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    液體菌種在平菇工廠化栽培中的應(yīng)用

    2023-10-10 13:02:54劉元棟王敬文聞亞美
    食藥用菌 2023年5期
    關(guān)鍵詞:發(fā)酵罐氣閥平菇

    劉元棟 王 奇 王敬文 張 輝 黨 帥 聞亞美

    (周口市農(nóng)業(yè)科學院,河南 周口 466000)

    平菇(Pleurotusostreatus),又稱北風菌、凍菌、蠔菇,因其菌柄側(cè)生或偏生又常稱為側(cè)耳,屬于擔子菌門、傘菌綱、傘菌目、側(cè)耳科、側(cè)耳屬[1]。平菇肉質(zhì)鮮美,營養(yǎng)豐富,具有很高的營養(yǎng)價值和藥用價值。據(jù)測定,平菇干品中含有大量的蛋白質(zhì)、粗脂肪和豐富的鈣、磷、鐵等礦質(zhì)元素,以及多種維生素,具有增強人體免疫力、追風散寒、舒筋活絡(luò)的功效,其所含的多糖、酶類等具有助消化、降低膽固醇和高血壓等功效[2-3]。據(jù)統(tǒng)計,2021 年全國食用菌總產(chǎn)量4 133.94 萬t(鮮品),其中平菇為611.34 萬t,占總產(chǎn)量的14.78%[4]。

    隨著科技的不斷進步,平菇除傳統(tǒng)的季節(jié)性大棚栽培外,工廠化栽培也應(yīng)運而生[5]。長期以來,平菇栽培菌種主要采用枝條菌種、固體菌種,但這兩種傳統(tǒng)制種方式存在發(fā)菌周期長、生產(chǎn)成本高、污染率高、菌齡不一致等問題[6],極大地制約了平菇工廠化栽培的發(fā)展。

    食用菌栽培應(yīng)用液體菌種具有菌種生產(chǎn)周期短、菌齡一致、生產(chǎn)成本低、接種方便等優(yōu)點。目前,在工廠化栽培的食用菌中,大多數(shù)品種采用液體菌種生產(chǎn)[7-9]。將液體菌種應(yīng)用到平菇工廠化栽培,一方面可以大大縮短菌種的制作周期,降低原料成本和用工成本;另一方面可以提高接種效率、縮短發(fā)菌周期[10]。目前,關(guān)于液體菌種在平菇工廠化栽培中的應(yīng)用鮮有報道,本文就平菇工廠化栽培應(yīng)用液體菌種的相關(guān)生產(chǎn)技術(shù)介紹如下。

    1 品種及培養(yǎng)基的選擇

    1.1 品種選擇

    平菇生產(chǎn)中品種的選擇很重要,適合大棚栽培的品種不一定適合工廠化栽培。結(jié)合平菇工廠化栽培特點,需要選用耐二氧化碳、頭茬爆發(fā)力強、抗逆性強、商品性較好的平菇品種。菌種最好從具有相應(yīng)資質(zhì)的單位引進。

    1.2 試管母種培養(yǎng)基

    配方1:PDA 培養(yǎng)基。配方2:土豆200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氫鉀2 g、硫酸鎂1 g,水1 000 mL,pH 自然。

    1.3 搖瓶菌種培養(yǎng)基

    土豆200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氫鉀2 g、硫酸鎂1 g、水1 000 mL、pH 自然。

    1.4 液體發(fā)酵罐菌種培養(yǎng)基

    以800 L發(fā)酵罐為例,培養(yǎng)基最終定容為640 L左右,原則上宜超過觀察窗底部。

    配方1:平菇專用液體合成培養(yǎng)基6 kg、白糖5 kg、葡萄糖6 kg、消泡液200 mL。配方2:豆粉2.4 kg、白糖13 kg、硫酸鎂640 g、磷酸二氫鉀640 g、消泡液200 mL。配方3:玉米面8 kg、全麥粉8 kg、紅糖4 kg、葡萄糖2.8 kg、蛋白胨800 g、磷酸二氫鉀800 g、硫酸鎂640 g、消泡液200 mL。

    1.5 栽培培養(yǎng)料配方

    配方1:玉米芯47%、棉籽殼30%、麥麩15%、草籽3%、豆粕3%、石灰2%。配方2:玉米芯75%、麥麩20%、玉米面3%、石灰2%。配方3:玉米芯47%、棉籽殼10%、棉渣20%、麥麩15%、草籽3%、豆粕3%、石灰2%。配方4:玉米芯59%、木屑10%、棉籽殼10%、麩皮13%、玉米面3%、草籽3%、石灰2%。

    2 平菇液體菌種的制作過程

    2.1 菌種活化

    購買或者保藏的菌種在使用之前應(yīng)進行活化,具體方法為:將菌種從4 ℃保藏箱放到25 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h,在無菌條件下,將菌種轉(zhuǎn)接至新的試管培養(yǎng)基上。將接種后的試管放到培養(yǎng)箱內(nèi)25 ℃恒溫培養(yǎng)7 天。然后選擇菌絲潔白、生長旺盛、無雜菌的試管轉(zhuǎn)接至三角瓶。

    2.2 搖瓶菌種制作

    采用的三角瓶大小為500 mL 或1 000 mL[11]。接種100 L以下發(fā)酵罐一般采用500 mL的三角瓶,裝入300 mL 培養(yǎng)基。接種100 L 以上的發(fā)酵罐一般采用1 000 mL 三角瓶,裝液量為600 mL。在滅菌前向三角瓶內(nèi)加入轉(zhuǎn)子(四氟乙烯),按1.3 節(jié)配方配制培養(yǎng)基,滅菌冷卻后在超凈工作臺中無菌接種。每瓶接種6~8 塊菌種(直徑2.5 mm 左右)。接種后25 ℃靜置培養(yǎng)48 h 后放到磁力攪拌器上于25 ℃恒溫培養(yǎng)5 天(圖1)。轉(zhuǎn)子旋轉(zhuǎn)速度根據(jù)所需菌絲球大小而定。

    圖1 三角瓶液體菌種

    2.3 發(fā)酵罐制作及培養(yǎng)

    以800 L 發(fā)酵罐為例進行介紹(圖2)。發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)基按1.4 節(jié)配方進行配制,具體操作如下。

    圖2 平菇液體菌種發(fā)酵罐

    (1)檢查。檢查整個發(fā)酵罐系統(tǒng)各設(shè)備是否正常工作,主要包括螺桿式空氣壓縮機、儲氣罐、空氣冷凍式干燥機、三級過濾等。

    (2)加水、升溫。先往罐內(nèi)注入2/3 水,關(guān)閉發(fā)酵罐頂蓋,打開頂部排氣閥,然后啟動蒸汽發(fā)生器,使蒸汽從發(fā)酵罐底部通入罐內(nèi)升溫,同時打開發(fā)酵罐進氣閥,通入無菌空氣,進氣閥的大小根據(jù)實際情況而定,時刻觀察罐內(nèi)溫度的變化,當水溫升到80 ℃時,關(guān)閉罐底部進氣閥。在此階段升溫過程中,蒸汽發(fā)生器壓力控制在0.2 MPa 左右,水溫從室溫升到80 ℃耗時約1 h。

    (3)加料、升溫。當罐內(nèi)水溫上升至80 ℃左右時,依次關(guān)閉罐底部的蒸氣閥門和無菌空氣進氣閥,當罐內(nèi)壓力降至0 以下時,打開發(fā)酵罐頂蓋,把事先混勻的料液倒進罐內(nèi),加入消泡液,關(guān)閉發(fā)酵罐頂蓋,同時打開蓋子上面的排氣閥、進氣閥以及罐底部的蒸汽閥,繼續(xù)進行加熱升溫,直至溫度達到125 ℃,整個升溫過程約需70 min。在升溫過程中,不同溫度階段蒸汽發(fā)生器壓力不一樣,其中溫度在80~120 ℃時,壓力維持在0.2 MPa 左右,溫度在120~125 ℃時,壓力維持在0.3~0.35 MPa。

    (4)滅菌。溫度上升到125 ℃左右時開始計時,維持1 h 左右。此階段關(guān)閉進氣閥和排氣閥,實時調(diào)節(jié)罐底部蒸汽閥,使發(fā)酵罐壓力控制在0.15 MPa 左右。蒸汽發(fā)生器壓力控制在0.55~0.7 MPa,罐體壓力控制在0.15 MPa 左右。

    (5)冷卻。滅菌結(jié)束后關(guān)閉發(fā)酵罐底部進氣閥門和蒸汽發(fā)生器的蒸汽排氣閥,移除滅菌管道。移除管道前必須確保蒸汽管道內(nèi)溫度降至室溫,避免人員燙傷。采用水循環(huán)降溫,下進,上出,同時打開排氣閥和進氣閥,罐內(nèi)壓力控制在0.15 MPa左右,當溫度降到25 ℃左右時停止降溫,降溫過程需要5~6 h。

    (6)接種、培養(yǎng)、記錄。接種時關(guān)閉進氣閥,打開排氣閥,當罐內(nèi)壓力為0 時,關(guān)閉排氣閥,然后在接種口周邊空間噴灑75%酒精消毒,并在接種口套上經(jīng)95%酒精浸泡的接種圈,點燃酒精圈,在無菌范圍內(nèi)接種[12]。接種完畢后,調(diào)節(jié)發(fā)酵罐上的進氣閥和排氣閥,罐壓控制在0.05 MPa 左右,溫度控制在24 ℃左右。培養(yǎng)期間,每天取料液涂布培養(yǎng),觀察菌絲生長活力及污染情況,同時每天觀察記錄料液顏色、氣味、pH、菌絲量(圖3)等數(shù)值。培養(yǎng)6~7 天,取樣靜置30 min 后菌絲量達到95%以上,培養(yǎng)液透明,涂布培養(yǎng)24 h 內(nèi)菌絲萌發(fā),即達到接種標準。

    圖3 液體菌種菌絲量試管觀察(左)和視鏡觀察(右)

    3 平菇工廠化栽培技術(shù)

    3.1 拌料及裝袋

    以1.5 節(jié)配方備料[13],3 臺攪拌機采用“品”字型擺放(2 臺一級攪拌,1 臺二級攪拌),現(xiàn)拌現(xiàn)裝。培養(yǎng)料的添加順序為:先加入干玉米芯(玉米芯顆粒度大小10~14 目),同時加水攪拌,將玉米芯攪拌30~40 min,充分預(yù)濕;隨后添加余下的主料和輔料攪拌30 min 左右;根據(jù)培養(yǎng)料含水量適當加水,攪拌均勻后將培養(yǎng)料轉(zhuǎn)入二級攪拌機攪拌后裝袋。栽培袋采用18 cm × 36 cm × 0.004 cm 聚丙烯袋或18 cm × 36 cm × 0.003 cm耐高壓聚乙烯袋,采用平菇專用套環(huán)封口。

    3.2 滅菌、冷卻

    料袋121 ℃滅菌3~4 h,滅菌結(jié)束后經(jīng)預(yù)冷、強冷,使料溫降至26 ℃以下接種。強冷間和待接種間凈化級別為整體萬級,使用前用紫外燈和臭氧進行空間消毒。

    3.3 接種

    接種在接種室進行,接種室凈化級別為整體萬級,局部百級,使用前采用臭氧進行空間消毒。接種前將接種所使用的接種槍、菌種管道等提前滅菌,接種時發(fā)酵罐壓力控制在0.15 Mpa 左右,并關(guān)閉排氣閥,一人負責接種,另一人負責去蓋、蓋蓋,每袋接種量35 mL 左右。

    3.4 發(fā)菌

    接種結(jié)束后,將菌袋移到發(fā)菌室發(fā)菌(圖4)。發(fā)菌室需提前消毒,防止雜菌污染。在發(fā)菌期間實時監(jiān)控室內(nèi)溫度、二氧化碳濃度、空氣相對濕度。料溫控制在25 ℃以下,二氧化碳體積分數(shù)控制在0.4%以下,空氣相對濕度低于60%。一般25 天左右菌絲可滿袋。滿袋后后熟5 天左右,有利于菌絲吸收更多的營養(yǎng)物質(zhì),提高產(chǎn)量[14]。

    3.5 出菇管理

    菌袋后熟后移到出菇車間進行出菇管理(圖5)。菌袋轉(zhuǎn)入出菇車間,去蓋后進行持續(xù)光照[15]。平菇生長分為現(xiàn)蕾期、桑椹期、幼菇期、采收期4 個時期。其中,從入庫到現(xiàn)蕾一般為7 天,從現(xiàn)蕾期到桑椹期為2~3 天,從桑椹期到幼菇期為3 天左右、幼菇期到采收期為6~7 天,整個過程為18~20 天。

    圖5 平菇工廠化出菇

    出菇期,出菇車間溫度控制在12~16 ℃,空氣濕度控制在95%左右,二氧化碳的體積分數(shù)控制在0.12%以下。平菇子實體七八成熟時及時采收。

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