以免疫應(yīng)答為主線的系列免疫學(xué)開放性實驗探索

張 珍，胡 濤，杜鎮(zhèn)鎮(zhèn)，欒希英

（濱州醫(yī)學(xué)院，山東 濱州 256603）

以免疫應(yīng)答為主線的系列免疫學(xué)開放性實驗探索

張 珍，胡 濤，杜鎮(zhèn)鎮(zhèn)，欒希英

（濱州醫(yī)學(xué)院，山東 濱州 256603）

目的 探討以免疫應(yīng)答為主線的系列開放性實驗在醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗教學(xué)中應(yīng)用的效果。方法 根據(jù)免疫學(xué)科的主線——免疫應(yīng)答，設(shè)計4個免疫學(xué)開放性實驗項目。選擇我校2013級臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)兩個班學(xué)生為研究對象，隨機(jī)分為實驗組和對照組。對照組按照實驗教學(xué)大綱開展常規(guī)的實驗教學(xué)，實驗組在常規(guī)實驗教學(xué)的基礎(chǔ)上，增加免疫學(xué)開放性實驗項目。教學(xué)結(jié)束后，對兩組進(jìn)行期末考試和免疫學(xué)授課滿意度問卷調(diào)查。結(jié)果 實驗組學(xué)生的期末考試成績高于對照組（P＜0.01）；問卷調(diào)查顯示，實驗組學(xué)生學(xué)習(xí)興趣、自學(xué)能力、團(tuán)隊協(xié)作能力、創(chuàng)新綜合思維能力、實踐技能得分均高于對照組（P＜0.05）。結(jié)論 以免疫應(yīng)答為主線的開放性實驗有助于學(xué)生學(xué)習(xí)成績及綜合能力的提升。

實驗教學(xué)；開放性實驗；免疫應(yīng)答；免疫學(xué)

《本科醫(yī)學(xué)教育標(biāo)準(zhǔn)——臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)（試行）》中指出，醫(yī)學(xué)院校必須努力開展“以學(xué)生為中心”和“自主學(xué)習(xí)”為主要內(nèi)容的教育方式和教學(xué)方法改革，加強(qiáng)學(xué)生批判性思維和終身學(xué)習(xí)能力的培養(yǎng)，積極關(guān)注溝通與協(xié)作意識的養(yǎng)成[1]。醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)實驗教學(xué)作為鞏固理論知識、培養(yǎng)學(xué)生自主學(xué)習(xí)和實踐能力的重要環(huán)節(jié)，在醫(yī)學(xué)生綜合素質(zhì)的培養(yǎng)中起著重要作用。近年來，我校免疫學(xué)實驗室探索實踐了基于能力培養(yǎng)的開放項目，圍繞免疫學(xué)的主線——免疫應(yīng)答，設(shè)計了關(guān)于抗體制備與鑒定的開放性實驗，旨在積極培養(yǎng)學(xué)生自主學(xué)習(xí)的意識和能力，加強(qiáng)學(xué)生溝通協(xié)作與實驗技能的培養(yǎng)，為后續(xù)學(xué)習(xí)、工作打下堅實的基礎(chǔ)，現(xiàn)介紹如下。

1 開放性實驗的對象與方法

1.1 選取開放性實驗項目

根據(jù)實驗室條件，教師設(shè)計4個實驗項目：細(xì)菌“H”抗體的制備與鑒定、傷寒桿菌“O”的制備與鑒定、抗綿羊紅細(xì)胞抗體（溶血素）的制備與鑒定、兔抗牛血清抗體的制備與鑒定。

1.2 研究對象與準(zhǔn)備工作

隨機(jī)選取我校2013級臨床醫(yī)學(xué)學(xué)生為研究對象，將6班68人作為實驗組；5班69人作為對照組。理論授課與實驗教學(xué)都按照教學(xué)計劃正常實施，在課程進(jìn)行一半時，把實驗組學(xué)生按照每4～5人分為若干小組，每小組選取一個實驗項目，分發(fā)簡易教材《基于能力培養(yǎng)的綜合實驗指導(dǎo)》。組內(nèi)成員可根據(jù)所參與實驗項目進(jìn)一步查閱文獻(xiàn)，充分交流討論，確定具體免疫方案與鑒定方法，最后由教師審閱批準(zhǔn)。之后每組解剖一只家兔，認(rèn)識中樞神經(jīng)和外周免疫器官。

1.3 動物免疫過程與抗體鑒定結(jié)果

1.3.1 抗原的制備與保存 學(xué)生根據(jù)每個實驗項目中所需抗原的特性采取相應(yīng)的制備與保存措施，下面以變形桿菌“H”抗原制備為例闡述抗原制備過程：（1）變形桿菌密集劃線培養(yǎng)24～48小時；（2）用含有5%石炭酸（或0.3%～0.5%甲醛）的無菌生理鹽水洗下菌苔，37°C水浴24小時；（3）取少量菌液接種于平板上24小時，以確定有無活菌；（4）確定無活菌后稀釋到109個/ml，放4°C冰箱保存待用。

1.3.2 免疫家兔抗體的鑒定 每小組學(xué)生按照免疫方案對家兔多次適量注入抗原進(jìn)行強(qiáng)化免疫，期間多次采血分析家兔體內(nèi)淋巴細(xì)胞群與血清中抗體產(chǎn)生的動態(tài)變化。下面以家兔抗牛血清抗體的制備與鑒定為例闡述強(qiáng)化免疫與抗體鑒定的流程，見圖1。

圖1 家兔抗牛血清抗體的制備與鑒定實驗流程

1.3.3 開放性實驗結(jié)果（1）血清抗體、抗原效價結(jié)果：對家兔多次注入抗原免疫后，其血清相應(yīng)抗體鑒定結(jié)果均出現(xiàn)陽性，證實免疫方案有效。其中變形桿菌抗“H”抗體與傷寒桿菌抗“O”抗體凝集反應(yīng)效價1∶500以上，抗綿羊紅細(xì)胞的抗體（溶血素）補(bǔ)體溶血實驗效價在1∶1 000以上，兔抗牛血清的環(huán)狀沉淀反應(yīng)效價在1∶20以上。（2）實驗過程中對淋巴細(xì)胞表型的測定：實驗中，在不同的時間點采集家兔抗凝血進(jìn)行淋巴細(xì)胞分離，之后用流式細(xì)胞術(shù)對不同表型的淋巴細(xì)胞進(jìn)行測定。如兔抗牛血清制備實驗中，分別在免疫前、免疫一周、免疫兩周時對家兔血液中T淋巴細(xì)胞表型測定CD4+/CD8+比值（見圖2），CD4+、CD8+分布情況（見圖3）。學(xué)生按照實驗過程撰寫詳細(xì)的實驗報告，包括實驗原理、材料、步驟、結(jié)果和分析，深刻理解了動態(tài)的免疫應(yīng)答過程。

圖2 牛血清免疫家兔的不同時間家兔血清內(nèi)CD4+/CD8+比值變化

2 教學(xué)效果評價

2.1 對照組與實驗組學(xué)生考試成績比較

教研室根據(jù)免疫學(xué)科的特點，建立了多元化的考核體系，包括學(xué)生常規(guī)的期末筆試與平時的形成性評價（包括不定時課堂提問、隨堂小測驗、實驗報告的撰寫）。其中期末筆試成績占總成績的70%，期末試卷滿分為100分，計量數(shù)據(jù)以表示，應(yīng)用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。實驗組平均期末筆試成績?yōu)椋?2.22±7.28）分，對照組為（78.07±7.67）分，兩組成績比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。

2.2 問卷調(diào)查結(jié)果

課程結(jié)束后，教研室向兩組學(xué)生發(fā)放免疫學(xué)授課滿意度測評問卷，內(nèi)容包括學(xué)習(xí)興趣、團(tuán)隊協(xié)作能力、自學(xué)能力、創(chuàng)新綜合思維能力、實踐技能5項，每項根據(jù)滿意度從高到低對應(yīng)的分?jǐn)?shù)分別為5分、4分、3分、2分、1分。對照組和實驗組問卷有效回收率分別為98.6%和100%，每項得分?jǐn)?shù)據(jù)以表示，采用t檢驗。結(jié)果顯示，兩組對免疫學(xué)的授課滿意度比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

3 討論

3.1 開放性實驗項目的選擇思路

以免疫應(yīng)答為主線設(shè)計醫(yī)學(xué)免疫學(xué)貫通式開放性實驗項目，使學(xué)生在掌握具體實驗技術(shù)的同時，多了對理論知識的思考：抗原如何進(jìn)入機(jī)體、機(jī)體又是怎樣致敏淋巴細(xì)胞和產(chǎn)生抗體的，這個動態(tài)免疫應(yīng)答過程需要各免疫器官、免疫組織、免疫細(xì)胞與分子各負(fù)其責(zé)又相互協(xié)同來完成。所以此實驗項目使學(xué)生對免疫學(xué)有了更全面的認(rèn)識，靜態(tài)的免疫概念變得鮮活起來[2]。同時結(jié)合常規(guī)實驗，如抗原抗體沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)、吞噬試驗等，加強(qiáng)各知識點橫向縱向的聯(lián)系，使學(xué)生進(jìn)一步掌握免疫學(xué)的概念與理論，因此，此開放性實驗項目是常規(guī)教學(xué)的有益補(bǔ)充。

圖3 牛血清免疫家兔的不同時間家兔血清內(nèi)淋巴細(xì)胞表型CD4+、CD8+的分布

表1 實驗組與對照組學(xué)生滿意度測評比較（分）

3.2 教師需對整個實驗教學(xué)過程精心組織，注重規(guī)范、嚴(yán)謹(jǐn)科學(xué)精神的培養(yǎng)

首先教師要多關(guān)注學(xué)生良好實驗習(xí)慣的養(yǎng)成，實驗過程的細(xì)節(jié)如保持環(huán)境整潔、規(guī)范取放實驗器材、愛護(hù)實驗動物、嚴(yán)格技術(shù)操作流程、合理處置實驗廢棄物等，教師處處以身作則，保證整個實驗的安全、規(guī)范[3]。其次整個實驗時間跨度長，教師與學(xué)生都有常規(guī)任務(wù)，所以對開放性實驗項目任務(wù)的執(zhí)行、時間安排等都需及時溝通完善，更需組內(nèi)各成員間團(tuán)結(jié)協(xié)作。再次，多給學(xué)生提供思維拓展的空間，鼓勵學(xué)生提出問題，如變形桿菌“H”抗原的制備中，“H”抗原用含有5%石炭酸的無菌生理鹽水變形桿菌液37°C水浴24小時，而“O”抗原則是無菌生理鹽水傷寒菌液隔水煮沸兩小時，為什么處理方法不一樣？原來不同種類抗原的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)均不同，加熱的目的是除去不耐熱的“H”鞭毛抗原而保留耐熱的“O”抗原。再比如對家兔采血時，血清析出最適溫度的選擇與操作方法，這些看似簡單的問題卻隱含了免疫學(xué)的重要知識，常常決定了實驗的最終成敗。教師應(yīng)鼓勵學(xué)生提出問題、發(fā)現(xiàn)問題并解決問題，培養(yǎng)學(xué)生迎難而上的探索精神。

3.3 開放性實驗實施中的不足

整個實驗延續(xù)時間長，教師人力、實驗室物力均有限，只能少部分學(xué)生同時參與，再就是開放性實驗項目的實施中，學(xué)生在查閱文獻(xiàn)、實驗過程、論文撰寫等方面花費大量的精力，是一個綜合素質(zhì)能力上升的過程，但當(dāng)前的考核評價體系還不健全，需研究建立動態(tài)縱向的、對能力檢測等更合理的指標(biāo)體系。綜上所述，實驗教學(xué)的改革，關(guān)鍵不在于學(xué)生掌握的是不是最新的實驗方法，而是學(xué)生能否掌握科學(xué)的實驗思維，學(xué)會主動分析和解決實驗中遇到的問題[4]。本研究不僅為學(xué)生自主學(xué)習(xí)提供了拓展平臺，并且制備了大量免疫效果較好的血清抗體用于以后常規(guī)的本科實驗，節(jié)約了大量經(jīng)費，以后還需篩選補(bǔ)充更多的實驗項目，讓更多的學(xué)生參與，以培養(yǎng)實踐能力強(qiáng)又具有創(chuàng)新能力的高層次醫(yī)學(xué)人才。

[1]馮寶慶，高月春，楊林.本科醫(yī)學(xué)教育標(biāo)準(zhǔn)實施方略的研究與探索[J].

中華醫(yī)學(xué)教育雜志，2010，30（1）：143-145.

[2]胡濤，劉希偉.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)整體教學(xué)設(shè)計的探索與實踐[J].中華醫(yī)學(xué)教育雜志，2007，27（6）：25-27.

[3]劉娟，王全興，于益芝，等.提高醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗教學(xué)效果的實踐與體會[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教育，2014，16（12）：1042-1044.

[4]周曉勃，劉如意，雷艷君，等.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗課教學(xué)方法改革的探索及思考[J].西北醫(yī)學(xué)教育，2015，23（1）：119-121.

G424.31

B

1671-1246（2016）24-0067-03

2015年度山東省本科高校教學(xué)改革研究項目（2015M031）；2012年度山東省高等學(xué)校教學(xué)改革立項項目（2012376）