NF-κBp65、EGF與EGFR在口腔扁平苔蘚和口腔鱗癌中的表達(dá)及臨床意義*

周 驄，伍寶琴，張齊梅，王忠朝

(西南醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院口腔內(nèi)科，四川瀘州 646000)

NF-κBp65、EGF與EGFR在口腔扁平苔蘚和口腔鱗癌中的表達(dá)及臨床意義*

周 驄，伍寶琴，張齊梅，王忠朝

(西南醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院口腔內(nèi)科，四川瀘州 646000)

目的 研究口腔扁平苔蘚(OLP)及口腔鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)中核因子-κBp65(NF-κBp65)、表皮生長因子(EGF)和表皮生長因子受體(EGFR)的表達(dá)及臨床意義。方法 采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)口腔黏膜組織中NF-κBp65、EGF與EGFR的表達(dá)，包括20例正?？谇火つ?NOM)組織，20例OLP組織，20例OSCC組織。結(jié)果NF-κBp65在NOM、OLP、OSCC的表達(dá)率分別為10%、65%、75%，3組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。EGF在NOM、OLP、OSCC中的表達(dá)率為25%、45%、65%，3組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；EGFR在NOM、OLP、OSCC的表達(dá)為20%、55%、70%，3組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。NF-κBp65的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。EGFR表達(dá)與OSCC組織學(xué)分型有關(guān)(P<0.05)。NF-κBp65與EGFR在OLP中的表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)。NF-κBp65、EGF和EGFR在OSCC中表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論NF-κBp65、EGF和EGFR蛋白的表達(dá)在OLP向OSCC的轉(zhuǎn)變中作為OSCC早期診斷的客觀指標(biāo)之一。

癌，鱗狀細(xì)胞；扁平苔蘚,口腔；口腔腫瘤；黏膜；表皮生長因子；受體，表皮生長因子；NF-κBp65

口腔扁平苔蘚(oral lichen planus，OLP)是發(fā)生于口腔黏膜的慢性炎性疾病，臨床分型中糜爛型OLP癌變率約為0.5%。核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)是具有多向性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用的轉(zhuǎn)錄因子，在細(xì)胞信號(hào)傳遞中起著非常重要的作用，在一些免疫性疾病中均有表達(dá)，在OLP中也有報(bào)道[1]。免疫化學(xué)研究發(fā)現(xiàn)NF-κB p65在口腔癌的早期就被激活[2]。表皮生長因子(epidermal growth factor,EGF)是一種強(qiáng)有力的角質(zhì)形成細(xì)胞分裂劑，通過表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)介導(dǎo)對(duì)多種組織細(xì)胞具有促進(jìn)增殖作用。EGFR是一種具有酪氨酸蛋白激酶活性多功能跨膜糖蛋白，在細(xì)胞生長、增殖和分化中起著重要的作用，EGFR與口腔鱗癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的關(guān)系也曾有報(bào)道[3]。NF-κB p65、EGF、EGFR三者在由OLP向OSCC轉(zhuǎn)變過程中所起的作用目前研究較少，本文采用免疫組織化學(xué)SP法聯(lián)合檢測(cè)NF-κB p65、EGF、EGFR在OLP和OSCC中的表達(dá)和分布情況，為探索OLP向OSCC發(fā)展提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院2011-2012年臨床資料完整的病理標(biāo)本40例，其中OLP 20例，OSCC 20例，另取創(chuàng)傷清創(chuàng)取得正常口腔黏膜組織20例為對(duì)照。納入、排除標(biāo)準(zhǔn)：OLP、OSCC患者都經(jīng)病理確診；所有患者近6個(gè)月內(nèi)均未接受局部或全身腎上腺皮質(zhì)激素治療，并且OSCC患者未接受放療、化療。20例OLP患者(糜爛型11例，非糜爛9例)中女13例，男7例；平均年齡57.7歲，≥50.0歲的13例，<50.0歲7例。20例OSCC標(biāo)本患者中女9例，男11例，平均年齡62.6歲，≥50.0歲15例，<50.0歲5例。OSCC依據(jù)國際上TNM分類標(biāo)準(zhǔn)臨床分期高分化8例，中分化7例，低分化5例。本研究前經(jīng)倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)，所有患者都簽寫知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)方法 所有標(biāo)本經(jīng)過4%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，進(jìn)行4 μm切片，分別用蘇木素-伊紅(HE)染色觀察病理變化和免疫組織化學(xué)(SP法)染色觀察蛋白表達(dá)情況。NF-κB p65小鼠抗人單克隆抗體，兔抗人EGF、EGFR單克隆抗體、SP免疫組織化學(xué)試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色、蘇木素復(fù)染液均購自北京中杉金橋生物科技有限公司。嚴(yán)格按試劑盒說明書方法染色，所有切片染色均在相同條件下進(jìn)行。用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗做陰性對(duì)照，肺鱗癌組織做NF-κB p65、EGF、EGFR的陽性對(duì)照。

1.2.2 結(jié)果判斷 所有免疫組織化學(xué)染色結(jié)果均由兩位病理醫(yī)師在不知病例資料的情況下盲法閱片判斷。醫(yī)師對(duì)每張切片在高倍鏡下觀察，高倍鏡下選取5個(gè)視野(每個(gè)視野觀察細(xì)胞數(shù)不少于200)，按陽性細(xì)胞所占百分比及著色深淺進(jìn)行結(jié)果判定。NF-κB p65蛋白陽性著色為細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒物質(zhì)，EGF和EGFR蛋白陽性著色均為棕黃色顆粒樣物質(zhì)，位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜表面。免疫組織化學(xué)的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)分為4級(jí)，(1)按切片中細(xì)胞著色深淺評(píng)分：0分，無顯色；1分，淺黃色；2分，棕黃色；3分，棕褐色。(2)按陽性細(xì)胞數(shù)占同類細(xì)胞數(shù)的百分比分為4級(jí)，陽性細(xì)胞數(shù)小于10%為0分，10%～<30%為1分，30%～70%為2分，>70%為3分。兩種評(píng)分相加，0～<2分為(-)，2～<4分為(+)，3～<5分為(++)，5～6分為(+++)；統(tǒng)計(jì)時(shí)(-)為陰性，其余為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，組間采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

NF-κB p65在正常口腔黏膜(normal oral mucosal，NOM)、OLP及OSCC中細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中表達(dá)。EGF和EGFR在NOM、OLP及OSCC中細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞膜表面表達(dá)。NF-κB p65、EGF和EGFR蛋白分別在NOM、OLP 及OSCC中的表達(dá)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但3種蛋白分別在OLP與OSCC中的表達(dá)差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見圖1～3和表1。NF-κB p65蛋白的表達(dá)與患者年齡、OLP是否糜爛型、OSCC組織學(xué)分型無關(guān)(P>0.05)，但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。EGF的表達(dá)與患者年齡、OLP是否糜爛、OSCC組織學(xué)分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)。EGFR表達(dá)與患者年齡、OLP是否糜爛型、OSCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)，但與OSCC組織學(xué)分型有關(guān)(P<0.05)，見表2。NF-κB p65、EGF 與EGFR在OLP，OSCC中表達(dá)的相關(guān)性分析表明，在OLP中NF-κB p65與EGFR的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.471,P=0.036)。在OSCC中NF-κB p65與EGF的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.560,P=0.010)，NF-κB p65與EGFR的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.545,P=0.013)，EGF與EGFR的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.661,P=0.001)。

表1 NF-κB p65、EGF和EGFR蛋白在NOM、OLP及OSCC中的表達(dá)[n(%)]

A:NOM(×200)；B：OLP(×200);C:OSCC(×400)。

圖1 NF-κB p65在NOM、OLP、OSCC組織中的表達(dá)(SP)

A:NOM(×200)；B：OLP(×200);C:OSCC(×400)。

圖2 EGF在在NOM、OLP、OSCC組織中的表達(dá)(SP)

A:NOM(×200)；B：OLP(×200);C:OSCC(×400)。

圖3 EGFR在在NOM、OLP、OSCC組織中的表達(dá)(SP)

3 討 論

OLP是一種原因不明的口腔黏膜慢性炎癥性免疫性疾病。OLP是一種癌前狀態(tài)，長期糜爛病損有惡變可能。OSCC在頜面部的惡性腫瘤中占有80%以上，本研究通過NF-κB p65、EGF與EGFR在OLP和OSCC中的表達(dá)，對(duì)于OLP可能轉(zhuǎn)變成OSCC的早期診斷提供可能的理論依據(jù)。

本研究顯示NF-κB p65從NOM、OLP到OSCC的表達(dá)陽性率逐漸升高，說明NF-κB p65的活化可促使OLP炎癥反應(yīng)加重，有研究也顯示NF-κB p65是主要免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)器，在導(dǎo)致OLP炎性反應(yīng)遷延不愈的過程中起到了重要作用[4]；Balkwill等[5]研究發(fā)現(xiàn)所有癌癥中估計(jì)15%～20%與炎癥有關(guān)，特別是慢性炎癥，本研究在OSCC中表達(dá)最高，可能是炎癥使NF-κB p65被不恰當(dāng)?shù)募せ畎l(fā)生癌變，但具體的百分率還有待進(jìn)一步研究。NF-κB p65蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，說明NF-κB p65不僅在炎癥表達(dá)中起作用，也可能在口腔腫瘤的轉(zhuǎn)移中起一定的作用；在OLP中糜爛型比非糜爛型陽性率高，OSCC中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者較無轉(zhuǎn)移者陽性率高，隨著分化程度的降低其陽性率表達(dá)降低，推測(cè)NF-κB p65在口腔黏膜早期癌變過程中起了一定作用。

EGF與EGFR結(jié)合的形式提高腫瘤浸潤[6]，EGFR在腫瘤中高表達(dá)，及其在腫瘤細(xì)胞生長、分化中起著重要作用[7]，使EGFR成為具有良好前景的腫瘤診斷和治療靶點(diǎn)[8]。本研究發(fā)現(xiàn)，EGF在OLP和OSCC中的陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示EGF可能在OLP向OSCC轉(zhuǎn)變中起著重要的作用。EGF的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，這與許野等[9]研究相反，可能是所取樣本量不足所致，有待進(jìn)一步研究。EGF陽性表達(dá)率隨著年齡的增長，糜爛型增加，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者增加，但差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，可能是EGF只為EGFR其中的一種配體，在腫瘤發(fā)生中只起到部分作用。EGFR蛋白表達(dá)與OSCC組織學(xué)分型有關(guān)，可能是異?；罨腅GFR通路可以改變細(xì)胞生長的特性，以EGF等配體依賴的方式促進(jìn)細(xì)胞的惡性化及腫瘤的發(fā)生，腫瘤又能以自分泌或旁分泌的形式產(chǎn)生EGF特異配體，從而抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，進(jìn)而促進(jìn)EGFR高表達(dá)于腫瘤[10]。

本研究發(fā)現(xiàn)在OLP中NF-κB p65與EGFR有相關(guān)性；在OSCC中NF-κB p65分別與EGF和EGFR都呈正相關(guān)性，隨著EGF陽性率的增加，NF-κB p65的活化明顯增加，推測(cè)NF-κB p65與EGF及EGFR在OLP發(fā)展成為OSCC過程中有著協(xié)同作用，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的過度增殖與分化，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。本研究發(fā)現(xiàn)EGF的表達(dá)由NOM、OLP到OSCC是一個(gè)漸進(jìn)增加的過程，推測(cè)口腔黏膜中EGF的增高有發(fā)生癌變的可能。EGFR在OLP及OSCC中的表達(dá)差別不顯著，這提示EGFR在OLP向OSSC過程中起作用，這為EGFR可能成作為早期檢查OSCC提供了的依據(jù)。有研究發(fā)現(xiàn)NF-κB p65、EGF與EGFR間相互影響造成腫瘤的形成[11]，本研究發(fā)現(xiàn)在OSCC中NF-κB p65、EGF與EGFR的表達(dá)相互呈正相關(guān)性，這可能是EGFR可通過多條信號(hào)傳導(dǎo)通路激活NF-κB p65，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生[12]；OLP從非糜爛型至糜爛型最后成為OSCC是可能的，在OLP發(fā)病過程中具有協(xié)同作用。NF-κB p65、EGF與EGFR聯(lián)合表達(dá)在組織分型中隨著分化程度的降低，NF-κB p65陽性率的表達(dá)降低，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者比非轉(zhuǎn)移者的陽性率高，可能是NF-κB p65的活化參與癌細(xì)胞早期的浸潤和轉(zhuǎn)移；EGF與EGFR隨分化程度降低陽性率升高，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者比非轉(zhuǎn)移者的陽性率高，推測(cè)隨著由OLP至OSCC的進(jìn)展，EGF與EGFR的聯(lián)合表達(dá)呈現(xiàn)出一種增高的趨勢(shì)，有利于腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移，高表達(dá)的EGF與EGFR一定程度上激活NF-κB p65信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。

總之NF-κB p65、EGF與EGFR的活化在OLP向OSCC發(fā)生、發(fā)展中起到重要的作用。對(duì)OLP患者進(jìn)行回訪并有效監(jiān)測(cè)，明確3種蛋白在癌變過程中的具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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Expression and clinical significance of NF-κB p65,EGF and EGFR in oral lichen planus and oral squamous cell carcinoma*

ZhouCong，WuBaoqin，ZhangQimei，WangZhongchao

(DepartmentofOralMedicine,AffiliatedStomatologyHospital,SouthwestMedicalUniversity,Luzhou,Sichuan646000,China)

Objective To investigate the expressions and significances of nuclear factor kappa B p65(NF-κB p65),epidermal growth factor(EGF) and epidermal growth factor receptor(EGFR) in oral lichen planus (OLP) and oral squamous cell carcinoma(OSCC).Methods The immunohistochemical technique with SP method was used to detect the expression of NF-κB p65,EGF and EGFR of oral mucosa in 20 cases of normal oral mucosa(NOM)tissue,20 cases of OLP tissue,and 20 cases of OSCC tissue.Results The expression rates f NF-κB p65 protein in NOM,OLP and OSCC were 10%,65% and 75% respectively,the difference among 3 groups were statistically significant(P<0.05).The expression rates of EGF in NOM,OLP and OSCC were 25%,45% and 65% respectively,the difference among 3 groups were statistically significant(P<0.05).The expression rates of EGFR in NOM,OLP and OSCC were 20%,55% and 70% respectively,the difference among 3 groups were statistically significant(P<0.05).The NF-κB p65 expression was correlated with lymph node metastasis(P<0.05).The EGFR expression was correlated with the histological grades(P<0.05).There was a positive correlation between expression of NF-κB p65 and EGFR in OLP(P<0.05).There was a positive correlation between NF-κB p65 and EGF with EGFR in OSCC (P<0.05).Conclusion NF-κB p65,EGF and EGFR might be one of the objective indicators of the early diagnosis of OSCC.

carcinoma,squamous cell；lichen planus,oral；mouth neoplasms；mucous membrane；epidermal growth factor；receptor,epidermal growth factor；NF-κB p65

??·臨床研究

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.02.013

四川西南醫(yī)科大學(xué)資助項(xiàng)目(200903)。

周驄(1975-)，主治醫(yī)師，碩士，主要從事口腔黏膜及牙周病的臨床及教學(xué)方面研究。

R

A

1671-8348(2017)02-0187-04

2016-07-28

2016-08-19)