卵巢癌組織中PTEN和P53蛋白的表達(dá)及其與卵巢癌臨床特點(diǎn)的關(guān)系*

劉曉燕，張 晶，魏振彤

(1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院腫瘤婦科，長春 130021；2.福建省廈門市第二醫(yī)院檢驗科 361021)

卵巢癌組織中PTEN和P53蛋白的表達(dá)及其與卵巢癌臨床特點(diǎn)的關(guān)系*

劉曉燕1，張 晶2，魏振彤1

(1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院腫瘤婦科，長春 130021；2.福建省廈門市第二醫(yī)院檢驗科 361021)

目的 對卵巢癌組織中PTEN和P53蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行研究，探討其與卵巢癌臨床特點(diǎn)的關(guān)系。方法 選擇2013年12月至2014年12月吉林大學(xué)第一醫(yī)院腫瘤婦科手術(shù)切除卵巢上皮癌標(biāo)本50例和正常卵巢組織標(biāo)本50例作為研究對象，免疫組織化學(xué)染色法測定組織中PTEN和P53的表達(dá)情況，觀察卵巢癌組織中PTEN和P53的表達(dá)和卵巢癌臨床特點(diǎn)的關(guān)系。結(jié)果 卵巢癌組織中PTEN陽性率明顯低于正常卵巢組織(P<0.05)，P53陽性率明顯高于正常卵巢組織(P<0.05)。卵巢癌Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期的PTEN陽性率明顯低于Ⅰ期，高分化卵巢癌組織中PTEN陽性率明顯高于低分化和中分化卵巢癌組織(P<0.05)。卵巢癌Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期的P53陽性率明顯高于Ⅰ期(P<0.05)，低分化卵巢癌組織中P53陽性率明顯高于中分化和高分化卵巢癌組織(P<0.05)。結(jié)論 卵巢癌組織中PTEN表達(dá)降低，P53表達(dá)升高，PTEN和P53的表達(dá)和卵巢癌的臨床分期及分化程度關(guān)系密切。

卵巢腫瘤；p53；PTEN；臨床分期；分化程度

在女性生殖道惡性腫瘤中，卵巢癌的發(fā)病率僅低于宮頸癌及子宮內(nèi)膜癌，卵巢癌的病死率則居于首位，大部分卵巢癌為卵巢上皮癌，因卵巢癌早期沒有明顯的臨床癥狀，并且發(fā)展比較快，很多患者就診時已為卵巢癌晚期[1]。因卵巢癌的診斷比較晚，治療效果比較差，轉(zhuǎn)移率和復(fù)發(fā)率比較高，探討卵巢癌的發(fā)病機(jī)制，探索新的治療靶點(diǎn)對卵巢癌的診治具有重要意義。在多種遺傳相關(guān)性疾病和惡性腫瘤中PTEN基因存在缺失或者突變，和惡性腫瘤的生長、發(fā)育關(guān)系密切，在腫瘤的形成過程中發(fā)揮重要作用[2-3]。P53基因參與細(xì)胞分化、凋亡及老化的調(diào)控，能夠抑制腫瘤增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中也發(fā)揮重要作用[4-5]。本研究為探討PTEN和P53蛋白和卵巢癌的關(guān)系，對卵巢癌組織中PTEN和P53蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行研究，并分析其與卵巢癌臨床特點(diǎn)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年12月至2014年12月吉林大學(xué)第一醫(yī)院腫瘤婦科手術(shù)切除卵巢上皮癌標(biāo)本50例和正常卵巢組織標(biāo)本50例作為研究對象，卵巢癌組織標(biāo)本患者平均年齡(51.3±5.1)歲，正常卵巢組織標(biāo)本患者年齡(48.3±6.4)歲，比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。卵巢癌組織標(biāo)本患者手術(shù)治療前沒有進(jìn)行過手術(shù)及放化療，手術(shù)治療方式為卵巢癌全面分期手術(shù)及腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)，手術(shù)切除卵巢癌組織經(jīng)病理證實為卵巢漿液性腺癌組織，其中卵巢癌臨床分期Ⅰ期8例，Ⅱ期15例，Ⅲ～Ⅳ期27例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例；低分化30例，中分化14例，高分化6例。正常卵巢組織為良性卵巢囊腫手術(shù)切除的正常卵巢組織。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑和儀器 兔抗人PTEN(美國Sigma 公司)，兔抗人P53(美國Sigma 公司)，免疫組織化學(xué)染色試劑盒(上海西唐生物科技有限公司)，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒(上海西唐生物科技有限公司)等；顯微鏡(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)，切片機(jī)(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)等。

1.2.2 實驗方法 制備組織切片：將手術(shù)切除的卵巢癌組織和正常卵巢組織標(biāo)本用甲醛固定，石蠟常規(guī)包埋，切片機(jī)將其切成5 μm的切片，進(jìn)行PTEN和P53的免疫組織化學(xué)染色。參照免疫組織化學(xué)試劑盒的說明測定組織中PTEN和P53的表達(dá)情況。陽性對照為卵巢癌陽性切片組織，陰性對照為磷酸鹽緩沖液(PBS)液代替一抗。結(jié)果判定：每個切片組織選擇8個高倍視野計算陽性細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的百分比，細(xì)胞核和(或)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有棕色顆粒的細(xì)胞為陽性細(xì)胞，PTEN陰性為細(xì)胞內(nèi)沒有棕色顆?；蛘呒?xì)胞質(zhì)內(nèi)淺棕色顆粒小于5%；PTEN陽性為細(xì)胞內(nèi)有深棕色顆?；蛘邷\棕色顆粒大于或等于5%。P53陰性為細(xì)胞內(nèi)沒有棕色顆?；蛘呒?xì)胞質(zhì)內(nèi)淺棕色顆粒小于5%，P53陽性為細(xì)胞內(nèi)有深棕色顆粒或者淺棕色顆粒大于或等于5%。

1.2.3 主要觀察指標(biāo) 卵巢癌組織和正常卵巢組織中PTEN和P53的表達(dá)情況，卵巢癌組織中PTEN和P53的表達(dá)情況和卵巢癌臨床特點(diǎn)的關(guān)系。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS20.0軟件進(jìn)行分析，計數(shù)資料用率表示，組間采用χ2檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 卵巢癌組織和正常卵巢組織中PTEN的表達(dá)情況比較 卵巢癌組織中PTEN陽性率明顯低于正常卵巢組織(χ2=14.324，P=0.000)，見表1。

2.2 卵巢癌組織和正常卵巢組織中P53的表達(dá)情況比較 卵巢癌組織中P53陽性率明顯高于正常卵巢組織(χ2=8.934,P<0.05)，見表1。

表1 卵巢癌組織和正常卵巢組織中PTEN的表達(dá)情況比較[n(%)]

2.3 卵巢癌組織中PTEN的表達(dá)情況和卵巢癌臨床特點(diǎn)的關(guān)系 卵巢癌組織中PTEN的表達(dá)情況和卵巢癌的臨床分期和分化程度相關(guān)，不同的臨床分期之間PTEN陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，其中Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期的PTEN陽性率明顯低于Ⅰ期(χ2=5.957、11.707，P=0.015、0.001)，Ⅱ期PTEN陽性率和Ⅲ～Ⅳ期PTEN陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.393，P=0.531)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移卵巢癌組織中PTEN陽性率和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移卵巢癌組織PTEN陽性率之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；不同分化程度卵巢癌組織中PTEN陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其中高分化卵巢癌組織中PTEN陽性率明顯高于低分化和中分化卵巢癌組織(χ2=10.250、5.487，P=0.001、0.019)，低分化卵巢癌組織中PTEN陽性率和中分化卵巢癌組織PTEN陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.174，P=0.677)，見表2。

表2 卵巢癌組織中PTEN的表達(dá)情況和卵巢癌臨床特點(diǎn)的關(guān)系

2.4 卵巢癌組織中P53的表達(dá)情況和卵巢癌臨床特點(diǎn)的關(guān)系 卵巢癌組織中P53的表達(dá)情況和卵巢癌的臨床分期和分化程度相關(guān)，不同的臨床分期之間P53陽性率比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，其中Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期的P53陽性率明顯高于Ⅰ期(χ2=7.738、11.264，P=0.005、0.000)，Ⅱ期P53陽性率和Ⅲ～Ⅳ期P53陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.105，P=0.746)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移卵巢癌組織中P53陽性率和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移卵巢癌組織P53陽性率之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；不同分化程度卵巢癌組織中P53陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其中低分化卵巢癌組織中P53陽性率明顯高于中分化卵巢癌組織和高分化卵巢癌組織(χ2=4.127、5.428，P=0.042、0.020)，中分化卵巢癌組織中P53陽性率也高于高分化卵巢癌組織，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.471，P=0.492),見表3。

表3 卵巢癌組織中P53的表達(dá)情況和卵巢癌臨床特點(diǎn)的關(guān)系

3 討 論

晚期卵巢癌的治療原則是腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)和輔助化療，卵巢癌的化療以鉑類和紫杉醇為主，由于卵巢癌大多發(fā)現(xiàn)時已為卵巢癌晚期，治療效果比較差，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)率高，5年生存率比較低，因此研究卵巢癌的發(fā)生機(jī)制，探索新的治療靶點(diǎn)具有重要的意義[6-7]。卵巢癌的發(fā)生是比較復(fù)雜的過程，由多種基因參與，和多種抑癌基因的異常表達(dá)關(guān)系密切，不同抑癌基因的表達(dá)方式和抑癌機(jī)制不同。卵巢癌發(fā)生的機(jī)制尚不十分明確，細(xì)胞周期的調(diào)控機(jī)制異常是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的共同特征，細(xì)胞周期調(diào)控具有雙向調(diào)控作用，由多種正負(fù)調(diào)節(jié)蛋白進(jìn)行正負(fù)雙向調(diào)節(jié)，任何一方發(fā)生異常都會引起細(xì)胞的生長失去控制，引起腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展。

PTEN基因是一種抑癌基因，具有雙特異磷酸酶活性，具有磷酸酶活性和抑癌基因的特性[8-9]，能夠調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡，在腫瘤細(xì)胞的粘連和轉(zhuǎn)移方面也具有重要作用，和腫瘤的生長關(guān)系密切，在腫瘤的形成過程中具有重要作用，在多種遺傳相關(guān)性疾病和惡性腫瘤中存在PTEN基因缺失和突變[10-11]。P53含有10個內(nèi)含子和11個外顯子，有突變型P53和野生型P53，野生型P53是一種抑癌基因，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，突變型P53是一種癌基因，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)癌癥的發(fā)生、發(fā)展[12-13]。野生型P53抑制細(xì)胞的分裂和生長，在P53基因突變或者缺失后，對細(xì)胞的監(jiān)控作用消失，細(xì)胞發(fā)生突變，染色體出現(xiàn)畸形，引起細(xì)胞的癌變[14-15]。本研究結(jié)果表明，卵巢癌組織中PTEN陽性率明顯低于正常卵巢組織，而P53陽性率明顯高于正常卵巢組織。PTEN基因和卵巢癌的臨床分期和分化程度有關(guān)，和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移沒有明顯相關(guān)性，卵巢癌的臨床分期越高。PTEN的陽性率越低；卵巢癌的分化程度越高，PTEN的陽性率越高。考慮PTEN基因缺失可能是卵巢癌的晚期事件，在卵巢癌的發(fā)展和惡化中發(fā)揮一定作用，可以成為卵巢癌預(yù)后和組織分化的指標(biāo)。本研究檢測的突變型P53基因和卵巢癌的臨床分期和分化程度也有一定關(guān)系，但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移沒有明顯相關(guān)性，表明突變型P53能夠促進(jìn)卵巢癌的細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化，對卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展具有促進(jìn)作用，對卵巢癌的診治及預(yù)后評估也具有一定意義。

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Expression of PTEN and P53 protein in ovarian cancer tissue and its relationship with clinical characteristics of ovarian cancer*

LiuXiaoyan1，ZhangJing2，WeiZhentong1

(1.DepartmentofGynecologyandOncology,FirstHospitalofJilinUniversity,Changchun,Jilin130021,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,XiamenMunicipalSecondHospital,Xiamen,Fujian361021,China)

Objective To study the expressions of PTEN and P53 protein in ovarian cancer tissue and to investigate their relationship with the clinical characteristics of ovarian cancer.Methods Fifty specimens of operatively resected ovarian epithelial cancer and 50 specimens of normal ovarian tissue in the First Hospital of Jilin University from December 2013 to December 2014 were selected as the study objects.The expressions of PTEN and P53 in ovarian cancer tissue were examined by immunohistochemical staining method.The relationship between the PTEN and P53 expressions with the clinical characteristics of ovarian cancer were observed.Results The PTEN positive rate of ovarian cancer tissue was significantly lower than that of normal ovarian tissue (P<0.05).The P53 positive rate of ovarian cancer tissue was significantly higher than that of normal ovarian tissue (P<0.05).The PTEN positive rate of ovarian cancer stage Ⅱ and stage Ⅲ-Ⅳ was lower than that of stage Ⅰ (P<0.05).The PTEN positive rate of well-differentiated ovarian cancer tissue was higher than that of moderately differentiated and poorly differentiated tissue(P<0.05).The P53 positive rate of ovarian cancer stage Ⅱ and Ⅲ-Ⅳ was significantly higher than that of stage Ⅰ (P<0.05),the P53 positive rate of poorly differentiated ovarian cancer tissue was higher than that of moderately differentiated and well-differentiated tissue (P<0.05).Conclusion The PTEN expression in ovarian cancer tissue is decreased and the P53 expression is increased,the expression of PTEN and P53 is closely related to the clinical stage and differentiation degree of ovarian cancer.

ovarian neoplasms;p53;PTEN;clinical stage;differentiation degree

??·臨床研究

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.02.011

吉林省科技發(fā)展計劃(20140520032JH)；吉林省教育廳“十三五”科學(xué)研究規(guī)劃項目(2015-503)。

劉曉燕(1990-)，在讀碩士，主要從事婦科腫瘤方面研究。

R

A

1671-8348(2017)02-0182-03

2016-07-01

2016-09-05)