不同產(chǎn)地珠子參中氨基酸成分分析*

張 欣，王 潔，許苗苗，宋小妹?

1. 陜西中醫(yī)藥大學(xué)(咸陽(yáng) 712046)，2陜西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科(咸陽(yáng)712000)

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·方藥縱橫·

不同產(chǎn)地珠子參中氨基酸成分分析*

張 欣1，王 潔2，許苗苗1，宋小妹1?

1. 陜西中醫(yī)藥大學(xué)(咸陽(yáng) 712046)，2陜西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科(咸陽(yáng)712000)

目的：建立珠子參氨基酸的測(cè)定方法，并比較不同產(chǎn)地的珠子參中氨基酸的含量差異。方法：采用氨基酸分析儀測(cè)定不同產(chǎn)地珠子參中氨基酸含量，并利用SAS軟件進(jìn)行聚類和主成分分析。結(jié)果：不同產(chǎn)地珠子參均含有17種氨基酸，其中必需氨基酸有7種占總氨基酸28.5%，藥用氨基酸有8種占總氨基酸45.6%；聚類和主成分分析結(jié)果為陜西和四川產(chǎn)地分為一類，云南一類。結(jié)論：不同產(chǎn)地珠子參中氨基酸含量具有一定差異，該結(jié)果為珠子參的開(kāi)發(fā)、利用及珠子參的質(zhì)量品質(zhì)評(píng)定提供科學(xué)依據(jù)。

珠子參為五加科人參屬植物珠子參 Panax japonicus C.A.Mey.var. major( Burk.)C.Y.Wu et K.M.Feng或羽葉三七 Panax japonicus C.A.Mey.var.bipinnatifidus( Seem.)C.Y.Wu et K.M.Feng的干燥根莖。具有補(bǔ)肺, 養(yǎng)陰, 活絡(luò), 止血之功[1]，在我國(guó)陜西、四川、云南、貴州等地均有分布。文獻(xiàn)報(bào)道，珠子參含有多種皂苷類成分[2-5]、多糖[4]和氨基酸類成分[5]。目前對(duì)珠子參的化學(xué)成分報(bào)道較多，但對(duì)珠子參中氨基酸的研究報(bào)道少見(jiàn)。氨基酸不僅是人體的必需營(yíng)養(yǎng)成分，缺乏氨基酸時(shí)，人體正常的生長(zhǎng)發(fā)育就會(huì)受到抑制或?qū)е录膊。欢野被徇€可參與人參皂苷的轉(zhuǎn)化，研究報(bào)道精氨酸可促進(jìn)齊墩果酸型人參皂苷Ro轉(zhuǎn)化為姜狀三七皂苷R1[6]。因此，中藥中的氨基酸往往是治病的主要有效成分或輔助成分。本研究利用氨基酸自動(dòng)分析儀對(duì)不同產(chǎn)地珠子參根中氨基酸組成及含量進(jìn)行測(cè)定，并進(jìn)行分析評(píng)價(jià)，旨在探索不同產(chǎn)地珠子參中氨基酸的差異及藥用價(jià)值。

材料與方法

1 儀 器 L-8900型全自動(dòng)氨基酸分析儀(日本日立公司)；R200D電子分析天平(德國(guó)Satorius公司)；超聲清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司，型號(hào)SB-3200D，180W，40KHz)。

2 試藥與材料

2.1 試藥: 氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品(美國(guó)Sigma公司)；其余試劑(分析純，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司)。

2.2 材料: 珠子參分別購(gòu)自陜西中醫(yī)、藥大學(xué)四川、云南等地，采集到的所有植株均由陜西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院生藥教研室王繼濤高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定為五加科人參屬植物珠子參Panax japonicus C.A.Mey.var.major (Burk.) C.Y.Wu et K.M.Feng或五加科人參屬植物羽葉三七Panax japonicus C.A.Mey.var.bipinnatifidus(Seem.)C.Y.Wu et K.M.Feng，見(jiàn)表1。

3 研究方法

3.1 測(cè)試條件：離子交換柱：柱長(zhǎng)：4.6 mm×60 mm；樹(shù)脂：2622；反應(yīng)柱柱溫：135 ℃；分離柱柱溫：57 ℃；緩沖液流速：0.4 ml·min-1；柱壓7.000-7.300 MPa；茚三酮流速：0.350 ml/min；柱壓：0.700-0.800 MPa。

表1 珠子參來(lái)源及品種

3.2 供試品溶液的制備:稱取表1中各樣品粉末約1.0 g，精密稱定，置安瓿底部，加 6 mol/L鹽酸10 ml，冷凍，抽真空封口，于110 ℃隔氧水解24 h，取出放冷至室溫，打開(kāi)安瓿，過(guò)濾，水解液蒸干后，用0.02 mol·L鹽酸溶解，定容至200 ml量瓶中，備用。

3.3 對(duì)照品溶液的制備:取美國(guó)Sigma公司氨基酸對(duì)照品適量，精密稱取，用0.02 mol/L鹽酸溶液定容至250 ml量瓶中，混勻，作為氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，吸取2.00 ml氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于50 ml量瓶中，以0.02 mol/L鹽酸溶液定容、混勻，使氨基酸組份濃度C(氨基酸)=0.1 mol/L。

3.4 樣品含量的測(cè)定:按L-8900型全自動(dòng)氨基酸分析儀操作規(guī)程，調(diào)節(jié)好儀器操作參數(shù)后，對(duì)樣品進(jìn)行氨基酸含量測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。

聚類和主成分分析:利用SAS軟件對(duì)珠子參氨基酸進(jìn)行聚類和主成分分析，由結(jié)果可知，主要分為兩類，1,2,3,4,7，9,5,6一類；8一類。即珠子參氨基酸

陜西和四川歸為一類沒(méi)有差異，而云南分為兩類可能由于采收時(shí)期不同或當(dāng)?shù)丨h(huán)境差異，導(dǎo)致初生代謝產(chǎn)物累積的高低，但總體來(lái)說(shuō)陜西、云南、四川絕大多數(shù)珠子參中氨基酸差異不大(圖1)。主成分分析結(jié)果與聚類相符(圖2)。再結(jié)合2.4項(xiàng)下測(cè)定結(jié)果可知，陜西漢中市寧強(qiáng)縣舒家壩鎮(zhèn)珠觀村和麗江市玉龍納西族自治縣魯?shù)殒?zhèn)拉美榮山腳種植基地的珠子參總氨基酸含量較高。聚類、主成分分析結(jié)果如下：

表2 不同來(lái)源及品種9份珠子參中

注：*必需氨基酸；#：藥用氨基酸；T：總氨基酸；E：必需氨基酸總量；M：藥用氨基酸；E/T：必需氨基酸總量占總氨基酸百分比；M/T：藥用氨基酸總量占總氨基酸百分比從表2可見(jiàn)，珠子參根中的氨基酸種類豐富，含有17種常見(jiàn)氨基酸，其中7種為必需氨基酸，8種為藥用氨基酸，而且西安市周至縣厚畛子和樂(lè)山市峨眉山市黃灣鄉(xiāng)差地村1組產(chǎn)的珠子參不含蛋氨酸。

不同產(chǎn)地珠子參含氨基酸總量、藥用氨基酸、必需氨基酸含量最高的是漢中市寧強(qiáng)縣舒家壩鎮(zhèn)珠觀村。

圖1 珠子參氨基酸聚類分析圖 圖2 珠子參氨基酸主成分分析圖

討 論

研究報(bào)道可知氨基酸可參與人參皂苷的轉(zhuǎn)化，其中精氨酸可促進(jìn)齊墩果酸型人參皂苷Ro轉(zhuǎn)化為姜狀三七皂苷R1[6]。珠子參中主要有效成分為人參皂苷Ro、竹節(jié)參皂苷Ⅳa、姜狀三七苷R1、去葡萄糖竹節(jié)參皂苷Ⅳa，在前期研究中可知四川和陜西產(chǎn)地珠子參中人參皂苷Ro和竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量高于姜狀三七苷R1、去葡萄糖竹節(jié)參皂苷Ⅳa，而云南產(chǎn)珠子參結(jié)果與之相反，姜狀三七苷R1和去葡萄糖竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量較高[7]。本文測(cè)定的17種氨基酸中精氨酸的含量最高，占總氨基酸的21.57%，其中云南珠子參中的氨基酸含量明顯高于陜西和四川。不同產(chǎn)地及品種珠子參中氨基酸種類較多(色氨酸因水解幾乎全被破壞)，除西安市周至縣厚畛子和樂(lè)山市峨眉山市黃灣鄉(xiāng)差地村1組產(chǎn)的珠子參不含蛋氨酸外，不同產(chǎn)地的珠子參均含有16種氨基酸，含量較高的有天門(mén)冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、精氨酸，不少氨基酸[8-9]有很強(qiáng)的藥理活性，其中天冬氨酸具有鎮(zhèn)咳去痰、降低血壓、保護(hù)心臟等作用，谷氨酸不僅屬于鮮味氨基酸，而且能在人體內(nèi)與血氨結(jié)合形成對(duì)機(jī)體無(wú)害的谷氨酰胺，解除組織代謝過(guò)程中產(chǎn)生的氨毒害作用,并參與腦組織代謝，使腦功能活躍，因此，對(duì)珠子參中氨基酸的研究有重要意義。

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(收稿：2016-07-16)

Analysis of amino acids in Rhizoma panacis majoris from different producing area

Zhang Xin, Wang Jie, Xu Miaomiao, et al.

Shaanxi University of Chinese Medicine(Xianyang 712046)

Objective：To establish a method for the determination of Amino Acids in Rhizoma panacis majoris，and compare the difference of content from different producing areas. Methods ： Using amino acid analyzer to determine the content of amino acids of Rhizoma panacis majoris from different origin, then clutering and principal component analysis using SAS software. Results：The Rhizoma panacis majoris of different origin contained 17 kinds of amino acids,respectively, including 7 kinds of essential amino acids which accounted for 28.5% of total amino acidsand 8 kinds of medicinal amino acids which accounted for 45.6% of total amino acids; clustering and principal component analysis results for Shaanxi and Sichuan area is divided into a class, a class of Yunnan. Conclusion： The amino acid content of Rhizoma panacis majoris from different origin had some difference , and provide scientific basis for the results of Rhizoma panacis majoris quality development, utilization and evaluation of Rhizoma panacis majoris.

Rhizoma panacis majoris Amino Acids Cluster Analysis Principal Component Analysis

*國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81102805/H2804)

珠子參 氨基酸 聚類分析 主成分分析

R962

A DOI 10.3969/j.issn.1000-7369.2017.01.058

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