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    重復(fù)使用的比色杯對(duì)TSGF測(cè)定的影響研究

    2017-01-20 15:00:18
    現(xiàn)代養(yǎng)生·下半月 2016年7期
    關(guān)鍵詞:山丹縣羥脯氨酸比色

    雷 鵬

    山丹縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 甘肅省山丹縣 734100

    重復(fù)使用的比色杯對(duì)TSGF測(cè)定的影響研究

    雷 鵬

    山丹縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 甘肅省山丹縣 734100

    大量生物學(xué)研究證明,細(xì)胞惡變時(shí)通常出現(xiàn)一些特征變化,如a-酸性糖蛋白和芳香族氨基酸在血清中的含量高于正常,腫瘤浸潤(rùn)或轉(zhuǎn)移可引起羥脯氨酸代謝紊亂,導(dǎo)致其在血清中含 量升高。癌變?cè)缙?,雖然任何一種腫瘤標(biāo)志物的變化都比較微小,不易被早期檢測(cè)。但TSGF(苯丙氨酸、酪氨酸、羥脯氨酸、a-酸性糖蛋白聯(lián)合試劑盒)不是針對(duì)某個(gè)單一腫瘤標(biāo)志物,而是聯(lián)合檢測(cè)苯丙氨酸、酪氨酸、羥脯氨酸和a-酸性糖蛋白,使其共同顯色,提高了檢測(cè)的靈敏度和特異性。但是在實(shí)際工作中,部分醫(yī)院重復(fù)使用比色杯,在檢驗(yàn)過(guò)程中對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果否影響,為了證實(shí)在檢驗(yàn)過(guò)程中的影響,現(xiàn)特對(duì)本院20份標(biāo)本進(jìn)行TSGF測(cè)試,以檢測(cè)和評(píng)估重復(fù)使用的比色杯對(duì)TSGF測(cè)定的影響。

    重復(fù)使用的比色杯;TSGF測(cè)定;腫瘤特異生長(zhǎng)因子(TSGF)

    1 材料

    1.1 試劑

    TSGF試劑盒(福建新大陸生物技術(shù)有限公司提供)。

    1.2 檢測(cè)對(duì)象

    本院20位住院患者,其中所用樣本血清全部為正常標(biāo)準(zhǔn)血清(排除溶血,脂血標(biāo)本)。

    1.3 儀器與試劑

    722S分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司提供),TSGF試劑盒(苯丙氨酸、酪氨酸、羥脯氨酸、a-酸性糖蛋白聯(lián)合試劑盒);未開包裝比色杯;重復(fù)使用的比色杯。

    2 方法

    2.1 蒸餾水調(diào)節(jié)

    分光光度計(jì)波長(zhǎng)至470nm。

    2.2 分離血清

    每份血清分離兩份,一份用重復(fù)使用過(guò)的比色杯測(cè)定,另一份用新的比色杯測(cè)定。

    3 過(guò)程

    3.1 加樣

    準(zhǔn)確吸取40ul待測(cè)血清及40ul六個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,分別加入盛有1ml試劑的反應(yīng)管中,蓋緊蓋子,充分混勻;

    3.2 顯色

    將反應(yīng)管插入反應(yīng)架中,置于100℃水浴鍋中加熱15分鐘,迅速取出并置于冷水中冷卻5分鐘以終止反應(yīng);

    3.3 比色

    將反應(yīng)液倒入0.5cm光程比色杯中,在470nm波長(zhǎng)處,測(cè)定各管樣本的吸光度值;

    3.4 計(jì)算

    TSGF標(biāo)準(zhǔn)品共有六個(gè)濃度,分別為0U/ml、20 U/ml、40 U/ml、60 U/ml、80 U/ml、100 U/ml。用標(biāo)準(zhǔn)濃度作橫坐標(biāo),所對(duì)應(yīng)的吸光度值為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得血清標(biāo)本吸光度值所對(duì)應(yīng)的濃度單位。上清以分光光度法(λ=470nm,光徑0.5cm,空比色杯調(diào)零)測(cè)定A,經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線 計(jì)算TSGF含量(μ/ ml)。

    4 根據(jù)以上結(jié)論對(duì)以下檢測(cè)對(duì)象進(jìn)行檢測(cè)分析

    ①癌癥40例。其中肺癌18例,消化系統(tǒng)癌6例,惡性淋巴瘤8例,白血病(A LL)5例,前列腺癌3例。②非癌疾病30例。其中急性炎5例,慢性炎5例,結(jié)核病6例,非炎癥 14例。兩組患者血清按雙盲法檢驗(yàn)。

    5 TSGF測(cè)定

    取血清40μl與反應(yīng)管中試劑混勻,沸水浴內(nèi)反應(yīng)15min,自來(lái)水冷卻后30 00rpm離心。上清以分光光度法(λ=470nm,光徑0.5cm,空比色杯調(diào)零)測(cè)定A,經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線 計(jì)算TSGF含量(μ/ml)。以TSGF>64u/ml為該項(xiàng)檢測(cè)陽(yáng)性。

    6 癌癥組

    40例中TSGF含量71.7±15.7μ/ml;陽(yáng)性31例(77.4%)。以肝癌、肺癌 、惡性淋巴瘤等陽(yáng)性率高。

    7 非癌組

    30例TSGF含量59.1±12.2μ/ml,顯著低于癌癥組;陽(yáng)性率25.0%(9/36 )亦顯著低于癌癥組(P<0.001);陽(yáng)性者主要來(lái)自急性炎癥、結(jié)核病及慢性炎癥。

    7.1 對(duì)照

    如表1所示。

    表1:癌癥組與非癌組血清TSGF含量(U/ml)和陽(yáng)性率(%)

    8 討論

    在酸性環(huán)境中,標(biāo)本中的TSGF與試劑中顯色劑反應(yīng),形成470nm處有一特征吸收峰的黃褐色物質(zhì)。從檢驗(yàn)結(jié)果可看出,癌癥組絕大部分病人TSGF水平≥64U/ ml,結(jié)果表明腫瘤TSGF陽(yáng)性率顯著高于非癌組。廠家試劑盒推薦正常人TSGF濃度范圍為(47±17)U/ml;<64 U/ml為陰性;可疑陽(yáng)性為64~70 U/ml;陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為≥71 U/ml。我們以TSGF>64u/ml為該項(xiàng)檢測(cè)陽(yáng)性。在測(cè)定中所得結(jié)果做以比較,重復(fù)使用過(guò)的比色杯所得結(jié)果80%處于可疑陽(yáng)性區(qū)間,而使用新的比色杯所得結(jié)果則在批間(VC%)≤80%之內(nèi)。 綜上所述,血清TSGF是一種新的、敏感性和特異性較高的廣譜腫瘤標(biāo)志物,檢測(cè)方法簡(jiǎn)便快捷,結(jié)果穩(wěn)定。對(duì)惡性腫瘤的初篩、早期輔助診斷、療效評(píng)價(jià)和預(yù)示腫瘤復(fù)發(fā)具有重要臨床意義和應(yīng)用價(jià)值。在檢測(cè)過(guò)程中一定要謹(jǐn)慎處理,拿取比色杯時(shí),只能用手指接觸兩側(cè)的毛玻璃,避免接觸光學(xué)面。同時(shí)注意輕拿輕放,防止外力對(duì)比色杯的影響,產(chǎn)生應(yīng)力后破損。 不能將比色杯放在火焰或電爐上進(jìn)行加熱或干燥箱內(nèi)烘烤。當(dāng)發(fā)現(xiàn)比色杯里面被污染后,應(yīng)用乙醚和無(wú)水乙醇的混合液(各50%)清洗,及時(shí)擦拭干凈。不得將比色杯的透光面與硬物或臟物接觸。盛裝溶液時(shí),高度為比色杯的2/3處即可,光學(xué)面如有殘液可先用濾紙輕輕吸附,然后再用鏡頭紙或絲綢拭。若太臟可用洗液清洗,但時(shí)間要短(幾秒鐘),再用清水清洗干凈,切忌不能用洗潔精之類的清潔劑,以免影響測(cè)量。建議檢測(cè)時(shí)使用新開包裝比色杯。

    [1]齊心亮,權(quán)蘭秋,張華欣,趙勇,董菊子.惡性腫瘤特異生長(zhǎng)因子(TSGF)檢測(cè)的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].西北國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志,2005(10).

    [2]李新海等主編.腫瘤標(biāo)志物的檢驗(yàn)與臨床[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1996.

    [3]楊進(jìn)等.肺癌患者與正常人血、尿中氨基酸譜的對(duì)比研究[J].臨川肺科雜志,2007,12(05):429-430.

    [4]張友會(huì)主編.現(xiàn)代腫瘤學(xué)[M].北京:北京醫(yī)科大學(xué)中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1993.

    [5]夏玉宇.化驗(yàn)員使用手冊(cè)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,1999.

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