全自動免疫組化和原位雜交染色機染色失敗解決方案

沈 萍，金曉婷

上海兒童醫(yī)學中心，上海市，200127

全自動免疫組化和原位雜交染色機染色失敗解決方案

【作 者】沈 萍，金曉婷

上海兒童醫(yī)學中心，上海市，200127

該文分析總結(jié)了Leica Bond Max 全自動免疫組化和原位雜交染色機染色失敗的原因，以及對常見人員操作失誤與機器自身故障進行了總結(jié)，并提供了對應(yīng)的解決方案。

全自動免疫組化和原位雜交染色機；染色失敗

Leica Bond Max 全自動免疫組化和原位雜交染色機[1]是一款將自動化技術(shù)用于高級染色處理的機器，它包括免疫組織化學染色（IHC）和原位雜交（ISH）。它將病理科傳統(tǒng)的手工操作替換成機器操作，幾乎囊括了免疫組化手工操作的全過程，包括烤片、脫蠟、抗原阻斷、修復、滴加抗體、顯色、蘇木復染等一系列步驟，既減輕了病理技術(shù)員的工作量，又加快了病理醫(yī)生出報告的時間，極大地滿足了臨床的需求[2]。

我科至2014年8月使用該機器以來，碰到過幾次染色失敗事件，其中既有人員操作失誤，也有機器自身故障的因素。現(xiàn)對我們常見人員操作失誤與機器自身故障進行了總結(jié)，并提供了對應(yīng)的解決方案。

1 操作失誤

操作失誤是該類染色機染色失敗的主要原因之一。

（1）粘貼標簽時位置偏移，探針掃不到條形碼，機器會顯示玻片故障。

（2）標簽貼反，使得有組織的一面朝下，整個操作流程未經(jīng)需處理的組織，從而出現(xiàn)染色失敗。

（3）技術(shù)員把不同分配液量的玻片放置在同一排玻片架上，機器拒絕執(zhí)行命令。

（4）在做優(yōu)化玻片時，打印標簽時未加修復方法，使得需修復處理的玻片未進行修復處理，從而引起染色失敗。

（5）開始啟動前，應(yīng)先查看試劑瓶內(nèi)抗體是否滿足染色需求量，并及時添加抗體，如忘記添加抗體，機器會拒絕執(zhí)行啟動命令。同時應(yīng)注意試劑瓶的已使用容量，一個試劑瓶最多可添加7 mL的試劑，超出此容量后，此試劑瓶將不能再使用。

（6）技術(shù)員添加新的試劑瓶時未設(shè)置好試劑的信息、未掃描試劑瓶。

（7）加載玻片時covertiles未放置到位，會導致染液可能被滴在covertiles之上或外漏在間隙槽內(nèi)，引起染色失敗。

（8）機器操作過程中未及時添加消耗的試劑如修復液、蒸餾水、緩沖液以及未及時傾倒廢液桶而產(chǎn)生各種小故障，從而影響了機器的運行。

2 機器自身故障

機器的常見故障主要有：

（1） 機器上的一塊或一排加熱板突發(fā)故障，放在該位置上的玻片就不會被正確地進行染色處理，從而引起染色失敗。

（2） 因機器需定期關(guān)機保養(yǎng)，每次關(guān)機后，都需把DAB混合站取出來清洗，在下次開機前放在機器上，一旦技術(shù)員忘了放置，機器開機后自檢時，發(fā)現(xiàn)掃不到DAB混合站，它會給出提示，提醒你DAB混合站是否已歸位？一旦你沒注意按了確認鍵后，機器會自動認為操作沒問題而運行下去，從而導致染色液漏于機器內(nèi)，染色失敗。

（3） 探針針管在清洗不完全或部分堵塞時，針管內(nèi)滯留的前一種抗體會影響下一個抗體的染色或吸入的抗體量減少，造成組織全部或部分“空染”，影響染色結(jié)果。

（4） 超過一定數(shù)量（800~1 200）張玻片后，機器需進行大保養(yǎng)，如換探針、玻璃管注射器和針頭、機器后面的抽吸管道等耗材，否則會出現(xiàn)試劑瓶內(nèi)的液體量因檢測錯誤而在操作過程中出現(xiàn)試劑劑量不足，機器無法運行下去。

3 討論與總結(jié)

Leica Bond Max 全自動免疫組化和原位雜交染色機具有敏感性高、定位準確、背景清晰等特點[2]，同時處理能力強，一臺機器10 h最多可處理90張玻片，因此一經(jīng)面世就受到積極推廣。

染色機的正確使用及維護保養(yǎng)的好壞直接影響到染色結(jié)果的好壞。作為病理技術(shù)員而言，要全面了解機器的運行原理，注重機器的日常維護和保養(yǎng)，及時替換老化的耗材。每次關(guān)機后都需用清潔布沾著無水乙醇清潔機器；每次上機操作前都需認真檢查試劑瓶內(nèi)的試劑，清空廢液桶內(nèi)的廢液；認真粘貼標簽；添加新的試劑瓶時認真設(shè)置試劑信息；認真放置covertiles。操作過程中隨時關(guān)注機器的運行情況，一旦出現(xiàn)異常情況或非人為因素的故障時，認真觀察故障現(xiàn)象，及時與工程師取得聯(lián)系，及時替換壞了或老化了的輔件和耗材，才能準確、快捷地將故障排除，以滿足病理科免疫組織化學工作量日益增加的需求。

[1] 顧霞, 魏明潔. 快速微波免疫組化染色技術(shù)在臨床病理中的應(yīng)用[J]. 吉林醫(yī)藥學院學報, 2008, 29(1): 12-13．

[2] 于蘭, 何松, 陳亞麗. 全自動免疫組化染色儀的應(yīng)用體會[J]. 臨床與實驗病理學雜志, 2009, 25(2): 215-216．

Solution of Dyeing Failure of Fully Automatic Immunohistochemical and Hybridization in Suit Dyeing Machine

【Key words 】SHEN Ping, JIN Xiaoting
Shanghai Children’s Medical Center, Shanghai, 200127

fully automatic immunohistochemical and hybridization in suit dyeing machine, dyeing failure

R361.2

A

10.3969/j.issn.1671-7104.2017.03.021

1671-7104(2017)03-0233-02

2016-12-21

沈萍，E-mail: shenpingscmc@sina.com

【 Abstract 】To analysis the cause of dyeing failure of Leica Bond Max fully automatic immunohistochemical and hybridization in suit dyeing machine, we summarize people’s misoperating and own fault, then offer the corresponding solution.