原花青素對(duì)D-半乳糖致衰老大鼠小腦組織中IL-6和TNF-α水平的影響

宋 凌

商丘醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校 商丘 476100

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原花青素對(duì)D-半乳糖致衰老大鼠小腦組織中IL-6和TNF-α水平的影響

宋 凌

商丘醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校 商丘 476100

目的 探討原花青素(PC)對(duì)D-半乳糖致衰老大鼠小腦組織中白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平的影響。方法 50只健康6月齡雄性Wistar大鼠隨機(jī)均分為陰性對(duì)照組、衰老模型組、維生素E(VE)組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組，每組10只，分別給予相應(yīng)處理后，采用ELISA測定各組大鼠小腦組織中IL-6、TNF-α水平。結(jié)果 VE組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組IL-6、TNF-α水平均低于衰老模型組(P<0.05)；PC 160 mg/kg組與VE組的IL-6、TNF-α水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)；PC 80 mg/kg組SOD、GSH-Px水平高于VE組、PC 160 mg/kg組(P<0.05)。結(jié)論 PC可能通過改善免疫功能而延緩大鼠小腦組織的衰老。

原花青素；衰老大鼠；小腦；白介素-6；腫瘤壞死因子-α

原花青素(proanthocyanidins，PC)是一種生物類黃酮，具有明顯的抗氧化、抗炎及抗腫瘤等作用[1-2]，但PC改變衰老大鼠小腦相關(guān)免疫反應(yīng)指標(biāo)的研究尚無報(bào)道。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)測定D-半乳糖至衰老大鼠小腦組織中白介素-6(interleukin-6，IL-6)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)水平，觀察原花青素對(duì)衰老大鼠小腦免疫功能的改變作用。

1 材料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 50只健康6月齡雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量309～347 g，購自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，采用數(shù)字表法隨機(jī)均分為5組：陰性對(duì)照組、衰老模型組、VE組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組。

1．2 主要藥品、試劑及儀器 PC(安陽晶森天然產(chǎn)物有限公司，批號(hào)：12024129)；維生素E(vitamin E，VE)注射劑(上海通用藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：120112)；IL-6、TNF-α ELISA試劑盒(批號(hào)分別為：20120820、20120902，美國Peprotech公司)；全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀(北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司)。

1．3 給藥方法 陰性對(duì)照組：皮下注射3.0 mL/kg的0.85% NaCl溶液；衰老模型組：皮下注射15% D-半乳糖1.5 mL/kg和0.85% NaCl溶液1.5 mL/kg；VE組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組：皮下注射15% D-半乳糖1.5 mL/kg和相應(yīng)濃度的藥物1.5 mL/kg。1次/d，連用12周。

1．4 標(biāo)本采集及指標(biāo)測定 標(biāo)本采集：各組大鼠于末次給藥1 h后，用1%戊巴比妥鈉(0.4 mL/kg)腹腔注射麻醉，快速常規(guī)取出小腦，4 ℃ 0.85% NaCl溶液沖洗，濾紙吸干，置于-80 ℃冰箱內(nèi)保存。指標(biāo)測定：取適量小腦組織，稱重，制勻漿，4 ℃、3 500 r/min離心10 min，取上清液，并按試劑盒說明書檢測TNF-α、IL-6水平。

2 結(jié)果

衰老模型組IL-6、TNF-α水平高于陰性對(duì)照組(P<0.001)；VE組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組IL-6、TNF-α水平均低于衰老模型組(P<0.05)；PC 160 mg/kg組與VE組的IL-6、TNF-α水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；PC 80 mg/kg組SOD、GSH-Px水平高于VE組、PC 160 mg/kg組(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠小腦組織中IL-6、TNF-α 水平比較

注：與陰性對(duì)照組比較，1)P<0.05；與衰老模型組比較，2)P<0.05；與VE組比較，3)P<0.05；與PC 160 mg/kg組比較，4)P<0.05

3 討論

免疫反應(yīng)已被證實(shí)廣泛存在于衰老這一病理生理過程中，且大量免疫因子在衰老的進(jìn)展過程中發(fā)揮著重要作用[3]。隨著免疫學(xué)和衰老相關(guān)機(jī)制研究的進(jìn)展，原來越多的研究認(rèn)為，免疫功能隨著衰老的進(jìn)展逐漸下降，而免疫功能的改變?cè)谒ダ线^程中具有重要地位，通過提高機(jī)體的免疫功能能夠延緩衰老的進(jìn)展[3-4]。D-半乳糖是目前衰老機(jī)制研究中最常用的造衰老藥物，具有縮短實(shí)驗(yàn)周期、造模成功率高、致衰老機(jī)制明確等優(yōu)點(diǎn)，因此，本實(shí)驗(yàn)選擇該模型進(jìn)行研究。IL-6是一種免疫調(diào)節(jié)因子，主要來自T、B淋巴細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞，正常機(jī)體內(nèi)有一定程度的表達(dá)，且在維持機(jī)體的正常免疫功能和神經(jīng)內(nèi)分泌功能等生物學(xué)行為中發(fā)揮作用，而異常高水平的IL-6則會(huì)導(dǎo)致機(jī)體免疫和神經(jīng)內(nèi)分泌功能的紊亂，已被證實(shí)其參與了機(jī)體的缺血再灌注損傷、衰老、心肌梗死等病理生理過程[5-6]。TNF-α是一種由T淋巴細(xì)胞和活化性巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫以及參與衰老、腫瘤進(jìn)展等病理生理過程的多重作用。在機(jī)體衰老過程中，TNF-α能夠通過結(jié)合其受體而通過多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑導(dǎo)致機(jī)體自由基過生、細(xì)胞凋亡增加等，從而造成機(jī)體的衰老[3，6]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，衰老模型組IL-6、TNF-α水平高于陰性對(duì)照組(P<0.001)，提示D-半乳糖造模成功，IL-6、TNF-α參與了機(jī)體的衰老；VE組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組IL-6、TNF-α水平低于衰老模型組，說明PC能夠增強(qiáng)衰老大鼠小腦組織的免疫功能；PC 160 mg/kg組與VE組的IL-6、TNF-α水平相近，說明一定量的PC能夠達(dá)到VE一樣的增強(qiáng)大鼠免疫功能作用；PC 80 mg/kg組IL-6、TNF-α水平高于VE組、PC 160 mg/kg組，提示PC的作用可能具有一定的劑量依賴性，PC劑量越高，對(duì)免疫作用的增強(qiáng)越明顯。總之，PC可能通過改善免疫功能而延緩大鼠小腦組織的衰老；PC的抗衰老作用可能有一定的劑量依賴性。

[1] 宋強(qiáng)，羅蘭，楊拯，等．原花青素抗氧化應(yīng)激效應(yīng)對(duì)大鼠肢體缺血再灌注后腸黏膜的保護(hù)作用[J]．世界華人消化雜志，2015，23(9)：1 454-1 459．

[2] 鐘越，齊玲，任曠，等．越桔原花青素通過線粒體通路誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[J]．中國藥學(xué)雜志，2015，50(6)：507-511．

[3] 周先云，潘朝旺．九龍蟲對(duì)衰老小鼠免疫功能的影響[J]．中國老年學(xué)雜志，2015，35(5)：1 331-1 333．

[4] Bektas A，Zhang Y，Lehmann E，et al．Age-associated changes in basal NF-κB function in human CD4+ T lymphocytes via dysregulation of PI3 kinase[J]．Aging(Albany NY)，2014，6(11)：957-974．

[5] 楊東斌．原花青素對(duì)大鼠腦缺血再灌注腦損傷IL-6和ET-1的影響[J]．中國實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2013，16(9)：44-45．

[6] 鄭世鐸，楊世彰，段永強(qiáng)，等．抗衰益智膠囊對(duì)衰老大鼠腦組織三磷酸腺苷酶活性和血清白細(xì)胞介素-6、腫瘤壞死因子-α的影響[J]．中國中醫(yī)藥信息雜志，2014，21(7)：40-42．

(收稿2016-03-07)

Effects of proanthocyanidins on IL-6 and TNF-α in the cerebellum of the aged rat induced by D-galactose

SongLing

ShangqiuMedicalCollege，Shangqiu476100，China

Objective To investigate the effects of proanthocyanidins(PC)on the levels of interleukin-6(IL-6)and tumor necrosis factor-α(TNF-α)in the cerebellum of the aged rat induced by D-galactose.Methods Fifty healthy male Wistar rats which were 6 months were divided into 5 groups at random：the negative control group，the aged model group，the vitamin E(VE)group，the PC 160 mg/kg group and the PC 80 mg/kg group，and each group had 10 rats.After the commensurate handling for rats in the five groups，ELISA method was used to detect the levels of IL-6 and TNF-α in the cerebellum of rats in the 5 groups.Results Compared with the aged model group，the levels of IL-6 and TNF-α were lower in the cerebellum of rats in the VE group，the PC 160 mg/kg group and the PC 80 mg/kg group(P<0.05).There was no significant difference in the levels of IL-6 and TNF-α in the cerebellum of rats between the PC 160 mg/kg group and the VE group(P>0.05).Compared with the PC 160 mg/kg group and the VE group，the levels of IL-6 and TNF-α were higher in the cerebellum of rats in the PC 80 mg/kg group(P<0.05).Conclusion PC can reduce the immune function，and delay the aging of cerebellum of rats．

Proanthocyanidins；Aged rats；Cerebellum；Interleukin-6；Tumor necrosis factor-α

R-332

A

1673-5110(2016)24-0041-02