徐 金,黃翠香,劉 青,毛云飛,倪 偉,于文章,沈 向(山東農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝科學(xué)與工程學(xué)院,作物生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 泰安 271018)
平邑甜茶根毛細(xì)胞離子流動(dòng)性對(duì)PAHs脅迫的響應(yīng)
徐 金,黃翠香,劉 青,毛云飛,倪 偉,于文章,沈 向*(山東農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝科學(xué)與工程學(xué)院,作物生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 泰安 271018)
以蘋(píng)果砧木-平邑甜茶(Malus hupehensis Rehd)幼苗為實(shí)驗(yàn)材料,采用營(yíng)養(yǎng)液栽培,利用非損傷微測(cè)技術(shù),研究多環(huán)芳烴(PAHs)中熒蒽和苯并(b)熒蒽脅迫處理對(duì)平邑甜茶幼苗根毛細(xì)胞Ca2+、K+、H+流速的影響.結(jié)果表明:(1)經(jīng)熒蒽及苯并(b)熒蒽脅迫處理后,平邑甜茶幼苗根毛細(xì)胞Ca2+平均流速由對(duì)照的(-63.53±9.30)pmol/(cm2·s)分別增加到(+62.85±10.00)pmol/(cm2·s)、(91.33±19.72)pmol/(cm2·s);K+流速平均值由基礎(chǔ)流速(-60.56±14.56)pmol/(cm2·s)分別增至(+32.60±5.44)pmol/(cm2·s)、(+36.76±5.23)pmol/(cm2·s);H+平均流速由對(duì)照的(+44.38±5.19)pmol/(cm2·s)分別降低至(-0.72±0.055)pmol/(cm2·s)、(-6.34±0.79)pmol/(cm2·s).經(jīng)熒蒽及苯并(b)熒蒽處理,根毛細(xì)胞表面Ca2+、K+、H+流動(dòng)性發(fā)生明顯逆轉(zhuǎn).Ca2+、K+表現(xiàn)為外排趨勢(shì),且外排量逐漸降低,最終趨于穩(wěn)定;H+表現(xiàn)較穩(wěn)定的內(nèi)吸趨勢(shì).(2)苯并(b)熒蒽脅迫對(duì)平邑甜茶幼苗根毛細(xì)胞離子流動(dòng)性造成的毒性效應(yīng)高于熒蒽.說(shuō)明PAHs脅迫會(huì)破壞植物根毛細(xì)胞離子流動(dòng)性,影響植物正常生長(zhǎng),為深入研究植物受PAHs脅迫所產(chǎn)生的響應(yīng)提供理論依據(jù).
平邑甜茶;熒蒽;苯并(b)熒蒽;脅迫;離子流動(dòng)性
多環(huán)芳烴(PAHs)是指2個(gè)或2個(gè)以上芳香環(huán)稠合成的有機(jī)污染物,在環(huán)境中普遍存在,具有致癌、致畸、致突變效應(yīng)[1-3].隨著苯環(huán)數(shù)的增大,其水溶性越差,降解速度越低[4].目前PAHs引起的環(huán)境問(wèn)題已得到各國(guó)的廣泛關(guān)注,而土壤成為PAHs的重要?dú)w宿,有研究表明滯留在土壤耕作層中的PAHs約達(dá)90%[5-6].PAHs進(jìn)入土壤后可通過(guò)揮發(fā)、遷移以及食物鏈等途徑在生態(tài)系統(tǒng)中富集,影響植物生長(zhǎng),威脅人體健康及食品安全,也給其他生物造成嚴(yán)重危害[7-8].現(xiàn)在PAHs種類(lèi)已達(dá)100種以上,我國(guó)也將7種PAHs列入優(yōu)先控制污染物黑名單中[9].近年來(lái),我國(guó)經(jīng)濟(jì)持續(xù)發(fā)展,卻忽視了對(duì)環(huán)境的保護(hù),能源的高需求低利用導(dǎo)致PAHs排放量不斷增加,環(huán)境污染問(wèn)題日益嚴(yán)重[10],所以廣泛開(kāi)展我國(guó)生態(tài)環(huán)境中PAHs的研究具有重要意義.
熒蒽(Fla)和苯并(b)熒蒽(Bbf)是我國(guó)7種優(yōu)控PAHs的代表性化合物,熒蒽具有潛在的致癌性、弱致突變性及免疫毒性,會(huì)破壞生物體正常防御體系[11-12],且能長(zhǎng)時(shí)間殘留在土壤中,并通過(guò)食物鏈給生態(tài)環(huán)境帶來(lái)風(fēng)險(xiǎn)[13];苯并(b)熒蒽分子量較大,其光解、水解、生物降解很微弱,相對(duì)致癌性強(qiáng),是檢驗(yàn)食品中PAHs的標(biāo)記[14].這2種物質(zhì)在土壤中含量較多,但目前有關(guān)這2種化合物對(duì)植物的毒性效應(yīng)尚未見(jiàn)報(bào)道.植物離子流的變化是反應(yīng)逆境脅迫后最初的快速信號(hào),通過(guò)離子流可以快速診斷和預(yù)測(cè)細(xì)胞的關(guān)鍵發(fā)生過(guò)程,隨著非損傷微測(cè)技術(shù)(掃描離子選擇性微電極技術(shù))的出現(xiàn),離子跨膜流動(dòng)的研究得到迅速發(fā)展[15-17].本研究采用無(wú)融合生殖、抗性強(qiáng)的蘋(píng)果砧木-平邑甜茶幼苗為實(shí)驗(yàn)材料,利用非損傷微測(cè)技術(shù),檢測(cè)熒蒽和苯并(b)熒蒽脅迫處理對(duì)其幼苗根毛細(xì)胞Ca2+、K+、H+流速的影響,揭示PAHs對(duì)植物的毒性效應(yīng),為深入研究植物受PAHs脅迫所產(chǎn)生的響應(yīng)提供理論依據(jù),為PAHs的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估積累基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù).
1.1 主要試劑
標(biāo)準(zhǔn)樣品:熒蒽(25mg,98.5%,上海安譜科學(xué)儀器有限公司),苯并(b)熒蒽(10mg,99.0%,上海安譜科學(xué)儀器有限公司)熒蒽和苯并(b)熒蒽溶液配制:用甲醇溶解熒蒽、苯并(b)熒蒽,將熒蒽及苯并(b)熒蒽的甲醇儲(chǔ)備液加入適量的Hoagland半強(qiáng)度培養(yǎng)液中,振蕩均勻,定容在2L的容量瓶中(控制甲醇濃度<1‰),制得濃度為0.2mg/L的熒蒽培養(yǎng)液和5μg/L的苯并(b)熒蒽培養(yǎng)液,在低溫條件下避光保存?zhèn)溆茫?8-21].
1.2 材料處理
選取蘋(píng)果砧木-平邑甜茶(Malus hupehensis Rehd)幼苗為供試材料,于2014年10月在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院果樹(shù)根系實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行水培試驗(yàn).
為保證試驗(yàn)準(zhǔn)確性,所用平邑甜茶幼苗生長(zhǎng)狀況應(yīng)一致且普遍長(zhǎng)出5~7片真葉,對(duì)其進(jìn)行水培,水培期間加入適量Hoagland半強(qiáng)度營(yíng)養(yǎng)液.啟動(dòng)通氣設(shè)備,為植物生長(zhǎng)提供良好環(huán)境.每7d換一次營(yíng)養(yǎng)液,每盆加營(yíng)養(yǎng)液2L.一個(gè)月后待幼苗適應(yīng)水環(huán)境后,株高10cm、長(zhǎng)出4對(duì)葉片有大量白色吸收根長(zhǎng)出時(shí),采用非損傷微測(cè)技術(shù)檢測(cè)熒蒽及苯并(b)熒蒽脅迫下平邑甜茶幼苗根毛K+、Ca2+、H+流動(dòng)性.非損傷微測(cè)試驗(yàn)于2015年5月在旭月(北京)科技有限公司進(jìn)行.
1.3 試驗(yàn)方法
測(cè)定方法:取平邑甜茶幼苗白色新生根尖1cm左右于培養(yǎng)皿,分別加入含0.2mg/L熒蒽和5μg/L苯并(b)熒蒽培養(yǎng)液處理15min,然后將幼苗根部放入測(cè)試液(Ca2+、K+、H+所用測(cè)試液相同)清洗根部,放根部于測(cè)試液中固定,對(duì)根尖部分生區(qū)周?chē)?00μm進(jìn)行測(cè)定,檢測(cè)凈Ca2+、K+、H+離子流,每個(gè)測(cè)試點(diǎn)測(cè)2min,大約10min流速穩(wěn)定后,結(jié)束測(cè)試,重復(fù)5次.
利用非損傷微測(cè)技術(shù),測(cè)定平邑甜茶根毛細(xì)胞表面Ca2+、K+、H+離子流變化.測(cè)試液配方:0.1mmol/LKCl,0.1mmol/LCaCl2,0.1mmol/LMgCl2,0.5mmol/LnaCl,0.2mmol/LNa2So4,0.3mmol/LME S,pH 6.0.測(cè)定前微電極前端灌充有15~25μm的選擇性液態(tài)離子交換劑(LⅠX)液柱,LⅠX分別為Ca2+(Sigma #21048)、H+(Sigma #95293)、K+(Sigma #60031),其后灌充10mm左右的電解質(zhì).電解質(zhì)為H+(15mmol/LNaCl+40mmol/L KH2PO4, pH 7.0),Ca2+(100mmol/L CaCl2), K+(100mmol/L KCl).將電極固定器(EHB-1; World Precision Ⅰnstruments)上的Ag/AgCl絲從電極后面插入,使其與電解質(zhì)接觸[22].參比電極(DRⅠREF-2; World Precision Ⅰnstruments)為固體電極.選用校正中能斯特斜率>56mV/decade H+微電極使用,校正液為pH5.5和pH6.5的緩沖液[23].
1.4 數(shù)據(jù)分析
離子流數(shù)據(jù)通過(guò)旭月公司提供的MageFlux軟件計(jì)算得出.采用EXCEL對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,利用DPS v7.05軟件作不同處理之間差異顯著性差異分析.
2.1 熒蒽和苯并(b)熒蒽對(duì)平邑甜茶根毛細(xì)胞Ca2+流動(dòng)性影響
圖1為熒蒽,苯并(b)熒蒽脅迫處理后,10min內(nèi)平邑甜茶根毛細(xì)胞表面Ca2+流速變化.正值代表離子外排,負(fù)值代表離子吸收.從圖1可看出,根毛細(xì)胞在正常環(huán)境條件下有基礎(chǔ)性Ca2+吸收,進(jìn)行熒蒽和苯并(b)熒蒽脅迫后,Ca2+流動(dòng)性發(fā)生逆轉(zhuǎn),表現(xiàn)為外排趨勢(shì),外排量隨處理時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸降低,最終呈穩(wěn)定趨勢(shì).此時(shí)經(jīng)熒蒽及苯并(b)熒蒽脅迫后的平邑甜茶幼苗根毛細(xì)胞Ca2+流速分別為(+38.08±8.33)pmol/(cm2·s)和(+52.27±9.21)pmol/(cm2·s).
10min內(nèi)平邑甜茶幼苗根毛細(xì)胞Ca2+流速平均值為(-63.53±9.30)pmol/(cm2·s),經(jīng)熒蒽和苯并(b)熒蒽脅迫處理后,分別增加到(+62.85± 10.00)pmol/(cm2·s)和(91.33±19.72)pmol/(cm2·s),與對(duì)照差異顯著(P<0.01).分析2種處理可以看出,苯并(b)熒蒽脅迫對(duì)平邑甜茶Ca2+流動(dòng)性的毒性效應(yīng)高于熒蒽.
圖1 熒蒽,苯并(b)熒蒽處理根毛細(xì)胞表面Ca2+流速變化Fig.1 Change of the cell surface Ca2+flow rate of root hair cells treated with fluoranthene and Benzo[b]fluoranthene
2.2 熒蒽和苯并(b)熒蒽對(duì)平邑甜茶根毛細(xì)胞K+流動(dòng)性影響
從圖2可以看出,根毛細(xì)胞在正常環(huán)境中基礎(chǔ)性的K+吸收,受熒蒽和苯并(b)熒蒽脅迫后,平邑甜茶幼苗根毛細(xì)胞K+流動(dòng)性也發(fā)生逆轉(zhuǎn),表現(xiàn)為外排趨勢(shì),起初流速迅速降低,后趨于穩(wěn)定.最終 流 速 達(dá) 到 (+23.55±6.74)pmol/(cm2·s)和(+32.15± 5.31)pmol/(cm2·s).
平邑甜茶幼苗根毛細(xì)胞在受熒蒽和苯并(b)熒蒽脅迫后,K+流速平均值由基礎(chǔ)流速(-60.56± 14.56)pmol/(m·s)分別增至(+32.60±5.44)pmol/(cm2·s)和(+36.76±5.23)pmol/(cm2·s),與對(duì)照差異極顯著(P<0.01).分析可以看出,2種脅迫處理對(duì)平邑甜茶幼苗K+流動(dòng)性毒性效應(yīng)同樣是苯并(b)熒蒽高于熒蒽.
圖2 熒蒽,苯并(b)熒蒽處理根毛細(xì)胞表面K+流速變化Fig.2 Change of the cell surface K+flow rate of root hair cells treated with fluoranthene and Benzo[b]fluoranthene
2.3 熒蒽和苯并(b)熒蒽對(duì)平邑甜茶根毛細(xì)胞表面H+流動(dòng)性影響
從圖3可以看出,根毛細(xì)胞表面H+在正常環(huán)境中表現(xiàn)為外排趨勢(shì),受熒蒽及苯并(b)熒蒽脅迫后,H+流動(dòng)性發(fā)生逆轉(zhuǎn),表現(xiàn)為比較穩(wěn)定的內(nèi)吸趨勢(shì).
測(cè)得平邑甜茶幼苗根毛細(xì)胞表面H+基礎(chǔ)流速平均為(+44.38±5.19)pmol/(cm2·s),經(jīng)熒蒽和苯并(b)熒蒽處理后,分別降低至(-0.72± 0.055)pmol/(cm2·s),(-6.34±0.79)pmol/(cm2·s),與對(duì)照差異極顯著(P<0.01).分析可以看出,苯并(b)熒蒽脅迫處理對(duì)平邑甜茶幼苗H+流動(dòng)性造成的影響高于熒蒽.
圖3 熒蒽,苯并(b)熒蒽處理根部細(xì)胞表面H+流速變化Fig.3 Change of the cell surface H+flow rate of root hair cells treated with fluoranthene and Benzo[b]fluoranthene
PAHs對(duì)植物的影響越來(lái)越引起人們的關(guān)注.Maria Ⅰsabel Cerezo等研究發(fā)現(xiàn)PAHs減少了原綠球藻的DNA合成,延緩其細(xì)胞分裂,導(dǎo)致原綠球藻生長(zhǎng)量降低[24].洪有為等[25]對(duì)秋茄幼苗進(jìn)行脅迫處理,發(fā)現(xiàn)隨菲濃度加大,根細(xì)胞受傷害程度增加,根系活力下降,葉綠素a、b含量也呈下降趨勢(shì).丁克強(qiáng)等[26]研究認(rèn)為苯并(a)芘污染土壤會(huì)抑制小麥種子發(fā)芽以及根的伸長(zhǎng),對(duì)于不同植物,污染物的毒性效應(yīng)也有區(qū)別.本試驗(yàn)選取PAHs中熒蒽及苯并(b)熒蒽這2種物質(zhì)對(duì)蘋(píng)果砧木-平邑甜茶幼苗進(jìn)行脅迫處理,發(fā)現(xiàn)受脅迫后的平邑甜茶幼苗根毛細(xì)胞表面Ca2+、K+、H+流動(dòng)性相比正常環(huán)境中發(fā)生明顯逆轉(zhuǎn),Ca2+、K+表現(xiàn)為外排趨勢(shì),H+表現(xiàn)較穩(wěn)定的內(nèi)吸趨勢(shì).說(shuō)明PAHs的存在嚴(yán)重干擾植物的正常生長(zhǎng),破壞了植物對(duì)礦質(zhì)元素的吸收.
平邑甜茶幼苗在受到PAHs脅迫后,根毛細(xì)胞表面Ca2+外排.導(dǎo)致這種結(jié)果的原因可能是根毛細(xì)胞受外來(lái)PAHs刺激后,胞質(zhì)Ca2+濃度出現(xiàn)短暫上升,從而激起細(xì)胞應(yīng)答,做出相應(yīng)調(diào)節(jié)反應(yīng).Ca2+泵和Ca2+/H+反向轉(zhuǎn)運(yùn)體存在于細(xì)胞內(nèi),當(dāng)細(xì)胞受到刺激后,跨膜釋放胞質(zhì)Ca2+到胞外及胞內(nèi)“鈣庫(kù)”,以維持Ca2+濃度穩(wěn)態(tài)[27-28].Ca2+是維持植物細(xì)胞正常生理功能的重要離子,參與大多數(shù)細(xì)胞生理代謝過(guò)程,在穩(wěn)定植物細(xì)胞壁、細(xì)胞膜,調(diào)控細(xì)胞內(nèi)外離子濃度平衡、誘導(dǎo)細(xì)胞抗逆基因表達(dá)中起重要作用[29-31].平邑甜茶受到熒蒽和苯并(b)熒蒽脅迫后,體內(nèi)Ca2+會(huì)大量外排,細(xì)胞內(nèi)離子穩(wěn)態(tài)失衡,細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的完整性、功能穩(wěn)定性被破壞,不利于鈣的儲(chǔ)藏及吸收,影響平邑甜茶的正常生長(zhǎng)發(fā)育.
受外源PAHs脅迫,平邑甜茶幼苗根毛細(xì)胞K+流動(dòng)性發(fā)生逆轉(zhuǎn),表現(xiàn)為外排趨勢(shì).與顧閩峰等通過(guò)對(duì)結(jié)球甘藍(lán)幼苗根進(jìn)行鹽脅迫,導(dǎo)致K+含量下降結(jié)果相似[32].導(dǎo)致這種結(jié)果可能是由于PAHs對(duì)根毛細(xì)胞膜造成損傷,致使根毛喪失選擇性吸收離子的功能.細(xì)胞內(nèi)離子穩(wěn)態(tài)失衡,導(dǎo)致K+外流[33-35].此外,根毛細(xì)胞受PAHs脅迫會(huì)導(dǎo)致更多活性氧的產(chǎn)生,從而發(fā)生氧化脅迫,細(xì)胞膜通透性改變,內(nèi)部電解質(zhì)外滲,K+外排,引起細(xì)胞死亡[36].此外,根毛細(xì)胞膜電勢(shì)的去極化也會(huì)造成K+外排[37].K+是植物生長(zhǎng)發(fā)育中必需的大量元素,對(duì)調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透壓,維持細(xì)胞電荷平衡、酶活性調(diào)節(jié)、蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞生長(zhǎng)、氣孔開(kāi)閉、細(xì)胞極性以及葉片運(yùn)動(dòng)都有著重要意義[38].K+外流,植物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)元素得不到補(bǔ)充,營(yíng)養(yǎng)失調(diào),生長(zhǎng)受到抑制,甚至死亡.
待測(cè)幼苗根部H+受PAHs脅迫后,表現(xiàn)為內(nèi)吸趨勢(shì).原因可能是Ca2+-ATPase、Ca2+/H+反向轉(zhuǎn)運(yùn)體受熒蒽和苯并(b)熒蒽脅迫后被活化,同時(shí)H+-ATPase水解ATP產(chǎn)生能量,將H+從細(xì)胞質(zhì)中泵出,產(chǎn)生跨質(zhì)膜H+電化學(xué)勢(shì)梯度,驅(qū)動(dòng)質(zhì)膜Ca2+/H+反向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白進(jìn)行離子轉(zhuǎn)運(yùn):H+順著電化學(xué)勢(shì)梯度進(jìn)入細(xì)胞,Ca2+逆著電化學(xué)勢(shì)梯度排出細(xì)胞.同時(shí)平邑甜茶幼苗根毛細(xì)胞由于受PAHs脅迫導(dǎo)致膜電勢(shì)去極化,外向K+通道被激活,介導(dǎo)K+向細(xì)胞膜外流動(dòng),促進(jìn)K+的釋放,由此產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)外電化學(xué)勢(shì)梯度,在H+/K+反向轉(zhuǎn)運(yùn)體作用下,胞外H+進(jìn)入細(xì)胞,K+排出細(xì)胞[39].H+參與光合作用等植物生理活動(dòng),PAHs脅迫導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)H+穩(wěn)態(tài)失衡,對(duì)平邑甜茶光合作用等一系列生理活動(dòng)造成不利影響,影響其正常生長(zhǎng).
熒蒽及苯并(b)熒蒽這兩種物質(zhì)對(duì)根系細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的完整性、穩(wěn)定性的破壞,及其吸收轉(zhuǎn)運(yùn)等毒性機(jī)理有待于進(jìn)一步研究.
4.1 受熒蒽及苯并(b)熒蒽脅迫,根毛細(xì)胞表面Ca2+、K+、H+流動(dòng)性發(fā)生明顯逆轉(zhuǎn),Ca2+、K+表現(xiàn)為外排趨勢(shì),且外排量逐漸降低,最終趨于穩(wěn)定;H+表現(xiàn)較穩(wěn)定的內(nèi)吸趨勢(shì).
4.2 苯并(b)熒蒽脅迫對(duì)平邑甜茶幼苗根毛細(xì)胞表面Ca2+、K+、H+流動(dòng)性造成的毒害效應(yīng)高于熒蒽.
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致謝:文章中的英語(yǔ)寫(xiě)作部分,謝興斌老師給予了很大幫助,在此表示感謝.
The ion mobility in root hair cells of Malus hupehensis in response to stress from PAHs.
XU Jin, HUANG Cui-xiang,LiU Qing, MAO Yun-fei, NI Wei, YU Wen-zhang, SHEN Xiang (College of Horticultural Science and Engineering,Shandong Agricultural University, State Key Laboratory for Crop Biology, Taian 271018, China). China Environmental Science, 2016,36(10):3107~3111
Apple stock-Pingyitiancha (Malus hupehensis Rehd) was selected as experimental materials, hydroponic experiments were conducted with or without fluoranthene and benzo (b) fluoranthene. Non-invasive Micro-test Technique was used to detect the effects of Ca2+, K+, H+fluxes in response to polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) treatments. Our results showed that: (1) fluoranthene and benzo (b) fluoranthene treatments resulted in the liquidity of Ca2+increased from(-63.53±9.30)pmol/(cm2·s) to (+62.85±10.00)pmol/(cm2·s)、(91.33±19.72) pmol/(cm2·s); the liquidity of K+increased from(-60.56±14.56)pmol/(cm2·s) to(+32.60±5.44)pmol/(cm2·s)、(+36.76±5.23)pmol/(cm2·s); the liquidity of H+reduced from(+44.38±5.19)pmol/(cm2·s) to(-0.72±0.055)pmol/(cm2·s)、(-6.34±0.79)pmol/(cm2·s). fluoranthene and benzo (b)fluoranthene treatments resulted in the liquidity of Ca2+, K+, H+in root epidermis obvious reversal. A dramatic Ca2+, K+efflux was observed in root epidermis under stress, and gradually reduced to a stable level. Meanwhile, H+showed influx and did not affect the PAHs treatments. (2) Benzo[b]fluoranthene Stress showed more toxic effects on ion mobility in root hair cells than that of fluoranthene. The results indicated that PAHs stress could damage the ion mobility of root hair cells,interfere plants growth and development, providing a theoretical basis for further study on the response of plants to PAHs stress.
Malus hupehensis Rehd;fluoranthene;benzo[b]fluoranthene;stress;the ion mobility
X173
A
1000-6923(2016)10-3107-05
徐 金(1992-),女,山西運(yùn)城人,在讀碩士研究生,主要從事果樹(shù)生理學(xué)方向研究.
2016-02-29
山東省果品創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)(SDAⅠT-06-07);支撐計(jì)劃專(zhuān)項(xiàng)(2014BAD16B02);現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專(zhuān)項(xiàng)(CARS-28);公益性行業(yè)科技專(zhuān)項(xiàng)(201303093)
* 責(zé)任作者, 教授, guanshanghaitang@126.com