貓病毒性鼻氣管炎診斷與防治研究進(jìn)展

牛江婷 ， 伊淑帥 ， 王 開 ， 董 浩 ， 王軍政 ， 邵洪澤 ， 趙艷麗 ， 董國英 ， 胡桂學(xué)

(1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 ， 吉林 長春 130118 ； 2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院 ， 吉林 長春 130118 ；3.吉林省畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究院 ， 吉林 長春 130062 ； 4.北京師范大學(xué)全球變化與地球系統(tǒng)科學(xué)研究院 ， 北京 海淀 100875)

貓病毒性鼻氣管炎診斷與防治研究進(jìn)展

牛江婷1， 伊淑帥1， 王 開1， 董 浩2， 王軍政1， 邵洪澤3， 趙艷麗1， 董國英4， 胡桂學(xué)1

(1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 ， 吉林 長春 130118 ； 2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院 ， 吉林 長春 130118 ；3.吉林省畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究院 ， 吉林 長春 130062 ； 4.北京師范大學(xué)全球變化與地球系統(tǒng)科學(xué)研究院 ， 北京 海淀 100875)

貓病毒性鼻氣管炎(Felineviralrhinotracheitis, FVRs)，又稱貓傳染性鼻氣管炎，是由貓皰疹病毒1型(Felineherpesvirustype1, FHV-1)引起的一種以上呼吸道感染和角膜結(jié)膜炎為主要特征的呼吸系統(tǒng)病毒病。FHV-1具有高度的種屬特異性，只感染貓科動物，呈全球性分布，在一些地區(qū)貓群中發(fā)病率可達(dá)97%以上，嚴(yán)重影響著寵物貓及野生貓科動物的健康[1]。FVRs多發(fā)生于2～4月齡幼貓，自然感染潛伏期為2～6 d，感染幼貓主要表現(xiàn)為流涎、咳嗽、打噴嚏、鼻腔黏稠狀分泌物等上呼吸道癥狀以及結(jié)膜炎、角膜樹枝狀潰瘍、慢性間質(zhì)性角膜炎等眼部臨床癥狀，發(fā)病率為100%，幼貓病死率可達(dá)50%[2]。感染貓康復(fù)后，F(xiàn)HV-1潛伏于三叉神經(jīng)、視神經(jīng)以及扁桃體內(nèi)，造成持續(xù)性感染和潛伏性感染，機體免疫力低下時可再活化引起復(fù)發(fā)性疾病，給該病的診斷與防治造成了困難[2-3]。

近年來，隨著人類生活水平的提高，寵物貓已逐漸成為人類的精神伴侶，寵物健康也逐漸成為世界寵物行業(yè)關(guān)注的熱點問題。由于FVRs具有混合感染、感染后終身帶毒、潛伏性感染、臨床癥狀復(fù)雜等特點，F(xiàn)VRs的診斷與防治已成為寵物臨床的熱點與難點。本文對FVRs診斷方法與防治措施進(jìn)行了闡述，旨在為寵物臨床中FVRs診斷及防治的進(jìn)一步研究提供理論參考。

1 貓病毒性鼻氣管炎診斷方法

FHV-1感染后的急性發(fā)病期，眼、鼻分泌物攜帶大量的病毒，采用實驗室診斷方法很容易檢測到病毒的存在，但急性發(fā)病期患病貓往往表現(xiàn)出特異性臨床癥狀，如結(jié)膜炎、角膜樹枝狀潰瘍以及FVRs的示病癥狀-皰疹性角膜炎等，往往無需進(jìn)一步診斷便可確診。相比之下，F(xiàn)HV-1潛伏感染或慢性感染所表現(xiàn)出的臨床癥狀相對復(fù)雜，需要進(jìn)一步診斷。此外，F(xiàn)HV-1與貓杯狀病毒(Felinecalicivirus, FCV)、鸚鵡熱衣原體引起的上呼吸道炎癥臨床表現(xiàn)相似，極易混淆，引起誤診。因此，建立系統(tǒng)的FVRs診斷方法是確保有效治療的關(guān)鍵。目前，常用的FHV-1診斷方法包括病毒的分離、免疫熒光、中和試驗、血凝試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗以及PCR檢測等[4]。

1.1 病毒的分離鑒定 α-皰疹病毒一直以來都以病毒的分離作為診斷的黃金標(biāo)準(zhǔn)，因為該病毒在細(xì)胞內(nèi)能迅速復(fù)制并產(chǎn)生典型的細(xì)胞病變。FHV-1急性感染采集眼、咽拭子，慢性感染或潛伏感染采集結(jié)膜、角膜刮取物，處理后接種F81細(xì)胞，接種2 d后出現(xiàn)典型的細(xì)胞病變，表現(xiàn)為細(xì)胞灶狀圓縮、形成合胞體、出現(xiàn)多核巨細(xì)胞[5]。病毒分離后常采用電鏡負(fù)染進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，鏡下FHV-1病毒粒子為球形，直徑為140～160 nm，有囊膜，囊膜表面附有纖突[5-7]。病毒分離雖能準(zhǔn)確診斷出FHV-1感染，但FHV-1環(huán)境抵抗力弱，運輸過程中極易造成病毒的失活，此外病毒分離相對耗時，臨床上一般不建議使用病毒的分離進(jìn)行診斷。

1.2 血清學(xué)診斷 血清學(xué)診斷方法主要包括免疫熒光試驗(FA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、中和試驗以及血凝-血凝抑制試驗(HA-HI)。

免疫熒光試驗是國外寵物診療機構(gòu)診斷FHV-1感染的常用方法。用于FA檢測的臨床樣本多為患病貓角膜、結(jié)膜刮取物以及活體組織切片，處理后與熒光素標(biāo)記的抗體相結(jié)合，通過熒光顯微鏡下觀察特異性熒光進(jìn)行診斷[8]。免疫熒光試驗具有敏感性低的缺點，僅能診斷急性感染期的患病貓，對于自發(fā)慢性感染的貓群檢測成功率較低，限制了其在臨床診斷中的應(yīng)用[9]。

酶聯(lián)免疫吸附試驗是依據(jù)可溶性抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過酶標(biāo)顯色進(jìn)行抗原或抗體的檢測，是經(jīng)典的血清學(xué)診斷方法。王吉、張曉明等建立的FHV-1抗體ELISA檢測方法，與國外試劑盒相比，檢測符合率為95%～96. 8%，可用于寵物貓及野生貓科動物FVRs血清學(xué)調(diào)查[10-11]。雖然ELISA方法可以檢測FHV-1血清抗體，但并不能區(qū)分疫苗毒或野毒感染產(chǎn)生的抗體，與免疫熒光、病毒分離診斷結(jié)果缺乏相關(guān)性，僅限于FHV-1血清學(xué)調(diào)查。

中和試驗可用于FHV-1抗體效價的檢測。由于FHV-1原發(fā)感染時機體的抗體滴度較低，復(fù)發(fā)感染后血清抗體滴度大幅度升高。中和試驗檢測的抗體效價與患病貓臨床表現(xiàn)無關(guān)。因此，一般不采用中和試驗進(jìn)行診斷。

FHV-1可以凝集貓的紅細(xì)胞，可通過血凝-血凝抑制試驗檢測FHV-1感染情況。但是，目前對于FHV-1血凝性仍存在爭議，未建立系統(tǒng)的HA-HI診斷方法。

總之，血清學(xué)方法用于FHV-1的診斷尚有欠缺，但是可以用于血清學(xué)調(diào)查、免疫學(xué)研究以及疫苗效果的評價，為預(yù)測FHV-1免疫現(xiàn)狀奠定基礎(chǔ)。

1.3 分子生物學(xué)診斷技術(shù) 目前，分子生物學(xué)診斷技術(shù)已成為FHV-1實驗室診斷的主要標(biāo)準(zhǔn)，主要包括普通PCR、巢氏PCR、實時熒光定量PCR技術(shù)等。大多數(shù)PCR方法的建立均是依據(jù)FHV-1的高度保守序列-胸苷激酶(Thymidine kinase, TK)基因。Sykes等建立了貓上呼吸道感染病原FHV-1、FCV、鸚鵡熱衣原體多重PCR/RT-PCR方法[12]，該方法針對FHV-1 TK基因設(shè)計的鑒定引物Herp-F/Herp-R，已成為FHV-1鑒定的通用引物，用于大量FHV-1的鑒定研究[12]。王吉等根據(jù)FHV-1 TK基因建立了FHV-1 PCR檢測方法，可檢測的最低DNA濃度為1.46×102拷貝/mL，具有特異、敏感、穩(wěn)定的特點[13]。Hara等依據(jù)TK基因建立的FHV-1巢氏PCR方法顯著提高了眼、鼻以及咽拭子中FHV-1的檢出準(zhǔn)確率，適用于隱性感染或慢性感染貓F(tuán)HV-1的PCR診斷[14]。Vogtlin等設(shè)計了TK基因特異引物與TaqMan探針，建立了FHV-1的實時定量熒光PCR方法，檢測靈敏度可達(dá)到10拷貝/μl，該方法適用于臨床FHV-1的快速定量檢測[15]。

分子生物學(xué)診斷技術(shù)具有敏感特異、簡便省時等優(yōu)點，可用于FHV-1快速診斷。但是，F(xiàn)HV-1潛伏感染期，眼分泌物內(nèi)的病毒載量極低，采用普通PCR的方法無法做出診斷。英國寵物診療實驗室建議使用普通PCR與實時定量熒光PCR兩種方法作為FHV-1診斷的依據(jù)[1]。此外，現(xiàn)有的PCR方法無法區(qū)分疫苗毒與野毒感染，容易造成假陽性的判斷。因此，建立一種可區(qū)分疫苗毒及野毒的PCR方法對FHV-1的臨床診斷意義重大。

2 貓病毒性鼻氣管炎防治措施

2.1 疫苗免疫 FVRs的預(yù)防措施主要包括保持環(huán)境衛(wèi)生、規(guī)范飼養(yǎng)、患病貓隔離及疫苗免疫等，其中，疫苗接種是最有效的預(yù)防措施。疫苗接種后，可以刺激機體產(chǎn)生高水平的特異性抗體，作用于FHV-1，從而降低三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)潛伏病毒的病毒載量。目前，適用于寵物臨床的FHV-1疫苗主要包括滅活疫苗與改良弱毒疫苗[9]。貓鼻氣管炎-嵌杯病毒病-泛白細(xì)胞減少癥三聯(lián)滅活疫苗(商品名：妙三多)是使用范圍最廣、效果較顯著的疫苗之一，免疫程序為8周齡時首免，10～12周齡進(jìn)行二免。國內(nèi)外也已經(jīng)有改良弱毒疫苗投入臨床使用，主要包括FHV-1弱毒疫苗，與FCV組合的二聯(lián)苗等[1]。雖然弱毒疫苗可以誘導(dǎo)機體產(chǎn)生更高的抗體水平，但疫苗毒會造成接種貓F(tuán)HV-1潛伏感染，并引起復(fù)發(fā)疾病。此外，弱毒疫苗的核酸干擾也對FHV-1野毒感染的診斷造成了困難。因此，基因缺失疫苗的研發(fā)將會成為解決這一問題的關(guān)鍵。

2.2 治療方法 FHV-1感染后主要引起上呼吸道感染與眼部疾病，眼部疾病是FVRs治療的主要方向，需要根據(jù)感染階段、臨床癥狀選擇最佳的治療方案。幼貓原發(fā)感染的急性發(fā)病期，眼部、上呼吸道癥狀明顯，多表現(xiàn)為口鼻潰瘍、結(jié)膜炎以及角膜潰瘍，需要使用抗病毒藥物進(jìn)行局部或系統(tǒng)的治療，同時使用抗菌藥物預(yù)防細(xì)菌的繼發(fā)感染或并發(fā)感染。癥狀嚴(yán)重不能進(jìn)食的貓，需配以支持療法，進(jìn)行腸胃外飼或者流食飼喂?？祻?fù)貓復(fù)發(fā)感染后多表現(xiàn)為角膜炎、結(jié)膜炎，采用局部抗病毒藥物進(jìn)行治療。對于患慢性間質(zhì)性角膜炎的貓，理論上應(yīng)采用皮質(zhì)類固醇類抗炎藥物以及免疫抑制藥物進(jìn)行治療，但均會導(dǎo)致潛伏FHV-1的復(fù)發(fā)感染，限制了藥物的治療。目前，常采用局部皮質(zhì)類固醇藥物配合預(yù)防性抗病毒藥物進(jìn)行治療，并取得了一定的效果。

對抗FHV-1的抗病毒藥物主要包括DNA類似物、三氟胸苷、夏昔洛韋、阿普洛韋等[1, 9]。其中，三氟胸苷是針對FHV-1感染最有效的抗病毒藥物，阿普洛韋是最常使用的局部抗病毒藥物[16]。但是，由于價格昂貴以及缺乏臨床應(yīng)用報告，限制了抗病毒藥物的使用，使其僅停留在試驗治療階段。

干擾素作為一種廣譜的抗病毒藥物，也常用于治療FHV-1的感染，主要包括重組人α-干擾素與貓ω-干擾素。但是，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)口服干擾素對貓局部癥狀無效的，干擾素配合抗病毒化學(xué)藥物僅能增強藥物的抗病毒活性[17]。因此，需要進(jìn)行更多的臨床治療試驗進(jìn)一步證明干擾素的抗病毒活性。

食源性L-賴氨酸也是一種常用于治療FHV-1感染的藥物。體外試驗證明，在低精氨酸條件下，高劑量的L-賴氨酸會顯著抑制病毒的復(fù)制[18]。但是，Sebastiaan等[19]研究發(fā)現(xiàn)，使用食源性L-賴氨酸治療FHV-1患病貓并不能得到顯著的治療效果，反而會導(dǎo)致跟嚴(yán)重的臨床癥狀與更高水平的FHV-1病毒檢出率，具體機制仍需進(jìn)一步證明。

益生菌、益生元的使用也可在一定水平上延緩病毒發(fā)病進(jìn)程。研究證明，F(xiàn)HV-1感染貓口服益生糞腸球菌SF68可以減輕感染貓臨床癥狀，同時可以抑制慢性FHV-1的復(fù)發(fā)感染，減少發(fā)病率[20]。

3 展望

雖然FHV-1是一種非烈性傳染病，但對寵物貓及野生貓科動物的健康存在嚴(yán)重威脅，其潛伏感染與復(fù)發(fā)感染的特點對該病的診斷與防治帶來了困難。目前，該病的診斷與防治措施正逐漸完善，但鑒于各種診斷方法、疫苗、治療藥物的局限性，仍需通過更多的臨床研究進(jìn)一步補充。如FHV-1膠體金快速檢測試紙、單克隆抗體、免疫球蛋白等仍是寵物臨床的空白，大大限制了FHV-1的診斷與防治。相信隨著科技水平的不斷提高與寵物福利的不斷重視，F(xiàn)HV-1診治的空白將會不斷被充實。

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S852.65

A

0529-6005(2017)09-0073-03

2016-11-17

國家重點研發(fā)計劃(2016YFD0501002)

牛江婷(1992-)，女，碩士生，主要從事動物病毒學(xué)研究，E-mail：NJT920226@163.com

胡桂學(xué)，E-mail：guixue1964@126.com