禽類心包積液感染綜合征的診斷與防治

趙向遠，董曉，劉宗柱

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東青島266109；2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東青島266109）

禽類心包積液感染綜合征的診斷與防治

趙向遠1，2，董曉1*，劉宗柱1

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東青島266109；2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東青島266109）

自2015年6月份以來，我國多省份地區(qū)，如江蘇、山東、河南、河北、安徽等地陸續(xù)出現(xiàn)了由Ⅰ群腺病毒引起的雞心包積水綜合征，常見于817肉雜雞、麻雞、三黃雞，在白羽肉雞、蛋雞中也時有發(fā)生。其主要的臨床表現(xiàn)為：病雞突然性的精神沉郁、貧血、消瘦、最后死亡。由于缺乏合理的治療手段，致使發(fā)病時間較長，死亡較多，給養(yǎng)殖戶造成了巨大的經(jīng)濟損失。為使禽類心包積液綜合癥處于一種受控狀態(tài)，采取一定的預(yù)防手段和治療措施是必不可少的。由此，本文對禽類心包積液感染綜合征的診斷與防治進行了敘述，希望為研究者提供參考。

上世紀八十年代，在南亞的巴基斯坦、印度和南美洲的家禽中暴發(fā)了一種與包涵體肝炎的臨床癥狀相類似的疾病。這種疾病的主要特征就是心包囊積液和肝炎，因此稱之為心包積水癥（Hydropericardium syndrome，HPS），也叫包涵體肝炎-心包積液綜合征（Inclusion body hepatitis-Hydropericardium syndrome，IBH-HPS）。

1 心包積液綜合征發(fā)病機制

在巴基斯坦安卡拉，心包積液綜合征被首次發(fā)現(xiàn)并命名，又稱為安卡拉病。自然條件下如氯化鈉、呋喃哇酮、碳氫化合物、有機磷殺蟲劑等的中毒或是硒和維生素E缺乏造成的營養(yǎng)不良都可導(dǎo)致家禽心包積液的發(fā)生。誘發(fā)該病的主要因素是腺病毒感染，HPS可在雞群之間和農(nóng)場之間通過口-糞途徑傳播，也可經(jīng)飼養(yǎng)員、獸醫(yī)、野生動物、野生家禽等攜帶傳播[1]。

通常所有的血清4型病毒（Fowl Adenovirus sero-type 4，F(xiàn)ADV-4）都會感染肉雞的肝臟并導(dǎo)致肝炎。一些研究已經(jīng)證實了FADV-4、FADV-8和FADV-1的致病性。心包積液綜合征對淋巴細胞的病原體具有親和性，從而導(dǎo)致免疫抑制。利用雞胚肝細胞培養(yǎng)病毒，與12種不同血清型的禽腺病毒的標準血清進行反應(yīng)，引起HPS的主要病原之一被鑒定為禽腺病毒血清4型病毒[2]。該病原與肝臟、內(nèi)皮和淋巴細胞有高度的親和力。許多研究人員報道稱，在自然和實驗的條件下，均可以觀察到單核吞噬細胞的增生和紅細胞的顯著損傷。實驗室在感染1日齡的小雞體內(nèi)發(fā)現(xiàn)多個器官有包涵體，如肝臟、胰腺、胃、十二指腸、盲腸和腎，但是在自然條件下感染小雞的器官包涵體只出現(xiàn)在肝臟[3]。這表明心包積液綜合征的腺病毒比其他腺病毒更容易感染家禽肝臟細胞。

2 病原學(xué)特征

禽腺病毒無囊膜，呈球形，二十面體對稱結(jié)構(gòu)，毒粒直徑為70～100nm[4]。毒粒具有252殼粒，其中二十面體的頂角殼粒為十二個五鄰體，每五個五鄰體有一條或兩條纖維突起，這些纖維以五鄰體蛋白為基底由衣殼表面伸出。此外，二十面體上還有240個非頂角殼粒，稱為六鄰體。帶有主要的屬和亞屬特異性抗原決定簇和次要的種特異性抗原決定簇[5]。后來發(fā)現(xiàn)名為PARCl的FAV-4毒株能夠在細胞培養(yǎng)物和雞胚上增殖并形成蝕斑。

從不同地區(qū)爆發(fā)IBH-HPS的雞群中分離得到的3株禽腺病毒被定型為血清型4型。通過蔗糖梯度超速離心純化可獲得感染的肝臟組織勻漿中的HHS相關(guān)病毒，利用腺病毒l～l2血清型特異性抗血清的雙向免疫擴散和病毒中和試驗證實該病毒具有特征性。這些試驗證明，F(xiàn)AV4可導(dǎo)致HHS的發(fā)生。

從感染的肝臟組織中提取的DNA和純化的病毒可用作PCR。直接從HHS陽性肝臟樣品中的提取物及純化的病毒DNA中可擴增得到特有長度為0.7kb的DNA片段。由核苷序列組成的系統(tǒng)樹圖顯示，HHS病毒和FAVl0很接近，但不同于FAVl和FAV8。然而，起始氨基酸序列分別比FAV血清l0、l和8型的有28.8%、38%和45.l%變異[6]。如此高的變異是由于刪除標識而引起閱讀框架的移位造成的，而HHS關(guān)聯(lián)的FAV4的標識是唯一的且不同于FAVl0。

3 流行病學(xué)及傳播途徑

3.1 流行病學(xué)黃曲霉毒素在飼料中的含量超過20mg/kg時常會誘發(fā)3～6周齡的肉仔雞群暴發(fā)此病，發(fā)病后3～4d就出現(xiàn)死亡高峰，持續(xù)5～7d后才有所下降，死亡率達15%～60%[1]，此時除心包積水外，肝臟的損失也很明顯。該病也可偶發(fā)于20周齡內(nèi)的后備蛋雞或種雞中，沒有性別差異，在更大齡的肉雞中很少發(fā)生。一般認為，各種品系肉雞都易感此病，但也有一些人認為Hubbard肉雞最為易感，其次是Indian River和Lohmam系[6]。同時，雨季和夏季的發(fā)病率和死亡率也要高于其它季節(jié)。

3.2 傳播途徑IBH-HPS的病原具有高致病性，可經(jīng)機械方式和帶有毒糞便污染的器具在雞群間、雞場間迅速傳播。在同一雞群內(nèi)該病毒主要是通過糞-口途徑水平傳播的[7]。在0.09、0.07或0.065m2/只雞的飼養(yǎng)密度條件下，使健康雞與病雞密切接觸，也會誘發(fā)感染。而垂直傳播要成功誘發(fā)該病，需要FAV和CAV（雞傳染性貧血病毒）的綜合效應(yīng)。病毒通過雞胚的垂直感染，用感染的胚和子代雛雞制作細胞培養(yǎng)物，可以激活機體的腺病毒。腺病毒在養(yǎng)殖場中廣泛存在，這就要求我們要盡量提高雞舍的管理水平和做好衛(wèi)生安全保護措施。

4 癥狀及診斷

4.1 臨床癥狀和病理變化無論是肉雞還是蛋雞，患病雞心臟的心包囊有液體存在。這些積聚的液體大多為水狀，但也有凝膠狀，伴有斑點狀出血。這是心包積液發(fā)病的主要癥狀，可導(dǎo)致心臟的急性衰竭和死亡。在臨床上還可觀察到肺水腫和腎臟腫大，以及尿酸鹽的沉積，進而誘發(fā)急性腎炎，這也可能是該病導(dǎo)致雞群死亡的主要原因之一。

由于本病無特征性臨床表現(xiàn)且呈急性發(fā)病，因此在患病雞出現(xiàn)死亡之前很難進行正確的診斷。用透射電鏡在感染的肝細胞核內(nèi)觀察到有腺病毒顆粒，或用細胞培養(yǎng)或雞胚分離到病毒等時可作出診斷[8]。此外，病理組織學(xué)變化主要在肝臟，透射電鏡觀察肝細胞可見有小的多灶性凝固性壞死，單核細胞浸潤，肝細胞內(nèi)常出現(xiàn)嗜堿性核內(nèi)包涵體。有時還出現(xiàn)肝細胞的小葉中心性彌漫性細胞腫脹變性和壞死，伴有胞質(zhì)的部分空泡化或細胞膜破裂，肝細胞萎縮且核固縮[8]；HE染色后觀察發(fā)現(xiàn)，肝細胞發(fā)生脂肪變性，肝組織淤血，并可見炎性細胞浸潤；部分肝細胞發(fā)生壞死。胞質(zhì)溶解呈空網(wǎng)狀，組織界限不清，正常結(jié)構(gòu)消失；肝細胞中出現(xiàn)嗜堿性包涵體，但確診還需用型特異性血清進行中和試驗。

目前采用的診斷方法主要有病理組織學(xué)分析、電鏡觀察、間接血凝試驗、PCR擴增及其產(chǎn)物序列分析、動物回歸試驗等。

4.2 血清學(xué)診斷間接血凝試驗和瓊脂凝膠擴散試驗是常用于鑒別抗原血清型、評價血清抗體陽性率以及抗體滴度的實驗手段，也是HPS疫苗效力評價的主要方法。特異性血清中和試驗可用于病原鑒定、分群和分型；雙向免疫擴散試驗主要用于群抗原的檢測；間接免疫熒光試驗用于診斷的優(yōu)勢有簡便、快速、特異性強和靈敏度高；各種改進的酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）常被用于檢測腺病毒群特異性抗體和型特異抗體[9]。

4.3 分子生物學(xué)診斷由于禽腺病毒具有廣泛的抗體，血清學(xué)方法只能診斷出部分禽腺病毒。然而我們現(xiàn)在關(guān)注的是直接檢測方法。最近，禽腺病毒的檢測在分子水平上得到了很大的提高，目前臨床上主要采用PCR檢測法。用PCR法對FADV-4病毒DNA可變區(qū)的700bp片段進行擴增，可廣泛應(yīng)用于快速診斷HPS。擴增的DNA以地高辛（DIG-11-DUTP）為標記，可作為探針用于斑點雜交法檢測病毒基因組的存在[10]。

5 預(yù)防和治療

目前，在禽類養(yǎng)殖生產(chǎn)中主要以加強衛(wèi)生飼養(yǎng)管理，提高雞群自身免疫力；做好雞群內(nèi)外消毒工作，防止病原體在雞群內(nèi)水平傳播為主。由于FAV-1血清型較多且不同血清型引起保護性免疫的抗原基因不同，因此疫苗的研制和應(yīng)用困難較大，研制有效的疫苗是迫切需要解決的問題。有研究結(jié)果顯示，已經(jīng)研制出的疫苗主要有油乳劑滅活疫苗、弱毒疫苗及DNA重組疫苗。

5.1 油乳劑滅活疫苗油乳劑滅活疫苗主要誘導(dǎo)機體產(chǎn)生體液免疫，產(chǎn)生的抗體能中和、清除細胞外的病毒和細菌，而對細胞的病原體作用很小。所以具有安全性能好、穩(wěn)定性強、對機體刺激小等特點[11]。在印度通常使用滅活的雞心包積液綜合征-4感染的細胞培養(yǎng)物加入油佐劑進行乳化制備的疫苗。在3周齡時免疫0.5ml劑量的疫苗（105.5TCID50/0.1ml）對在1、2、3、4或6周攻毒雞心包積液綜合征病毒都能夠提供100%的防護[12]。油乳劑滅活疫苗的研制相比與其它疫苗而言，目前已經(jīng)有比較成熟的研發(fā)技術(shù)，價格低廉，更加適合用于大型養(yǎng)殖場等生產(chǎn)上的使用和普及。

5.2 弱毒疫苗目前，將雞胚連續(xù)12次傳代獲得的雞心包積液綜合征-4型弱毒疫苗已經(jīng)研發(fā)出來，用不含雞心包積液綜合征母源抗體的肉雞在14d時分別免疫16代弱毒雞心包積液綜合征疫苗和商業(yè)化的肝器官疫苗，免疫16代弱毒雞心包積液綜合征疫苗的雞獲得了94.73%的保護率，沒有接種疫苗的對照組出現(xiàn)了高發(fā)病率和高死亡率以及組織病理學(xué)的損傷[5]。然而，商業(yè)化的肝器官疫苗只有10%的保護率。這個新發(fā)明的雞心包積液綜合征弱毒疫苗證實具有免疫原性，并具有防控雞心包積液綜合征病毒感染的潛力。

5.3 DNA重組疫苗DNA疫苗又稱基因疫苗。該疫苗既具有減毒疫苗的優(yōu)點同時又無逆轉(zhuǎn)的危險，因此越來越受到人們的重視。雖然目前還沒有面向市場大規(guī)模應(yīng)用，但是在瘧疾、流感、輪狀病毒、HIV的DNA疫苗的研究上已經(jīng)取得了突破性的進展[13]，被看做是繼傳統(tǒng)疫苗及基因工程亞單位之后的第三代疫苗。

5.4 藥物治療該病發(fā)病的靶器官主要是右心室、肺臟、腎臟以及肝臟。用強心藥物（如?；撬帷⒄聊X磺酸鈉、安鈉咖）來維持心臟功能，呋塞米等高效利尿藥來消除組織間液的水分從而充分緩解心包積液和肝腎水腫，同時可另外加用維生素、ATP、肌苷、輔酶A等補充能量[14]。已證實在接種后的肉雞飼料中添加精氨酸可以保護細胞和體液免疫的抗FADV-4病毒的作用。

5.5 管理措施雖然該病目前還沒有確切有效的治療方法，若要從根本上解決這一問題，除了疫苗防疫之外，還需要按一般準則對雞舍和器具進行正確消毒、滅菌，加強通風(fēng)和給予適宜光照等一些基本措施加強飼養(yǎng)管理，預(yù)防雞群感染病毒。由于心包積液會使心臟壓塞，導(dǎo)致心跳加快而淺、供氧不足，且熱應(yīng)激會加重這一負擔(dān)[15]，這可能也是夏季本病發(fā)病率高、死亡率高的一個主要原因。因此從飼養(yǎng)管理上我們應(yīng)該注意一下幾點：

5.5.1 禁止外來人員和接種人員的進入以及屋舍的通風(fēng)和適宜的光照。

5.5.2 雞舍、飼料房、籠具、墊料在進雞前1～2周都必須嚴格做好清洗消毒的準備工作。徹底清除發(fā)霉的墊料，沖洗地面，用過氧乙酸或百毒殺噴霧消毒，對已污染的禽舍，每立方米空間用甲醛溶液42ml、高錳酸鉀21g，混合后，密閉熏蒸消毒。

5.5.3 密閉式雞舍，注意負壓不要過大，以防止雞舍缺氧。必要時可適當加大進風(fēng)口面積，加大風(fēng)力風(fēng)速。也可以使用正壓通風(fēng)，以保證氧氣供應(yīng)。

5.5.4 發(fā)病雞群的飲水中加入2.5%碘伏使其終濃度達0.07%～0.1%，可有效縮短感染HPS雞的病程并降低死亡率。

5.5.5 在發(fā)病季節(jié)和發(fā)病區(qū)，注意養(yǎng)殖密度不宜過大，甚至可以降低養(yǎng)殖密度。這樣雞群需要的能量能夠充分供應(yīng)，且溫度容易調(diào)控。

6 小結(jié)與展望

大多數(shù)I亞群禽腺病毒對雞的致病作用還未完全確定，目前國內(nèi)的一些省份和地區(qū)流行的禽腺病毒血清型眾多且存在差異，從而增大了防控的難度，做好心包積水癥流行病學(xué)調(diào)查工作是當務(wù)之急。因此，為了更好地防控HPS在我國的流行和傳播，需結(jié)合本病的流行特征和發(fā)病規(guī)律等制定綜合防控方案，加強飼養(yǎng)管理的同時要注重生物安全，注意對癥治療，切勿使用對肝臟和腎臟有毒害作用的藥物，否則會加大雞群的死亡率。

目前，國內(nèi)尚缺乏對包涵體肝炎-心包積液綜合征的商業(yè)化疫苗和有效治療手段，導(dǎo)致該病在國內(nèi)傳播和蔓延。因此，我們目前的首要任務(wù)就是要研制出有效的疫苗用于規(guī)?；a(chǎn)，此外，養(yǎng)殖戶也需加大對雞舍的安全衛(wèi)生管理，從而實現(xiàn)對該病更有效的防控。本研究為進一步開展國內(nèi)禽腺病毒流行病學(xué)調(diào)查及進一步研究禽類心包積液提供了理論基礎(chǔ)。

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1673-1085（2017）06-0034-04

2017-05-10

趙向遠（1993-），女，山東人，碩士研究生，研究方向為動物遺傳育種與繁殖，2257416591@qq.com。*通訊作者：董曉（1969－），女，副教授，博士，研究方向為生理學(xué)，1163155358@qq.com。