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    胞質分裂阻滯法分析細胞組學研究指標在公共衛(wèi)生領域的應用現狀*

    2017-01-20 12:14:07蔡恬靜劉青杰
    中國醫(yī)學裝備 2017年5期
    關鍵詞:法分析胞質組學

    蔡恬靜 劉青杰*

    [文章編號] 1672-8270(2017)05-0141-03 [中圖分類號] R-33 [文獻標識碼] A

    胞質分裂阻滯法分析細胞組學研究指標在公共衛(wèi)生領域的應用現狀*

    蔡恬靜①劉青杰①*

    [文章編號] 1672-8270(2017)05-0141-03 [中圖分類號] R-33 [文獻標識碼] A

    近年來利用胞質分裂阻滯法分析微核、核質橋、核芽、核分裂指數、細胞凋亡和細胞壞死等細胞組學指標,成為公共衛(wèi)生領域探討不同人群結構、環(huán)境、職業(yè)暴露等因素對基因組不穩(wěn)定性、染色體斷裂、丟失和細胞增殖能力的影響的常用方法。現將利用胞質分裂阻滯法分析多種細胞組學指標在公共衛(wèi)生領域的應用現狀做以綜述。

    胞質分裂阻滯法;微核,核質橋;核芽;核分裂指數;細胞組學指標

    [First-author’s address]National Institute for Radiological Protection, Key Laboratory, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 100088, China.

    細胞組學研究是致力于確定單細胞分子表型,進而研究細胞結構及分子功能的科學;是根據細胞不同的分子表型來探索疾病分子機制的策略;也是連接基因組、蛋白質組和組織功能的橋梁。

    近年來,應用淋巴細胞胞質分裂阻滯法檢測外周血淋巴細胞中微核、核芽及核質橋的發(fā)生頻率和分布特點以及核分裂指數等,成為分析造成DNA損傷和錯誤修復、染色體不穩(wěn)定性、有絲分裂異常、細胞死亡和生長抑制的內因(性別、年齡及種族等)或外因(環(huán)境因素、職業(yè)暴露及疾病等)的重要手段[1-2]。

    1 微核、核芽和核質橋的相關性

    微核(micronucleus,MN)形成是染色體損傷或全染色體丟失的生物標志物,是細胞受遺傳毒物作用后的一種遺傳學終點。核芽(nuclear buds,NBUD)是細胞去除放大的或多余的DNA的機制,是基因放大、擴增或基因劑量改變的生物標志。核質橋(nucleoplasmic bridge,NPB)是細胞染色體受到損傷后,發(fā)生染色體斷裂一融合一橋循環(huán)(breakage—fusion—bridge,BFB)而形成的,DNA雙鏈斷裂發(fā)生后,雙鏈斷裂的兩條姐妹染色單體的末端發(fā)生融合,形成雙著絲粒染色體,在細胞分裂后期,由于2個著絲粒彼此移向細胞的兩極而形成細胞核之間的橋狀連接。NPB的另一個形成機制是由于端??s短或缺少端粒結合蛋白所致的端粒末端融合。MN、NBUD和NPB三者的形成機制雖不相同,但大量研究表明三者之間具有較強的相關性,都是基因毒性和染色體不穩(wěn)定的生物標志物[3]。

    2 核分裂指數的影響

    核分裂指數(nuclear division index,NDI)反映了細胞核分裂的能力和增殖狀況。核分裂指數越高,表明細胞增殖能力越強,用來評估外源化合物對細胞穩(wěn)態(tài)和毒性的影響。近年來,細胞凋亡和細胞壞死也被納入了胞質分裂阻滯法細胞組學的檢測范圍,三者的聯合使用能為外源性有害物質的毒性檢測提供細胞生長抑制和細胞毒性的相關信息。

    3 細胞組學研究在公共衛(wèi)生領域的應用現狀

    近年來,由于人們生活習慣(吸煙、飲酒及營養(yǎng)攝入等)、環(huán)境因素及職業(yè)暴露(化工材料、加工廢料及農藥等)引起的疾病問題,成為全球公共衛(wèi)生領域關注的問題[4]。以胞質分裂阻滯法為主要檢測手段的細胞組學研究方法對染色體變異和損傷標志物的研究,為各種因素給機體造成的損傷提供了細胞遺傳學和細胞毒性方面的依據。

    3.1 人群結構、分布及生活習慣等因素的影響

    評估人群細胞遺傳本底水平的變異度和明確影響細胞損傷的內、外因素,通過監(jiān)測群體數據評估一般人群中細胞遺傳學損傷的正常水平對于檢測已知職業(yè)危險因素或潛在的遺傳毒性物質暴露是必要的。

    Verica等[5-6]研究表明,正常人群中年齡、性別及吸煙三種因素對微核發(fā)生頻率的影響無顯著性差異,但NDI在年齡、性別及吸煙三種因素水平上有顯著性差異(P=0.00015)。大量的職業(yè)暴露和環(huán)境因素影響的生物監(jiān)測研究都把吸煙作為混雜因素來研究,即煙草雖然含有大量的致癌物質,但其與MN發(fā)生頻率的相關性還存在爭議,歐洲的部分實驗室也得到了相對一致的結果,對其可能的原因分析如下:①重度吸煙者(≥30支/d)缺乏葉酸和維生素B12的攝入,二者參與MN的形成[6-7];②煙草暴露可以導致體內MN的產生,但應用胞質分裂阻滯法進行外周血淋巴細胞體外培養(yǎng)時,存在MN的淋巴細胞不能接受刺激分裂為雙核細胞,因此未納入計數的范圍;③被煙草損傷的細胞不能夠進行分裂,狀態(tài)類似壞死或凋亡的細胞[8-9]。相關研究結果提示,在進行群體研究時吸煙與否的亞組分析可以忽略,值得關注的是日吸煙量>30支亞組的分析結果。

    3.2 環(huán)境因素和職業(yè)暴露因素的影響

    目前,利用胞質分裂阻滯法分析人群生活、工作環(huán)境中存在的可能導致的染色體損傷和細胞學改變的遺傳學致病因素和細胞毒素,已經成為評估多種職業(yè)危險因素與環(huán)境因素暴露的重要手段。

    在某些職業(yè)暴露(柴油機尾氣、鉛及農藥等)的研究中,MN、NBUD和NPB發(fā)生頻率均顯著高于未暴露組,且NDI顯著性降低,表明某些職業(yè)暴露可導致基因組不穩(wěn)定性和染色體損傷,并可抑制外周血淋巴細胞的分裂增殖能力,引起基因組不穩(wěn)定性增高。相關研究還表明,隨著農藥暴露水平的增加,細胞壞死率有增高趨勢,而凋亡細胞則未發(fā)現明顯的變化趨勢,但兩者較對照組皆具有顯著性差異,原因可能是農藥高劑量暴露后干擾細胞進入凋亡途徑,抑制細胞的凋亡,同時使細胞急性壞死率增加[10,13-14]。并且在電離輻射職業(yè)暴露研究結果與染色體畸變分析的結果一致,提示MN、NBUD和NPB可以作為低水平電離輻射致染色體損傷的早期標志物[15-16]。

    另有針對于苯職業(yè)暴露的研究,研究手段和分析方法較復雜。Jamebozorg等[17]、Lovreglio等[18]和Basso等[19]分別用胞質分裂阻滯法分析了苯暴露的石油工人外周血淋巴細胞中MN、NBUD和NPB的發(fā)生頻率。前兩者的結論一致:即暴露組的MN、NBUD和NPB的發(fā)生頻率明顯高于對照組,但無統(tǒng)計學差異。然而,Singaraju等[20]同樣采用胞質分裂阻滯法在暴露組工人的口腔脫落細胞中發(fā)現MN的顯著性升高。Singaraju的研究結果與上述結果相矛盾,可能的原因為:①黏膜的脫落細胞直接接觸苯等有害物質,對于細胞損傷有直接的反應;②化學毒性物質誘導的淋巴細胞和上皮細胞基因組損傷可經外周血循環(huán)滲透向下到達基底層,發(fā)揮其基因破壞效應,產生核分裂以及MN、NBUD和NPB等核異常情況;③組織間其固有的解毒和DNA修復能力的差異。

    4 結語

    細胞組學利用胞質分裂阻滯法在外周血淋巴細胞中的應用為體內和體外研究遺傳毒性和細胞毒性提供了標準化的方法,可廣泛應用于區(qū)域性的人群和暴露因素調查。由于受到年齡、性別、吸煙、飲酒、藥物以及放化療等因素較大影響,單因素分析與多因素分析可能存在矛盾的結論,在某些醫(yī)學評價方面有一定的局限性。在后續(xù)的研究中可以詳細分析不同因素對于MN、NBUD和NPB以及NDI等的影響,并將明確的因素納入研究對象的篩選原則,從而減少混雜因素對統(tǒng)計結果的影響。隨著公共衛(wèi)生事業(yè)的發(fā)展,以胞質分裂阻滯法分析研究細胞組學多重指標的手段,已經在環(huán)境、職業(yè)暴露,某些疾病及腫瘤等相關領域提供重要的遺傳學依據,相信在不久的將來會成為更為活躍的前沿研究領域。

    [1]Fenech M.Cytokinesis-block micronucleus assay evolves into a“cytome”assay of chromosomal instability,mitotic dysfunction and cell death[J]. Mutat Res,2006,600(112):58-66.

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    [3]Fenech M.Cytokinesis—block micronucleus assay evolves into a“cytome”assay of chromosomal instability,mitotic dysfunction and cell death[J].Mutat Res,2006,600(112):58-66.

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    [20]Singaraju M,Singaraju S,Parwani R,et al. Cytogenetic biomonitoring in petrol station attendants:A micronucleus study[J].J Cytol,2012,29(1):1-5.

    The application of cytokinesis-block method to analyze cytomics indicators in public health field/CAI Tian-jing, LIU Qing-jie//China Medical Equipment,2017,14(5):141-143.

    In recent years, cytokinesis-block method was used to analyze cytomics indicators including micronucleus, nuclear bridge, nuclear bud, nuclear division index, cell apoptosis and cell necrosis. In public health, it has become the common method to explore the impacts of different population structure, environment and occupational exposure for genomic instability, chromosome breakage, chromosome loss and cell proliferation. This article reviews and discusses the application of using cytokinesis block method to analyze cytomics indicators in public health field.

    Cytokinesis-block method; Micronucleus; Nuclear bridge; Nuclear bud; Nuclear division index; Cytomics indicator

    蔡恬靜,女,(1979- ),本科學歷,助理研究員。中國疾病預防控制中心輻射防護與核安全醫(yī)學所 中國疾病預防控制中心重點實驗室,研究方向:輻射生物效應。

    2017-02-20

    10.3969/J.ISSN.1672-8270.2017.05.038

    國家自然科學基金(81573081)“人外周血淋巴細胞核質橋作為快速輻射生物劑量計的研究”

    ①中國疾病預防控制中心輻射防護與核安全醫(yī)學所 中國疾病預防控制中心重點實驗室 北京 100088

    *通訊作者:qjliu@nirp.cn

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