′）]相關(guān)，δH 6.47 （H5′）與[δC 135.7 （C3′）， 133.5 （C1′）， 146.1 （C6′）]相關(guān)，δH 7.66 （H4）與[δC 104.3 （C5）， 131.2 （C8a）， 133.5 （C2）]相關(guān)，δH 7.24 （H3）與[δC 118.6 （C1′）， 135.6 （C1）， 128.7 （C4a）]相關(guān)，δH 7.01 （H8）與[δC 135.6 （C1）， 149.3 （C6）， 128.7 （C4a）]相關(guān)，δH 7.13 （H5）與[δC 127.5 （C4）， 131.2 （C8a）， 148.1 （C7）]相關(guān)，這些HMBC譜數(shù)據(jù)與已知化合物山椒酰胺不同，所以可以推測化合物1是1個6，7，2′，3′，6′五取代6，6a斷二氫苯并菲啶衍生物；δH 6.01 （2H， s，OCH2O）與δC 149.3 （C6）和148.1 （C7）相關(guān)，說明亞甲二氧基與C6和C7相連接；δH 2.93 （3H， s， NCH3）與δC 164.6 （CHO）和135.6 （C1）相關(guān)，說明酰胺基與C1相連接；2個甲氧基的質(zhì)子氫δH 3.86 （3H， s）和3.83 （3H， s）分別與δC 152.0 （C2′）和135.7 （C3′）相關(guān)，說明2個甲氧基與苯環(huán)上的C2′和C3′相連接，羥基連接在苯環(huán)的C6′上?；衔?的主要HMBC相關(guān)，見圖2。

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[責任編輯 丁廣治]