廣州地區(qū)貓泛白細胞減少癥病毒分離鑒定及全基因組遺傳分析

洪馬林，付 橙，黃 三，周 沛，粟 碩，李守軍

(華南農(nóng)業(yè)大學 獸醫(yī)學院/廣東省獸醫(yī)臨床重大疾病綜合防控重點實驗室/廣東省寵物工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510642)

廣州地區(qū)貓泛白細胞減少癥病毒分離鑒定及全基因組遺傳分析

洪馬林，付 橙，黃 三，周 沛，粟 碩，李守軍

(華南農(nóng)業(yè)大學 獸醫(yī)學院/廣東省獸醫(yī)臨床重大疾病綜合防控重點實驗室/廣東省寵物工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510642)

【目的】分析廣州地區(qū)貓泛白細胞減少癥病毒(Feline panleukopenia virus, FPLV)的自然重組、跨宿主傳播以及流行變異情況?！痉椒ā坎杉伤聘腥矩埛喊准毎麥p少癥病毒的貓糞便樣品進行細胞分離，并對陽性病料提取基因組DNA，PCR擴增獲得病毒的全基因組序列，并與GenBank中相關的參考毒株序列進行遺傳進化分析，同時對VP2基因與NS1基因的主要氨基酸位點進行差異分析?！窘Y(jié)果】成功獲得2株貓泛白細胞減少癥病毒及其全基因組序列。遺傳進化分析顯示，廣州地區(qū)分離的貓泛白細胞減少癥病毒FPLV-GZ01、FPLV-GZ02與我國其他分離毒株FPLV-XJ01、FPLV-HRB屬同一分支，提示FPLV-GZ01、FPLV-GZ02由FPLV-XJ1進化而來；NS1基因系統(tǒng)進化樹顯示，F(xiàn)PLV存在與CPV-447重組的可能。主要氨基酸位點分析顯示，F(xiàn)PLV在VP2基因中的主要氨基酸位點上的遺傳變異比CPV保守；在NS1基因上發(fā)現(xiàn)FPLV-GZ01、FPLV-GZ02分別存在不同程度的氨基酸位點突變。【結(jié)論】廣州地區(qū)分離的貓泛白細胞減少癥病毒仍在不斷地重組進化。

貓泛白細胞減少癥病毒； 細小病毒； 分離鑒定； 全基因組； 遺傳分析

細小病毒(Parvovirus)是一種單股負鏈的線狀DNA病毒，屬于細小病毒科Parvoviridae細小病毒屬Parvovirus，病毒粒子在電子顯微鏡下呈圓形或六邊形，無囊膜結(jié)構(gòu)，核衣殼為軸對稱的二十面體[1]。隨著細小病毒的不斷遺傳進化，病毒基因組序列也在不斷地發(fā)生突變，其宿主特異性、跨物種傳播、自然重組等生物學特性存在改變的可能。細小病毒基因組含有2個開放閱讀框(ORF)：第1個ORF位于基因組的5′端，編碼非結(jié)構(gòu)蛋白NS1和NS2；第2個ORF位于基因組的3′端，編碼結(jié)構(gòu)蛋白VP1和VP2。2個ORFs分別含有各自獨立的啟動子，非結(jié)構(gòu)蛋白和結(jié)構(gòu)蛋白的mRNA終止于共同的Poly(A)信號，并且可以通過mRNA的可變剪接形成不同的翻譯模板。VP2蛋白是衣殼蛋白的主要成分，是主要的抗原蛋白，具有凝血活性和介導細小病毒感染宿主細胞的作用。NS1蛋白是最主要的非結(jié)構(gòu)蛋白，對細小病毒的復制具有重要的調(diào)節(jié)作用。病毒基因的中間部分，存在著500 bp的間隔區(qū)；而基因組的兩側(cè)，存在著與復制密切相關的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，并且高度磷酸化，這種結(jié)構(gòu)可能與保護病毒基因組不被降解有關[2-3]。

貓泛白細胞減少癥是由貓泛白細胞減少癥病毒(Feline panleukopenia virus，F(xiàn)PLV)引起的一種高度接觸性急性傳染病，以高熱、嘔吐、白細胞嚴重減少和腸炎為特征，而犬細小病毒病是由犬細小病毒(Canine parvovirus，CPV) 引起的犬科動物的一種急性傳染病，以劇烈嘔吐、 出血性腸炎、白細胞顯著減少及心肌炎為主要特征，幼犬較易發(fā)病。FPLV和CPV均屬于細小病毒屬成員，它們在宿主特異性上存在一定的差異。FPLV是目前細小病毒屬中感染范圍最寬、致病性最強的一種[4]。FPLV在自然條件下感染貓科和鼬科以及多種野生動物，如虎、豹、獅子和浣熊，但以體型較小的貓科動物最為易感。此外，在猴子中也分離出FPLV。CPV主要感染犬、貓[5-6]。隨著宿主間的相互接觸以及細小病毒的不斷遺傳變異，宿主范圍也出現(xiàn)了一定的變化，CPV的宿主范圍由最開始的單一犬群感染向犬、貓科動物等多種動物感染發(fā)展。在進化過程中，CPV出現(xiàn)了CPV-2、CPV-2a、new CPV-2a、CPV-2b、new CPV-2b、CPV-2c等基因型，而目前鮮見對FPLV進行基因分型，這可能與CPV的VP2基因核苷酸突變率遠高于FPLV有關[7-8]。病毒VP2基因的一些突變使得病毒能夠有效感染新的宿主，并在其間傳播，適應性進化的逐漸積累導致了細小病毒的廣泛流行[9]。此外，由于FPLV的基因組序列較小，因此可將FPLV的遺傳進化過程作為研究細小病毒進化以及病毒跨種傳播的重要模型[10]。

本試驗通過對疑似感染貓泛白細胞減少癥病毒的貓糞便樣品進行細胞分離，將成功分離到貓泛白細胞減少癥病毒的病料提取基因組DNA后，進行全基因組序列測定分析，以弄清貓泛白細胞減少癥病毒主要基因VP2與NS1的突變情況，闡明廣州地區(qū)貓泛白細胞減少癥病毒在遺傳進化方面的情況。

1 材料與方法

1.1 材料

2014年12月—2015年5月在華南農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)院采集疑似感染貓泛白細胞減少癥病毒的病貓糞便樣品11份。

F81細胞系由廣東省獸醫(yī)臨床重大疾病綜合防控重點實驗室保存。

pZeroBack載體、Fast HiFidelity Polymerase高保真酶、DH5α感受態(tài)細胞、糞便基因組DNA提取試劑盒均為天根生化科技(北京)有限公司產(chǎn)品；DNA凝膠回收純化試劑盒為Axygen公司產(chǎn)品；DMEM細胞培養(yǎng)液為Hyclone公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 貓泛白細胞減少癥病毒的分離 稱取貓糞便樣品0.2 g，用DMEM細胞培養(yǎng)液混勻，制成質(zhì)量比為1∶9的懸浮液，5 000 r·min-1離心15 min，上清液用0.22 μm的濾膜過濾，收集濾液，置于-20 ℃條件下保存?zhèn)溆谩⑻幚砗玫纳锨逡喊凑占毎囵B(yǎng)液總體積的1/10接種于F81細胞系，置于37 ℃、CO2體積分數(shù)為5%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，同時設置正常細胞作為對照，每日觀察細胞病變(Cytopathic effect，CPE)情況。如未出現(xiàn)CPE，則待細胞長滿后進行正常傳代。若經(jīng)過盲傳5代后仍不產(chǎn)生CPE,則視為陰性;若CPE達到80%以上，則經(jīng)-80 ℃/37 ℃反復凍融3次后收毒，置于-80 ℃條件下保存。

1.2.2 引物的設計與合成 根據(jù)GenBank上FPLV(登錄號：M38246)的參考序列設計6對分段擴增FPLV全基因組序列的引物(表1)，設計好的引物送廣州華大基因科技股份有限公司進行合成。

表1 貓泛白細胞減少癥病毒全基因分段引物
Tab.1 Segmented primers for the complete genome of FPLV

引物名稱引物序列(5′→3′)FPLV?1F：GAATGATAGGCGGTTTGTGTGR：TCTTCTGCAATTTCTCTGAGCFPLV?2F：GCAGAAGATAGTGAATGGGTGR：TTGGTTGTGTATGTTCAGGTCFPLV?3F：TTATGACAACTAATGAAAATAR：TTTTAGTTGGTTTTGTTGGTCFPLV?4F：TGATACACCAGATCATCCATCR：TATTTGTTTGCCATGTATGTGFPLV?5F：GAAAATTCTGTGCCAGTACACR：TACCTTTCCACCAAAAATCTGFPLV?6F：AAGACTTCATGTAAATGCACCR：AGATTGATACTTATGGTAAGG

1.2.3 病毒基因組DNA提取、擴增、克隆及序列測定 糞便樣品DNA提取參考天根糞便基因組DNA提取試劑盒操作手冊，提取的DNA用無核酸酶的水溶解，置-20 ℃條件下保存。利用各分段PCR引物，以提取的基因組DNA為模板，分段擴增全基因組序列。50 μL反應體系：DNA模板2 μL，上、下游引物各1 μL，5×Fast HiFidelity PCR Buffer 10 μL，F(xiàn)ast HiFidelity Polymerase 1 μL，20×Fast PCR Enhancer 2.5 μL，ddH2O補足至50 μL。PCR產(chǎn)物以0.01 g·mL-1瓊脂糖凝膠電泳分離，使用DNA凝膠回收試劑盒進行回收；純化后的目的基因片段與pZeroBack載體連接、轉(zhuǎn)化，將經(jīng)PCR鑒定為陽性的待測菌液送廣州華大基因科技股份有限公司進行序列測定，每個克隆送3個陽性菌液，并對測序正確的菌液提取質(zhì)粒，-20 ℃條件下保存。

1.2.4 序列測定與分析 將測序獲得的序列用DNAstar軟件包中的Edit-seq和SeqMan程序進行整理，并拼接成線性的全基因組序列。使用Bioedit軟件進行序列匹配和多重序列比對(Clustal W法)；MEGA5軟件用于遺傳進化分析，并與從GenBank上收集的26個參考序列(表2)進行比較，采用Neighbor-joining (NJ，Replication=1 000)法繪制系統(tǒng)進化樹。

表2 26株細小病毒參考序列
Tab.2 Reference sequences of 26 parvovirus strains

毒株登錄號基因型年份來源國CPV?NM19296CPV?21995USACPV?M38M38245CPV?21996USACPV?F261FJ005261CPV?2b2009GermanyCPV?339AY742933newCPV?2a2005NewZealandCPV?447AY742934newCPV?2b2005USACPV?U6AY742935newCPV?2a2005GermanyCPV?395AY742936newCPV?2b2005USACPV?EFEF011664newCPV?2a2006ChinaCPV?NJ01EU310373newCPV?2a2008ChinaCPV?410EU659119newCPV?2b2008USACPV?13EU659118newCPV?2a2008USACPV?579EU659116CPV?22008USACPV?Y1AD26079CPV?2a2008JapanCPV?LZ2JQ268284newCPV?2b2013ChinaCPV?UY349KM457129CPV?2c2014UruguayCPV?UY135KM457112CPV?2c2014UruguayFPLV?M382M38246FPLV1996USAFPLV?X55X55115FPLV2005USAFPLV?XJ1EF988660FPLV2007ChinaFPLV?8bEU659114FPLV2008USAFPLV?367EU659111FPLV2008USAFPLV?889EU659113FPLV2008USAFPLV?KAEU659115FPLV2008USAFPLV?464EU659112FPLV2008USAFPLV?HRBKP280068FPLV2015ChinaFPLV?MG132KP769859FPLV2015Belgium

2 結(jié)果與分析

2.1 病毒分離結(jié)果

將病料上清液同步接種于F81細胞，并通過帶毒傳代的方法成功獲得了2株FPLV，編號為FPLV-GZ01和FPLV-GZ02。對照組的F81細胞貼壁生長，呈不規(guī)則的細胞形態(tài)，連接緊密(圖1A)，而接種病料上清液的試驗組則在連續(xù)傳代3次后出現(xiàn)CPE，其表現(xiàn)為細胞生長緩慢、細胞圓縮、 胞間聯(lián)系減少、細胞脫落等病變現(xiàn)象(圖1B)。

A：對照組的F81細胞；B：試驗組的F81細胞。

2.2 序列測定結(jié)果及相似性分析

將實驗室獲得的2株FPLV的核苷酸、氨基酸序列與表2中的參考序列對比分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)PLV-GZ01株NS1基因與其他毒株的核苷酸序列相似性為98.9%～99.6%，氨基酸序列相似性為98.7%～99.4%；VP2基因的核苷酸序列相似性為98.0%～99.5%，氨基酸序列相似性為97.1%～99.8%；全基因組的核苷酸序列相似性為87.6%～99.4%。FPLV-GZ02株NS1基因的核苷酸序列相似性為98.8%～99.8%，氨基酸序列相似性為98.8%～99.7%；VP2基因的核苷酸序列相似性為97.9%～99.8%，氨基酸序列相似性為96.9%～99.8%；全基因組的核苷酸序列相似性為82.4%～99.0%。表明分離毒株FPLV-GZ01、FPLV-GZ02與參考毒株之間的差異較小，相似性高，且NS1基因的核苷酸序列相似性高于VP2基因和全基因組的核苷酸序列相似性。

2.3 VP2、NS1基因及全基因組的核苷酸序列系統(tǒng)進化樹分析

將實驗室獲得的2株FPLV序列與表2中的26株細小病毒序列進行核苷酸序列系統(tǒng)進化樹分析(圖2～圖4)。結(jié)果表明，在VP2、NS1基因與全基因組的系統(tǒng)進化樹上，分別形成FPLV與CPV 2個大的分支。FPLV-GZ01與FPLV-GZ02均處在FPLV分支上，屬于FPLV，其中FPLV-GZ02與FPLV-HRB的親緣關系最接近，且FPLV-GZ02與FPLV-HRB組成的分支與FPLV-GZ01屬于同一分支。此外FPLV-GZ01、FPLV-GZ02與FPLV-HRB組成的分支與FPLV-XJ1接近。

圖2 細小病毒VP2基因的核苷酸序列系統(tǒng)進化樹

Fig.2 The phylogenetic tree based on nucleotide sequences of parvovirusVP2 gene

圖3 細小病毒NS1基因的核苷酸序列系統(tǒng)進化樹

Fig.3 The phylogenetic tree based on nucleotide sequences of parvovirusNS1 gene

圖4 細小病毒全基因組的核苷酸序列系統(tǒng)進化樹

Fig.4 The phylogenetic tree based on nucleotide sequences of the complete genomes of parvovirus

2.4 主要氨基酸位點的分析

分別選取FPLV-M382、CPV-N、CPV-Y1A 、CPV-NJ01、CPV-F261、CPV-410和CPV-UY349作為FPLV、CPV-2、CPV-2a、new CPV-2a、CPV-2b、new CPV-2b和 CPV-2c的參考毒株，并與FPLV-GZ01、FPLV-GZ02進行NS1和VP2基因的主要氨基酸位點比對(表3、表4)。

在VP2基因中主要的氨基酸位點上，與FPLV-M382相比，F(xiàn)PLV-GZ01和FPLV-GZ02沒有出現(xiàn)突變，提示FPLV VP2蛋白的功能在進化過程中較少發(fā)生改變；與CPV-N、CPV-Y1A、CPV-NJ01、CPV-F261、CPV-410和CPV-UY349相比，F(xiàn)PLV-GZ01、FPLV-GZ02、FPLV-M382在第80、93、103、323、564、568位點上出現(xiàn)氨基酸位點的宿主差異變化，表明VP2蛋白可能在不同宿主上表現(xiàn)出功能差異(表3)。在NS1基因中的部分氨基酸位點上，F(xiàn)PLV-GZ01分別在第546、584位點上出現(xiàn)新的氨基酸突變，F(xiàn)PLV-GZ02僅在第546位點上出現(xiàn)新的氨基酸突變，這些新的突變是否能引起NS1基因的功能甚至是細小病毒的生物學特性改變有待進一步研究(表4)。

表3VP2基因中主要的氨基酸位點分析
Tab.3 Analysis of major amino acid sites of theVP2 gene

毒株氨基酸位點808793103300305323426564568核酸類型FPLV?GZ01KMKVADDNNAFPLVFPLV?GZ02KMKVADDNNAFPLVFPLV?M382KMKVADDNNAFPLVCPV?NRMNAADNNSGCPV?2CPV?Y1ARLNAGYNNSGCPV?2aCPV?NJ01RLNAGYNNSGnewCPV?2aCPV?F261RLNAGYNDSGCPV?2bCPV?410RLNAGYNDSGnewCPV?2bCPV?UY349RLNAGYNESGCPV?2c

表4NS1基因中的部分氨基酸位點分析
Tab.4 Analysis of partial amino acid sites of theNS1 gene

毒株氨基酸位點248546584核酸類型FPLV?GZ01TPAFPLVFPLV?GZ02TPTFPLVFPLV?M382TSTFPLVCPV?NISTCPV?2CPV?Y1AISTCPV?2aCPV?NJ01ISTnewCPV?2aCPV?410ISTnewCPV?2bCPV?UY349ISTCPV?2c

3 討論與結(jié)論

本試驗采用F81細胞對收集的疑似感染FPLV的貓糞便樣品進行細胞分離。與對照組相比，試驗組出現(xiàn)了細胞生長緩慢、細胞圓縮、胞間聯(lián)系減少、細胞脫落等病變現(xiàn)象，與亢文華等[11]的報道相符。由于細小病毒的復制需要在宿主細胞分裂期才能滿足宿主細胞為其提供復制所需的酶等條件，因此采取同步接毒的方法分離病毒。通過對FPLV-GZ01和FPLV-GZ02的序列相似性分析，發(fā)現(xiàn)在核苷酸相似性、氨基酸相似性分析上，VP2基因比NS1基因變化差異大，表明VP2基因作為細小病毒衣殼的主要結(jié)構(gòu)蛋白在細小病毒分類、宿主特異性等方面具有重要作用。

系統(tǒng)進化樹分析發(fā)現(xiàn)，廣州地區(qū)貓泛白細胞減少癥病毒分離株FPLV-GZ01、FPLV-GZ02與我國其他地區(qū)的貓泛白細胞減少癥病毒分離株FPLV-XJ1、FPLV-HRB同在一個大分支上，且該大分支上又形成幾個小的分支，顯示FPLV-GZ01、FPLV-GZ02、FPLV-HRB毒株可能由早期的FPLV-XJ1毒株遺傳進化而來，而FPLV-GZ01、FPLV-GZ02毒株處在FPLV-XJ1與FPLV-HRB毒株之間，是否表明FPLV-HRB毒株可能由廣州地區(qū)分離株FPLV-GZ01、FPLV-GZ02進化而來，還需要進一步的研究。從宿主差異上來看，VP2、NS1基因與全基因組的系統(tǒng)進化樹分析顯示，總體上看貓泛白細胞減少癥病毒與犬細小病毒單獨形成2個大的分支，具有明顯的宿主特異性，但NS1基因的系統(tǒng)進化樹分析顯示CPV-447與FPLV形成的大分支處在同一分支上，這可能是由于CPV-447的NS1基因存在與貓泛白細胞減少癥病毒NS1基因重組的可能，這與Ohshima等[12]報道的FPLV-XJ1毒株出現(xiàn)CPV和FPLV的重組進化現(xiàn)象相符。為了進一步證明不同宿主細小病毒出現(xiàn)的重組現(xiàn)象，需要更深入的研究。

細小病毒中的VP2蛋白作為細小病毒衣殼的主要蛋白，在宿主差異方面起到關鍵作用，本研究選取了10個與宿主范圍、抗原性和血凝性相關的VP2基因中的氨基酸位點進行分析，其中第80、564、568位點與FPLV能否在貓體內(nèi)繁殖有關，而影響CPV在犬內(nèi)繁殖的氨基酸位點為第93、103、323位點[13-14]。此外，有報道在VP2基因的第300位氨基酸位點上發(fā)現(xiàn)天冬氨酸(D)突變，此位點突變株首先報道于越南的貓體內(nèi)，隨后在犬體內(nèi)也出現(xiàn)此氨基酸位點的突變株[15]。VP2基因的主要氨基酸位點分析結(jié)果顯示，廣州地區(qū)分離株FPLV-GZ01、FPLV-GZ02與參考毒株FPLV-M382相比，在這10個氨基酸位點上均一致，并沒有出現(xiàn)氨基酸突變，表明FPLV-GZ01、FPLV-GZ02毒株僅在貓體內(nèi)復制，尚不具備跨犬傳播的可能，但VP2基因其他氨基酸位點、病毒其他基因或宿主基因的改變是否會引起細小病毒的跨宿主傳播還有待更深入的研究。與CPV相比，F(xiàn)PLV在VP2基因的遺傳進化上更為保守，說明貓泛白細胞減少癥病毒在遺傳進化上相對較慢。在NS1基因的序列比對中，與FPLV-M382相比，發(fā)現(xiàn)FPLV-GZ02在第546位點出現(xiàn)由絲氨酸(S)向脯氨酸(P)的突變，而FPLV-GZ01除了在546位點上具有相同的氨基酸突變外，同時還在第584位點上出現(xiàn)了由蘇氨酸(T)向丙氨酸(A)的突變，NS1基因中第546、584位氨基酸位點的功能還有待于進一步研究，對于這2個位點的突變是否能引起貓泛白細胞減少癥病毒宿主特異性改變、是否能引起與其他細小病毒發(fā)生基因重組等情況值得研究。

本研究通過收集疑似感染貓泛白細胞減少癥病毒的貓糞便樣品進行細胞分離，提取陽性病料的基因組DNA進行測序，對貓泛白細胞減少癥病毒進行相似性、遺傳進化、主要氨基酸位點的分析，表明廣州地區(qū)的貓泛白細胞減少癥病毒在不斷地進化。為此，對貓泛白細胞減少癥病毒進行監(jiān)測，有利于掌握該地區(qū)貓泛白細胞減少癥病毒的流行變異情況，不僅為該地區(qū)貓泛白細胞減少癥病毒的預防和控制提供了一定的理論基礎和參考依據(jù)，而且對研究細小病毒的生物學特性、評估疫苗保護水平等具有重要意義。

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【責任編輯 李曉卉】

Isolation，identification and sequence analysis of complete genome of feline panleukopenia virus in Guangzhou area

HONG Malin，F(xiàn)U Cheng，HUANG San，ZHOU Pei，SU Shuo，LI Shoujun

( College of Veterinary Medicine，South China Agricultural University/Guangdong Provincial Key Laboratory of Prevention and Control for Severe Clinical Animal Diseases/Guangdong Technological Engineering Research Center for Pet，Guangzhou 510642，China)

【Objective】 To study the natural recombination，cross host transmission and prevalence of feline panleukopenia virus(FPLV)in Guangzhou area.【Method】Cells were isolated from stool samples of cats seemingly infected with FPLV，genome DNAs were extracted from positive samples，and complete virus genome sequences were amplified by PCR and were compared with relevant reference sequences from GenBank using genetic evolution analysis. The major amino acid sites were analyzed for differences betweenVP2 gene andNS1 gene. 【Result】Two FPLV strains were successfully isolated and the complete genome sequences of FPLV were obtained. The genetic evolution analysis indicated that FPLV-GZ01 and FPLV-GZ02 which were isolated from Guangzhou area belonged to the same branch with the other isolated strains FPLV-XJ1 and FPLV-HRB, and implied FPLV-GZ01 and FPLV-GZ02 evolved from FPLV-XJ01. TheNS1 gene phylogenetic analysis demonstrated that FPLV might have recombined with CPV-447. Analysis of major amino acid sites indicated that FPLV was more conservative than CPV in the genetic variation of theVP2 gene. FPLV-GZ01 and FPLV-GZ02 had different degrees of mutation in the amino acid sites of theNS1 gene. 【Conclusion】The feline panleukopenia viruses isolated from Guangzhou area have been still recombining and evolving.

feline panleukopenia virus； parvovirus； isolation and identification； complete genome； genetic analysis

2016- 03- 09優(yōu)先出版時間：2016-12-28

洪馬林(1989—)，男，碩士研究生，E-mail：malinhongmark@foxmail.com; 通信作者：李守軍(1968—)，男，教授，博士，E-mail：shoujunli@scau.edu.cn

國家重點研發(fā)計劃(2016YFD0501004);公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(201303042)

S852.65

A

1001- 411X(2017)01- 0009- 06

優(yōu)先出版網(wǎng)址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1110.s.20161228.0937.026.html

洪馬林，付 橙，黃 三，等.廣州地區(qū)貓泛白細胞減少癥病毒分離鑒定及全基因組遺傳分析[J].華南農(nóng)業(yè)大學學報，2017,38(1):9- 14.