高效液相色譜法測定止汗靈顆粒中芍藥苷的含量

王建花

(南京市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)院，江蘇 南京 210000)

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高效液相色譜法測定止汗靈顆粒中芍藥苷的含量

王建花*

(南京市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)院，江蘇 南京 210000)

目的：建立高效液相色譜法測定止汗靈顆粒中芍藥苷含量的方法。方法：色譜柱為Agilent Eclipse Plus-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸(V∶V=17∶83)溶液，流速1 ml/min，檢測波長230 nm，柱溫30 ℃。結(jié)果：芍藥苷峰面積在7.672～153.400 μg/ml(r=0.999 9)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為98.34%，RSD為1.4%。結(jié)論：本研究方法專屬性、重復(fù)性好，可用于止汗靈顆粒的質(zhì)量控制。

止汗靈顆粒； 芍藥苷； 高效液相色譜

止汗靈顆粒是南京某醫(yī)院制劑，由黃芪、白術(shù)、防風(fēng)、太子參、桂枝、白芍等組成，具有益氣養(yǎng)陰，調(diào)和營衛(wèi)，固表止汗的作用，用于小孩多汗癥[1-2]。芍藥苷是方中白芍的主要有效成分[3-4]。目前該制劑現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未進(jìn)行質(zhì)量控制。故本研究采用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)[5-7]測定止汗靈顆粒中芍藥苷的含量[8-11]，為該制劑的質(zhì)量評價(jià)提供一定的參考。

1 材料

1.1 儀器

島津SPD-20A型高效液相色譜儀(日本)，Sartorius CPA225D型分析天平(瑞士賽多利斯公司)。

1.2 試劑

芍藥苷對照品(批號(hào)：110736-201539，含量96.4%，來自中國食品藥品檢定研究院，無需干燥)；乙腈為色譜純[12]，水為超純水，其他為分析純[13]。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的配制

2.1.1 對照品溶液：精密稱取芍藥苷適量，加稀乙醇制成1 ml含0.767 2 mg的溶液，作為對照品貯備液。精密量取貯備液5 ml置于50 ml容量瓶中，搖勻，即得對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液：精密稱取止汗靈顆粒10 g置于錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 ml，稱質(zhì)量，超聲處理30 min，用稀乙醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，用0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性

色譜柱為Agilent Eclipse Plus-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)[14-15]，柱溫30 ℃，流動(dòng)相：乙腈 -0.1%磷酸(V∶V=17∶83)，流速1.0 ml/min。參考《中華人民共和國藥典·一部》(2015年版)[16]，選擇檢測波長230 nm。取對照品溶液和供試品溶液各10 μl，供試品中芍藥苷主峰與其他組分分離良好，無明顯干擾，見圖1。

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下對照品貯備液適量，加稀乙醇配成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度依次為7.672、38.360、76.720、115.100、153.400 μg/ml。分別進(jìn)樣10 μl，以濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明芍藥苷在7.672～153.400 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其回歸方程為Y=14 052X-14 148(r=0.999 9)。

2.4 精密度考察

精密吸取對照品溶液(76.720 μg/ml)10 μl，按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD=0.6%(n=6)，表明本方法精密度良好。

2.5 重復(fù)性考察

平行制備6份供試品溶液(批號(hào)：1508003)，分別進(jìn)樣10 μl，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄主峰峰面積，平均1 g中芍藥苷平均含量為0.521 6 mg，RSD為1.0%(n=6)，表明本方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性考察

按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液(批號(hào)：1508003)，分別于放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)進(jìn)行測定，考察主峰峰面積，結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD為1.1%(n=6)，表明供試品溶液在制備后24 h內(nèi)較穩(wěn)定。

A.對照品溶液；B.供試品溶液A. reference solution; B. test solution圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatogram

2.7 準(zhǔn)確度考察

精密吸取6份已知含量的止汗靈顆粒5 g，置于錐形瓶中，精密加入對照品儲(chǔ)備溶液適量，分別加入6份供試品中， 分別精密加稀乙醇補(bǔ)足到50 ml，搖勻，稱質(zhì)量，超聲30 min，放冷，用稀乙醇補(bǔ)足減失質(zhì)量。以0.22 μm微孔濾膜濾過，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果表明本方法準(zhǔn)確度較好，見表1。

表1 加樣回收率測定結(jié)果
Tab 1 Results of recovery test

樣品稱樣量/g已知量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%5 01062 61352 68525 245498 015 11142 66612 68525 3762100 935 13962 68082 68525 304497 715 20712 71602 68525 340397 735 00432 61022 68525 256698 555 10152 66092 68525 269397 1498 341 4

2.8 樣品含量測定

取3批次供試品(批號(hào)：1508001、1508002、1508003)，按“2.1.2”項(xiàng)下制備，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算含量。結(jié)果芍藥苷含量分別為0.521 8、0.520 3、0.519 2 mg/g。

3 討論

止汗靈顆粒的原質(zhì)量檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中只有鑒別和檢查項(xiàng)的內(nèi)容，缺乏含量測定項(xiàng)，缺少控制其主藥含量測定的內(nèi)容，存在一定的安全隱患。本方法經(jīng)方法學(xué)考察，準(zhǔn)確度高、精密度好、穩(wěn)定性佳、簡單易行，可考慮在后續(xù)的標(biāo)準(zhǔn)修訂過程中，逐步增加含量測定項(xiàng)，并通過建立含量測定的上下限范圍，進(jìn)一步提高該試劑的安全性、有效性和均一性。

本研究分別考察了甲醇-水(V∶V=25 ∶75)、乙腈-水(V∶V=17 ∶83)、乙腈-0.1%磷酸(V∶V=17 ∶83)作為流動(dòng)相，稀乙醇、50%甲醇、純甲醇作為提取溶劑。結(jié)果顯示，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸(V∶V=17 ∶83)，提取溶劑為稀乙醇時(shí)，峰型最優(yōu)，雜質(zhì)較少，主峰與相鄰雜質(zhì)峰分離度符合要求。

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Content Determination of Paeoniflorin in Zhihanling Granules by HPLC

WANG Jianhua
(Nanjing Supervision and Inspection Institute for Food and Drug Control, Jiangsu Nanjing 210000, China)

OBJECTIVE：To establish the method of content determination of paeoniflorin in Zhihanling granules by HPLC. METHODS: The separation was performed on a Agilent Eclipse Plus-C18column(250 mm× 4.6mm,5 μm)with acetonitrile-0.l% phosphate(V∶V=17∶83)as mobile phase. The flow rate was 1.0 ml/min, the detection wavelength was 230nm, the column temperature was 30 ℃. RESULTS: The liner arrange for paeoniflorin was 7.672-153.400 μg/ml (r=0.999 9). The average recovery of paeoniflorin was 98.34% with 1.4%RSDof precision. CONCLUSIONS: The method is simple, accurate, sensitive with good reproducibility in analyzing the paeoniflorin in Zhihanling granules which can be used for the quality control.

Zhihanling granules; Paeoniflorin; HPLC

R927.2

A

1672-2124(2016)12-1678-02

2016-08-15)

*主管藥師。研究方向：中藥學(xué)顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢測及研究。E-mail：460999937@qq.com

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2016.12.036