藥品微生物計(jì)數(shù)方法及方法適用性探析

馬德寧 金桂花 崔鉉 張玉玲

藥品微生物計(jì)數(shù)方法及方法適用性探析

馬德寧 金桂花 崔鉉 張玉玲

藥品計(jì)數(shù)方法的適用性實(shí)驗(yàn)是必不可少的，在實(shí)際的檢驗(yàn)過程中也還存在著一些問題和不足。對于克林霉素磷酸酯陰道凝膠在制劑過濾的過程中，可能會(huì)出現(xiàn)薄膜被阻塞的情況，可以采用加入一定劑量濃度為10%的氯化鈣溶液的方式進(jìn)行處理。對于藥品進(jìn)行采用微生物檢驗(yàn)方法是適當(dāng)?shù)?，這能夠提高專業(yè)人員的素質(zhì)，改善質(zhì)量控制的效果。文章就對藥品微生物計(jì)數(shù)方法以及方法的適用性等進(jìn)行探究和分析，以促進(jìn)藥品微生物計(jì)數(shù)水平。

藥品微生物；計(jì)數(shù)方法；適用性

藥品微生物計(jì)數(shù)方法是一種檢查在有氧條件下生產(chǎn)的細(xì)菌和真菌的方法，這種方法檢查的準(zhǔn)確性受到多種因素的影響[1]。常見的因素包括微生物的分布、過程、標(biāo)準(zhǔn)、方法等的適當(dāng)性等。同時(shí)，檢查確定的微生物計(jì)數(shù)不符合規(guī)定的藥物，除了檢查方法的因素之外，還受到藥品生產(chǎn)過程中多種因素的影響，包括藥物的生產(chǎn)設(shè)備、環(huán)境、材料、工藝和人員等[2]。在生產(chǎn)和檢驗(yàn)過程的眾多影響因素中，檢驗(yàn)方法的適用性直接影響著檢查的效果，本文將針對這一方面展開研究，確定檢驗(yàn)方法的適用性和檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 藥品生物計(jì)數(shù)方法的建立和確認(rèn)

藥物生物計(jì)數(shù)方法的建立和確認(rèn)，主要從方法的選擇、建立與確認(rèn)、藥劑的特殊性等方面展開。

（1）選取操作簡單、快速以及適用的方法[3]。在選取方法時(shí)應(yīng)該盡量選擇操作比較簡單過程比較少的方法，這樣能夠減少操作過程中帶來的人為污染事件的發(fā)生，損傷試劑中的微生物。同時(shí)，對于需要加入試劑的方法應(yīng)該綜合考慮試劑對檢驗(yàn)樣本中微生物的影響。對于需要加入較強(qiáng)抑菌作用試劑的方法，最好采用薄膜過濾法進(jìn)行試驗(yàn)。在對樣本中的微生物進(jìn)行檢查時(shí)，應(yīng)該充分的考慮藥品的抑菌強(qiáng)度、用途以及生產(chǎn)工藝等。

（2）藥品檢驗(yàn)方法的建立和確認(rèn)。應(yīng)該根據(jù)被檢驗(yàn)藥品的具體特性，選擇合理的檢驗(yàn)方法，以確定方法的可行性和有效性[4]。如果沒有得到實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)的方法，通常存在一定的風(fēng)險(xiǎn)，最終影響檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。在本次研究中對一款口服的中藥制劑選取不同的檢驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示不同方法之間存在差異，其中1: 100的檢驗(yàn)方法最能夠體現(xiàn)藥品的實(shí)際污染程度，其他比例的方法會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)不同程度的錯(cuò)誤判斷。

2 計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)

2.1 菌液制備

接種銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基。30℃～35℃培養(yǎng)18～24 h；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，20℃～25℃培養(yǎng)24～48 h。上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1 ml含菌數(shù)為小于100 cfu的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5～7 d，加入3～5 ml含0.05%聚山梨酯的無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，吸出孢子懸液（用管口帶有薄的無菌棉花或紗布能過濾菌絲的無菌毛細(xì)吸管）至無菌試管內(nèi)，用含0.05%聚山梨酯的無菌氯化鈉溶液制成每1 ml含孢子數(shù)小于100 cfu的孢子懸液。

2.2 樣品的處理

在檢驗(yàn)工作開展之前，應(yīng)該采用合理的方法將藥物制備成試液，通常采用的制液方法有采用45℃的水將藥物膠囊溶解，對比硬度比較大的藥物采用均漿儀進(jìn)行打碎處理[5]。為了降低膠囊以及藥物添加物產(chǎn)生的藥渣對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，可以采用過濾的方法進(jìn)行處理。對于濃度比較大、顏色比較深以及藥渣比較多的藥物，在進(jìn)行過濾之后可以采用稀釋的方法進(jìn)行處理。對于存在非溶性溶劑的藥物，應(yīng)該檢查藥物的活性，確保采用的中和劑是對微生物沒有毒害的，即中和劑與微生物具有相容性。

2.3 加菌方法

與2015年之前版本的藥典微生物限度檢查方法相比，不僅是微生物限度檢查技術(shù)驗(yàn)證名稱的改變，相關(guān)的操作方法也有所改變。如以前的操作方法規(guī)范是直接選擇一個(gè)合適濃度的菌液加到平皿中。而以往的1 ml菌液中大致存在50～100 cfu的微生物。2015年后要求加菌使用的供試液需要在滿足上述條件的同時(shí)滿足新的兩個(gè)條件，從操作上來說相對復(fù)雜，若提供的供試液容積較大，則可能存在不宜計(jì)數(shù)的問題。

因此隨著加菌方法發(fā)生的變化， 根據(jù)最新的《中國藥典》的規(guī)定加菌液的量應(yīng)該不超過試驗(yàn)試液的1%，為了保證操作的方便可以吸取9.9 ml的試液和0.1 ml的菌液，液體混合之后應(yīng)該保證單位毫升的菌液量不超過100 cfu，菌液的量、與試液的混合均勻程度以及菌液的濃度等，都會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果的成功與否，因此檢驗(yàn)計(jì)數(shù)之前應(yīng)當(dāng)采取適當(dāng)?shù)姆椒▽┰囈褐械木鷶?shù)進(jìn)行初步確定，如比濁法。

2.4 抗菌活性的去除或者是滅除

對于具有抗菌活性的藥物，首先可以采用稀釋以及增大試液體積的方法，降低抑菌的強(qiáng)度。也可以添加一定劑量的中和劑、滅菌劑等去除抑菌劑的活性[6]。例如對于碘酊藥物可以采用加入一定劑量的硫代硫酸鈉的方法，中和藥物的抑菌性。對于克林霉素磷酸酯陰道凝膠在制劑過濾的過程中，可能會(huì)出現(xiàn)薄膜被阻塞的情況，可以采用加入一定劑量濃度為10%的氯化鈣溶液的方式進(jìn)行處理。

3 結(jié)論

在實(shí)際的檢測過程中，應(yīng)該選擇適用的方法，保證檢測的準(zhǔn)確性和結(jié)果的可靠性[7]。同時(shí)，在本次的研究過程中還發(fā)現(xiàn)，檢驗(yàn)人員的能力、素質(zhì)等也會(huì)對適用方法的確定以及檢測結(jié)果準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響[8]。很多檢驗(yàn)人員由于并不是微生物專業(yè)的或者缺乏良好的專業(yè)素質(zhì)，沒有進(jìn)行及時(shí)的相關(guān)知識(shí)的培訓(xùn)。最終導(dǎo)致不能夠?qū)Ω鞣N檢驗(yàn)方法具有完全清晰的認(rèn)識(shí)，對于計(jì)數(shù)方法的操作方法、步驟以及結(jié)果觀察等都存在著不恰當(dāng)?shù)牡胤?，給檢驗(yàn)的結(jié)果帶來的不良的影響。另外，實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)過程中沒有對過程質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格的控制，導(dǎo)致質(zhì)量控制不到位。因此，未來對于實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)質(zhì)量還要進(jìn)一步加強(qiáng)。

[1] 李趣嫦，江艷芳． 《中國藥典》2010版與2015版微生物限度檢查法對四種藥物檢測結(jié)果的比較[J]． 中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2015，16（2）：86-90．

[2] 國家藥典委員會(huì)． 中華人民共和國藥典：2015年版四部，指導(dǎo)原則[M]． 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：387-388．

[3] 孫鶯，郭朝暉，宋京都． 8種醫(yī)院制劑微生物限度檢查方法驗(yàn)證[J]．中國藥事，2014，28（8）：839-842．

[4] 劉鵬，戰(zhàn)宏利，嚴(yán)倩倩，等． 中成藥口服給藥制劑及其原料藥微生物污染相關(guān)性分析[J]． 藥物分析雜志，2014，34（6）：1068-1072．

[5] 田冬梅，史春輝，婁志紅，等．藥品微生物計(jì)數(shù)方法及方法適用性探討[J]．中國藥物評價(jià)，2017，34（2）：97-99，103．

[6] 楊曉莉，李輝，馬英英，等．中國藥典2015年版非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法解讀[J]．藥物分析雜志，2016，36（6）：1101-1107．

[7] 徐曉潔，冷佳蔚，王志宏，等． 具有抗菌活性的中藥固體制劑微生物限度檢查計(jì)數(shù)方法研究[J]．中國藥事，2015，29（9）：946-950．

[8] 羅達(dá)龍，覃藍(lán)，李夷君．鹽酸氨溴索緩釋膠囊微生物限度檢查的方法學(xué)驗(yàn)證[J]．臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志，2016，3（12）：2439-2440．

如何撰寫論文的“材料和方法”

材料和方法（臨床資料）是執(zhí)行科研的關(guān)鍵部分，對于要進(jìn)行的研究工作，必須按照實(shí)際情況，在事先：（1）選擇好合乎一定條件的、一定數(shù)量的研究對象；（2）采用一定的實(shí)驗(yàn)、診斷或治療方法（包括實(shí)驗(yàn)步驟、方法、器材試劑、藥品）；（3）經(jīng)過一定時(shí)期的觀察，相同條件下的對照組，與他人結(jié)果比較并綜合分析。這部分內(nèi)容要求簡明準(zhǔn)確、材料完整可信。

Analysis the Methods of Pharmaceuticals Microbial Count and Applicability of Methods

MA De’ning JIN Guihua CUI Xuan ZHANG Yuling Yanbian Institute for Food and Drug Control, Yanbian Jilin 133000, China

The applicability experiment of drug counting method is essential, and there are still some problems and def i ciencies in the actual inspection process. In the process of preparation of clindamycin phosphate vaginal gel, the film may be blocked and can be treated by adding a calcium chloride solution of a certain concentration of 10%. Microbiological testing of drugs is appropriate, which improves the quality of professionals and improves quality control. This article explores and analyzes the methods of microbial count of drugs and their applicability, so as to promote the level of microbial count of drugs.

pharmaceutical microorganisms; counting methods;applicability

R97

A

1674-9316（2017）20-0106-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．20．055

延邊州食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 延邊 133000通信作者：金桂花