食品中大腸菌群平板計(jì)數(shù)結(jié)果不確定度的評(píng)定

□ 方武龍 廣東東方縱橫檢測有限公司

食品中大腸菌群平板計(jì)數(shù)結(jié)果不確定度的評(píng)定

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通過對(duì)于有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)以及測量的不確定度的評(píng)定形式的參考，能夠有效測定出食品中大腸菌群檢測結(jié)果的不確定度。研究之后能夠明確食品里面大腸菌群平板技術(shù)結(jié)果的不確定度的來源，建立一種簡單適用的大腸菌群平板計(jì)數(shù)不確定度評(píng)定方法。結(jié)果表明，影響食品中大腸菌群平板計(jì)數(shù)結(jié)果不確定度的主要因素為取樣量的不確定度、稀釋倍數(shù)的不確定度、加樣體積的不確定度、平板上大腸菌群數(shù)量的不確定度和煌綠乳糖膽鹽肉湯管產(chǎn)氣比例產(chǎn)生的不確定度，其中后兩者產(chǎn)生的不確定度所占分量最大。

大腸菌群；平板計(jì)數(shù)；不確定度評(píng)定

腸菌群就是一些有特殊性質(zhì)的細(xì)菌，這些細(xì)菌和糞便污染有比較緊密的聯(lián)系。所以，群數(shù)的高低直接決定了糞便的污染程度，并且也直接反映出了對(duì)人類造成的影響[1]。糞便屬于排泄物，不僅包括無危害的糞便，還包括有病菌的糞便。所以，能夠看出食品里面存在糞便污染，這樣可以明確食品里面有腸道致病菌污染的存在，并可能引發(fā)一定的流行病，從而影響人們的身體健康。

1 檢測的原理和檢測的形式

1.1 檢測的原理

通過把樣品放在乳糖膽鹽里面進(jìn)行發(fā)酵，能夠得到一些顯示出陽性的菌體，之后在進(jìn)行平板培養(yǎng)，采取一定的試劑進(jìn)行染色。通過檢查以及乳糖培養(yǎng)，如果乳糖管能夠產(chǎn)生氣體，并且染色之后呈現(xiàn)出陰性，這樣的一種桿菌就是大腸菌群。

1.2 檢測的形式

通過無菌操作之后，再取樣，把取得的樣品放置在滅菌生理鹽水里面，通過充分?jǐn)嚢韬罂梢缘玫奖容^均勻的稀釋液體，之后再使用滅菌鹽水當(dāng)作稀釋液，通過參考有關(guān)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)以及對(duì)于樣品的研究分析，選擇出3個(gè)不同的稀釋度，每個(gè)稀釋度分別選擇幾個(gè)樣品[2-3]。放置在恒溫箱里面培養(yǎng)24 h，之后拿出觀察，將產(chǎn)生氣體的發(fā)酵管進(jìn)行轉(zhuǎn)種，將轉(zhuǎn)種的東西放置在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，再放置在恒溫箱里面培養(yǎng)24 h。之后拿出觀察，通過染色以及實(shí)驗(yàn)接種，再放置在恒溫箱里面培養(yǎng)24 h。只要乳糖管產(chǎn)生了氣體，并且革蘭染色顯示出陰性，這樣的桿菌就是大腸菌群陽性。通過對(duì)于呈現(xiàn)陽性管數(shù)的分析，進(jìn)而得到大腸菌的MPN值。通過充分的培養(yǎng)之后再開展對(duì)于不確定度的評(píng)定檢測，對(duì)某冷飲均質(zhì)后重復(fù)10次檢測大腸菌群的數(shù)據(jù)進(jìn)行不確定度評(píng)定。

2 對(duì)于不確定來源的分析以及對(duì)于不確定來源的評(píng)定

當(dāng)檢測微生物時(shí)，通常能夠人為樣品里面的細(xì)菌分布的均勻性以及細(xì)菌分布的重復(fù)性造成的不確定，直接影響了之后的檢測結(jié)果，降低了準(zhǔn)確度[4]。但不可以忽視樣品的情況、培養(yǎng)的過程、操作人員的情況，這些都會(huì)直接影響不確定度。通過分析工作中的實(shí)際，進(jìn)而分析不確定度產(chǎn)生的原因。

2.1 均勻性引入的不確定度

樣品里面的均勻性所造成的不確定度，會(huì)直接影響檢測結(jié)果，實(shí)驗(yàn)時(shí)需要參考相關(guān)規(guī)定[5]。把樣品充分結(jié)合之后再取樣，這樣得到的樣品比較均勻。

2.2 重復(fù)性檢測引入所造成的不確定度

重復(fù)性檢測會(huì)造成不確定度，這樣會(huì)直接影響檢測結(jié)果。這些也屬于不確定度。以下對(duì)于樣品進(jìn)行了二十次測定，通過對(duì)于檢測結(jié)果的分析，得到了這些數(shù)據(jù)。

當(dāng)制取樣品時(shí)引入的不確定度，樣品制取時(shí)涉及了對(duì)于樣品的稱量以及對(duì)于樣品的稀釋。通過分析能夠看出，不確定度是電子天平稱量引入的，并且也可能是玻璃器皿引入的。

3 討論分析

本文詳細(xì)分析了實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的不確定度分量，通過有關(guān)的研究能夠看出制備樣品時(shí)會(huì)產(chǎn)生不確定度分量，稀釋、接種以及檢測時(shí)，都會(huì)形成不確定度分量。通過對(duì)于這些因素的分析可以看出，這些分類所造成的影響比較小，可以被忽略掉。為了能夠有效減少所存在的不確定度，需要設(shè)置比較統(tǒng)一的操作順序。這個(gè)實(shí)驗(yàn)可以被當(dāng)作是在標(biāo)準(zhǔn)氣溫下進(jìn)行的，可以忽視溶液溫度和校準(zhǔn)的溫度所造成的不確定度，如果溫度達(dá)不到20 ℃，就需要考慮溫度所造成的影響。

通過分析能夠看出，造成不確定度的因素涉及了樣品的均勻程度、取樣的重復(fù)程度以及人員的操作情況等。實(shí)驗(yàn)時(shí)需要固定的實(shí)驗(yàn)條件，也就是說當(dāng)檢測大腸菌群時(shí)，可以進(jìn)行不確定度的評(píng)定，培養(yǎng)時(shí)需要對(duì)于溫度的要求比較高。通過計(jì)算能夠看出，大腸菌群檢驗(yàn)的不確定度分量里面，檢測結(jié)果比較容易產(chǎn)生重復(fù)的情況，所以會(huì)造成不確定度。并且由于檢驗(yàn)結(jié)果的持續(xù)增加，能夠隨時(shí)加入到合并樣本中，重新計(jì)算合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差，更新不確定度的取值范圍。正確評(píng)定不確定度，可以提高檢測結(jié)果的有效性、科學(xué)性、公正性和可靠性。

4 結(jié)語

測量不確定度和檢測結(jié)果有緊密的聯(lián)系，通過分析測量結(jié)果，能夠明確測量值有一定的分散性。一般是由多個(gè)分量組成，一些分量能夠分析測量結(jié)果的分布情況，用實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。

[1]凌云,王李寶,沈輝,等.食品中大腸菌群平板計(jì)數(shù)結(jié)果不確定度的評(píng)定[J].食品與機(jī)械,2010(5):75-77.

[2]何曉玲.食品中大腸菌群平板計(jì)數(shù)法不確定度的評(píng)定[J].質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督研究,2014(4):18-20.

[3]甄珍.食品中大腸菌群測定結(jié)果不確定度的評(píng)定[J].高師理科學(xué)刊,2011(5):63-65.

[4]胡巔,李素芳,丁武.MPN法檢測結(jié)果的不確定度及其評(píng)定[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2013(10):1939-1941.

[5]王毅謙,吳福平,張洪元,等.方便食品檢驗(yàn)中大腸菌群的不確定度評(píng)定[J].口岸衛(wèi)生控制,2013(3):27-29.