豬白肌病的診斷與防治

孫光野，趙 陽，鄒 穎，張洪友

(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院，黑龍江 大慶 163319)

豬白肌病的診斷與防治

孫光野，趙 陽，鄒 穎，張洪友

(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院，黑龍江 大慶 163319)

2016年9月13日，黑龍江寶泉嶺管局某豬場送檢2頭60日齡病死豬。首先通過流行病學(xué)調(diào)查得知，該豬場規(guī)模214頭，發(fā)病豬46頭，死亡8頭，發(fā)病率達到21.50%，死亡率達到3.7%。發(fā)病的豬精神沉郁，呼吸困難，跛行，厭食，喜臥不動，排黃色稀便。病理剖檢可見淋巴結(jié)水腫、出血，肺水腫，肌肉顏色淡，肉中還有白色斑點，肌肉組織干燥、混濁，切面粗糙不平，夾有點狀或條狀出血。初步懷疑是豬水腫和豬白肌病，還需進行實驗室診斷確診。通過提取小腸，十二指腸分離純化后的細(xì)菌DNA經(jīng)PCR檢測未見致豬水腫病陽性條帶，肺臟和肝臟分別在普通瓊脂培養(yǎng)基和鮮血瓊脂培養(yǎng)基上接種未見病原菌。對豬的血液進行了硒含量的測定，發(fā)現(xiàn)每毫升血液當(dāng)中硒的含量0.018 mg，楊玉蘭［1］認(rèn)為，血硒含量低于0.03 mg/kg體重仔豬屬于缺硒。然后選擇有代表性的病變部位若干個組織塊做病理切片對其進行組織學(xué)觀察，肌肉可見明顯的病變，最終確診為豬白肌病。

1 材料與方法

1.1 材料 實驗動物:寶泉嶺管局某豬場送檢黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物醫(yī)院的2頭60日齡的病豬。

1.2 試劑及儀器 Marker，購自寶生物工程(大連)有限公司;細(xì)菌基因組DNA快速提取試劑盒，購自廣州東盛生物科技有限公司;石蠟、甲醛、飽和碳酸鋰、伊紅、蘇木素、松節(jié)油、中性樹膠由黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院基礎(chǔ)教研室保存;麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，購自上海撫生實業(yè)有限公司;鮮血瓊脂培養(yǎng)基由黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院預(yù)防獸醫(yī)學(xué)實驗室制備;PCR儀，購自寶生物工程(大連)有限公司;光學(xué)顯微鏡，購自上海點應(yīng)光學(xué)儀器有限公司;切片機，購自沈陽譽得電子儀器有限公司;烤片機，購自上海艾測電子科技有限公司;恒溫箱，購自上海森信實驗儀器有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 豬場調(diào)查 首先采用流行病學(xué)的方法對豬場的飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生進行了調(diào)查。

1.3.2 實驗室診斷 無菌采取小腸、十二指腸黏膜液接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基中。取仔豬的肺臟和肝臟分別在普通瓊脂培養(yǎng)基和鮮血瓊脂培養(yǎng)基上接種，37℃恒溫箱培養(yǎng)24 h，觀察菌落形態(tài)。挑取單個菌落進行純化培養(yǎng)，然后按照細(xì)菌基因組DNA快速提取試劑盒提取細(xì)菌基因組DNA進行PCR擴增。采血置于含肝素鈉的離心管，3 000 r/min離心15 min，收集血漿，把待測的血漿樣品送到黑龍江省大慶市東風(fēng)醫(yī)院去檢測血漿當(dāng)中硒的含量，其余的－20℃保存待測。

1.3.3 切片、染色、鏡檢 選擇有代表性的病變部位若干個組織塊，混合固定液固定，常規(guī)石蠟切片，H．E．染色光學(xué)顯微鏡檢查。

1.3.4 病理組織切片的制作 (1)固定:病變組織塊置于混合固定液溶液中12 h過夜;(2)水洗:取修好的組織塊用流水沖洗0.5 h;(3)脫水:70%乙醇1 h→75%乙醇1 h→80%乙醇1 h→85%乙醇1 h→90%乙醇1 h→95%乙醇1 h→無水乙醇(Ⅰ)45 min→無水乙醇(Ⅱ)40 min;(4)脫酒精:混合液(無水乙醇∶松節(jié)油=1∶1)30 min;(5)透明松節(jié)油(1)30 min、松節(jié)油(II)30 min;(6)浸蠟:52℃ ～54℃ 60 min ，54℃ ～56℃ 60 min，56℃ ～58℃ 30 min;(7)包埋;(8)切塊:修塊，粘塊;(9)切片:烤片。

1.3.5 H.E.染色 (1)脫蠟至水:松節(jié)油(Ⅰ)1～2 min→松節(jié)油(Ⅱ)1～2 min→無水乙醇1～2 min→90%乙醇1～2 min→80%乙醇1～2 min→70%乙醇1～2 min;(2)染色:Harris蘇木素染液15 min→自來水沖洗10 min→1%鹽酸乙醇分化30 s→自來水洗數(shù)秒→飽和碳酸鋰30 s→蒸餾水水洗數(shù)秒→伊紅15 min;(3)脫水、透明和封固:75%乙醇1～2 min→80%乙醇1～2 min→90%乙醇1～2 min→無水乙醇(Ⅰ)1～2 min→無水乙醇(Ⅱ)1～2 min→松節(jié)油(Ⅰ)1～2 min→松節(jié)油(Ⅱ)1～2 min→中性樹膠封固。

2 結(jié)果

2.1 豬場調(diào)查 對豬場的飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生進行了調(diào)查，飼養(yǎng)管理無不當(dāng)之處，環(huán)境衛(wèi)生合格，了解到近半個月內(nèi)換用了一批飼料。

2.2 實驗室診斷 仔豬的心臟和肝臟分別在普通瓊脂培養(yǎng)基和鮮血瓊脂培養(yǎng)基上接種，37℃恒溫箱培養(yǎng)24 h，未見病原菌。提取十二指腸，小腸分離純化后的細(xì)菌DNA經(jīng)PCR檢測未見致豬水腫病的陽性條帶。對豬的血液進行了硒含量的測定，每毫升血液當(dāng)中硒的含量0.018 mg。

2.3 病理變化

2.3.1 剖檢病理變化 肌肉顏色淡，肉中還有白色斑點，肌肉組織干燥、混濁，切面粗糙、不平，夾有點狀或條狀出血(見封三彩版圖1、2)。

2.3.2 鏡檢病理變化 肌肉結(jié)構(gòu)紊亂(見封三彩版圖3);肌纖維間脂肪組織增多，脂肪浸潤(見封三彩版圖4);肌纖維結(jié)構(gòu)紊亂，細(xì)胞內(nèi)有空泡，間質(zhì)有炎性細(xì)胞浸潤(見封三彩版圖5);血管內(nèi)有炎性細(xì)胞(見封三彩版圖6);肌纖維結(jié)構(gòu)紊亂(見封三彩版圖7、圖8)。

本病例肌肉的病理學(xué)特點是肌肉結(jié)構(gòu)紊亂，有變性、壞死，間質(zhì)有炎性細(xì)胞浸潤。結(jié)合豬場調(diào)查分析和沒有病原菌的情況和血液當(dāng)中硒的含量，本病例診斷為白肌病。

3 討論

通過對寶泉嶺管局某豬場送檢2頭60日齡的病豬進行流行病學(xué)調(diào)查、臨床檢查和病理剖檢，初步懷疑是豬白肌病和豬水腫。但病理剖檢情況復(fù)雜，無法確診。然后通過實驗室診斷確診為豬白肌病。白肌病發(fā)病日齡多發(fā)1～4月齡仔豬多發(fā)，最早可發(fā)生于胚胎時期，造成母豬早產(chǎn)，死產(chǎn)及流產(chǎn)。在胎兒發(fā)育過程中，尤其后期胎兒發(fā)育迅速，由于營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，導(dǎo)致營養(yǎng)失調(diào)而發(fā)生本病。

豬白肌病是嚴(yán)重缺硒和維生素E引起的營養(yǎng)代謝性疾?。?］，這是由于當(dāng)機體缺乏硒和維生素E，硒能催化過氧化物的損害，維生素E可抑制過氧化脂質(zhì)的生成。當(dāng)兩者中任一個減少，使細(xì)胞受過氧化物的損害，破壞了細(xì)胞的完整性［3］，引發(fā)白肌病。豬水腫病是由產(chǎn)志賀毒素引起的一種腸毒血癥［4］，以腦部、腸系膜及胃壁漿液性水腫為主要特征。本病呈世界性分布，又名腸毒血癥，是一種烈性傳染病，病死率高，多發(fā)于斷奶仔豬。二者在臨床上很相似，主要在斷奶后體格強碩，且仔豬處于生長快速的發(fā)育階段;病豬具有正常體溫，但是眼瞼發(fā)生水腫，且四肢出現(xiàn)癱瘓現(xiàn)象或跋行現(xiàn)象。區(qū)別是豬水腫病主要在4～10周齡的斷奶仔豬容易發(fā)生，四肢麻痹，呈游泳劃動癥狀，同時出現(xiàn)空嚼現(xiàn)象和白色泡沫從口中流出現(xiàn)象，初期排尿減少，便秘。個別會發(fā)生腹瀉，而后期往往頭部發(fā)生水腫，但白肌病的患豬則沒有出現(xiàn)上述癥狀。通過剖檢發(fā)現(xiàn)，二者都會使病豬的胃部及腸系膜發(fā)生水腫，主要是在螺形結(jié)腸系膜、胃的賁門腺區(qū)及盲腸出現(xiàn)明顯的水腫，呈膠胨狀，同時在空腸和回腸內(nèi)有黑紅色糞便。而白肌病主要在胃的各處發(fā)生水腫，其中最為明顯的是大腸［5］。

我們對豬場的飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生進行了調(diào)查，得知該豬場飼養(yǎng)管理不當(dāng)，環(huán)境衛(wèi)生不合格，導(dǎo)致豬患白肌病。本病主要以硒制劑以及維生素E進行治療［5］，根據(jù)仔豬體重大小，每天注射1～3 mL亞硒酸鈉、維生素E，每天2次，連用3 d;為防止繼發(fā)感染，可肌肉注射慶大霉素或磺胺類藥物，對心力衰竭的可注射安鈉咖等強心劑;有神經(jīng)癥狀的可注射硫酸鎂等鎮(zhèn)靜藥物。預(yù)防本病，對妊娠后期母豬，應(yīng)補充維生素豐富的飼料。仔豬出生后7 d內(nèi)、斷奶時、斷奶后1個月各注射亞硒酸鈉1～2 mL，內(nèi)服維生素E 3～8 mL。

［1］ 楊玉蘭．豬礦物質(zhì)缺乏癥診斷與防治技術(shù)［J］．農(nóng)技服務(wù)，2008，12:84-86．

［2］ 胡喜斌，楊玉平，羅守冬，等．犢牛白肌病的診斷與防治［J］．中國乳業(yè)，2013(2):39-40．

［3］ 李海英．王百川．丁偉言．一起非典型性豬心臟型白肌病的診斷與防治［J］，中國動物檢疫，2012，29(5):58-59．

［4］ 胡汐柔．黃芩注射液對豬水腫病的治療作用研究［D］．吉林:吉林大學(xué)，2014．

［5］ 韓良彩．豬白肌病的防治［J］．山西農(nóng)業(yè)，2002(2):44

［6］ 王魁成，馬希波，杜輝．豬白肌病的防治［J］，中國畜禽種業(yè)，2012(2):9．

S858．28

B

0529-6005(2017)06-0070-02

2016-11-10

孫光野(1992-)，男，碩士生，研究方向為動物營養(yǎng)代謝病，E-mail:940495242@qq．com

張洪友，E-mail:zhy_478@163．com