藥用植物中農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展Δ

殷玉潔，夏秀萍，毛福英，彭艷群，趙云生#（.寧夏醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，銀川 75000；2.寧夏回藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心，銀川 75000；3.寧夏回醫(yī)藥現(xiàn)代化省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，銀川 75000；.寧夏中醫(yī)研究院，銀川 75000）

·綜述講座·

藥用植物中農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展Δ

殷玉潔1，2，3＊，夏秀萍4，毛福英1，2，3，彭艷群1，趙云生1，2，3#（1.寧夏醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，銀川 750004；2.寧夏回藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心，銀川 750004；3.寧夏回醫(yī)藥現(xiàn)代化省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，銀川 750004；4.寧夏中醫(yī)研究院，銀川 750004）

目的：為加強(qiáng)對(duì)藥用植物中農(nóng)藥殘留檢測(cè)的相關(guān)研究及實(shí)踐提供參考。方法：檢索中國(guó)知網(wǎng)、SpringerLink、PubMed等數(shù)據(jù)庫中2005年以后發(fā)表的藥用植物中農(nóng)藥殘留檢測(cè)方面的研究文獻(xiàn)，進(jìn)行歸納和綜述。結(jié)果：藥用植物中農(nóng)藥殘留的種類包括有機(jī)氯類、有機(jī)磷類、擬除蟲菊酯類、氨基甲酸酯類等；農(nóng)藥污染途徑主要包括生長(zhǎng)環(huán)境污染、加工及貯藏施用農(nóng)藥污染、種植施用農(nóng)藥污染；進(jìn)行檢測(cè)前處理時(shí)，可選用乙酸乙酯、丙酮、乙腈和丙酮-石油醚等不同提取溶劑，提取方法主要有漂洗、勻漿、振蕩、超聲提取、索氏提取、微波輔助萃取法、快速溶劑萃取法、超臨界流體萃取法等，凈化方法主要有固相萃取法、固相微萃取法、凝膠滲透色譜法、基質(zhì)固相分散萃取法、逆流色譜法、二維氣相色譜法、磺化法等，富集濃縮方法主要有自然揮發(fā)法、真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法、吹氣法和免疫親和色譜法等；檢測(cè)技術(shù)包括色譜分析技術(shù)、免疫分析技術(shù)、生物傳感器分析技術(shù)和酶抑制技術(shù)等。結(jié)論：目前色譜法仍是藥用植物中農(nóng)藥殘留檢測(cè)的主流方法，但其在藥用植物大規(guī)模檢測(cè)或現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)中的應(yīng)用受到限制，開發(fā)出高效、快捷、可靠、靈敏、低成本的批量檢測(cè)方法是該領(lǐng)域的一個(gè)新的發(fā)展方向。

藥用植物；農(nóng)藥殘留；檢測(cè)技術(shù)

藥用植物是中藥產(chǎn)業(yè)得以存在、發(fā)展的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。近年來，世界各國(guó)對(duì)藥用植物的需求量日益增大，促進(jìn)了藥用植物栽培產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，同時(shí)也帶來了農(nóng)藥殘留等問題。目前，我國(guó)藥用植物出口國(guó)際市場(chǎng)占有率偏低，農(nóng)藥殘留量過高是一個(gè)重要原因[1]。我國(guó)的綠色藥材生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)銜接不理想，致使我國(guó)出口的藥用植物在歐美市場(chǎng)上多次因農(nóng)藥殘留超標(biāo)而被查扣，農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題已成為制約我國(guó)藥用植物走向國(guó)際市場(chǎng)的瓶頸。因此，加強(qiáng)對(duì)藥用植物中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)，對(duì)于提高我國(guó)的藥用植物品質(zhì)，提升其國(guó)際市場(chǎng)占有率具有重要意義。筆者通過檢索中國(guó)知網(wǎng)、SpringerLink、PubMed等數(shù)據(jù)庫中2005年以后發(fā)表的藥用植物中農(nóng)藥殘留檢測(cè)方面的研究文獻(xiàn)，進(jìn)行歸納和綜述，旨在為相關(guān)研究及實(shí)踐提供參考。

1 藥用植物中農(nóng)藥殘留的種類

農(nóng)藥殘留是指農(nóng)藥使用后殘存于藥用植物和環(huán)境中的有毒代謝物、農(nóng)藥原體、降解物等的總稱，根據(jù)理化性質(zhì)不同，農(nóng)藥殘留種類可分為有機(jī)氯類、有機(jī)磷類、擬除蟲菊酯類和氨基甲酸酯類等[2]。

1.1 有機(jī)氯類

有機(jī)氯類是較為常見的藥用植物農(nóng)藥殘留種類[3]。該類農(nóng)藥因其高效廣譜的殺蟲特點(diǎn)，曾被世界各國(guó)廣泛應(yīng)用，曾是使用量最大的殺蟲劑。有機(jī)氯類農(nóng)藥半衰期長(zhǎng)，不易降解、轉(zhuǎn)化，脂溶性強(qiáng)而水溶性小，在土壤中性質(zhì)穩(wěn)定，雖已禁用多年但仍在土壤、地下水中廣泛殘存，影響藥用植物生產(chǎn)。有機(jī)氯類農(nóng)藥易在人體脂肪內(nèi)蓄積，危害中樞神經(jīng)系統(tǒng)，引起慢性中毒，危害人體健康[4]。常見的有機(jī)氯類農(nóng)藥主要有六六六、滴滴涕、百菌清等。

1.2 有機(jī)磷類

有機(jī)磷類屬有機(jī)磷酸酯化合物，殺蟲譜廣，為一種神經(jīng)毒劑，殺蟲效果好，易降解，品種多，是目前用量最大的殺蟲劑，過量施用容易殘留在藥用植物葉、花、果實(shí)中，進(jìn)入人體后可抑制乙酰膽堿酯酶（AchE）活性，致使乙酰膽堿過量堆積，引起膽堿能神經(jīng)過度興奮，出現(xiàn)煙堿樣和中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，甚至引起死亡[5]。常見的有機(jī)磷類農(nóng)藥主要有樂果、對(duì)硫磷、敵敵畏、甲拌磷、甲胺磷等。

1.3 擬除蟲菊酯類

擬除蟲菊酯類農(nóng)藥具有殺蟲力強(qiáng)、生物降解性好、對(duì)環(huán)境影響小、毒性低等特點(diǎn)，是一類常用殺蟲劑，具有一定的毒性和蓄積性，長(zhǎng)期食用殘留有擬除蟲菊酯類的植物會(huì)導(dǎo)致人體慢性中毒，主要表現(xiàn)為神經(jīng)系統(tǒng)癥狀及皮膚癥狀，某些品種還有致癌、致畸、致突變等作用[6]。常見的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥主要有氯氰菊酯、溴氰菊酯、三氟氯氰菊酯、氰戊菊酯、甲氰菊酯等。

1.4 氨基甲酸酯類

與有機(jī)磷類農(nóng)藥類似，氨基甲酸酯類也是通過抑制AchE活性，引起乙酰膽堿蓄積，影響害蟲正常的神經(jīng)傳導(dǎo)而致其死亡，服用被該類農(nóng)藥污染的藥用植物可引起慢性中毒[7]。常見的氨基甲酸酯類農(nóng)藥主要有西維因、丙硫克百威、速滅威、滅多威、涕滅威、異索威等。

2 藥用植物農(nóng)藥污染的途徑

主要包括以下幾方面：（1）生長(zhǎng)環(huán)境污染。六六六、滴滴涕等有機(jī)氯類農(nóng)藥不易被破壞或分解而長(zhǎng)期殘留在土壤環(huán)境中，生長(zhǎng)在該類土壤中的藥用植物容易吸收并蓄積該類農(nóng)藥而被污染。（2）加工及貯藏施用農(nóng)藥污染。為防止生蟲變質(zhì)，藥用植物在加工、貯藏過程中因不合理施用農(nóng)藥而造成的污染。（3）種植施用農(nóng)藥污染。藥用植物在種植過程中因不合理施用農(nóng)藥，致使植物過量吸收或來不及降解就被采收而造成的污染[8]。

3 藥用植物中農(nóng)藥殘留檢測(cè)前處理技術(shù)

農(nóng)藥殘留檢測(cè)前處理技術(shù)是為最大限度地將殘留農(nóng)藥從藥用植物中提取出來，消除分析過程干擾，從而保障農(nóng)藥殘留成分的準(zhǔn)確檢測(cè)，主要涉及提取溶劑選擇、提取、凈化、富集濃縮等方面。

3.1 提取溶劑選擇

根據(jù)農(nóng)藥極性與“相似相溶”原理選擇合適提取溶劑，如有機(jī)氯類農(nóng)藥，極性較小，可選擇乙酸乙酯等極性小的提取溶劑；有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，極性較大，可選擇丙酮、乙腈等極性大的提取溶劑；擬除蟲菊酯類農(nóng)藥屬中等極性，可選擇丙酮-石油醚等混合提取溶劑。

3.2 提取

傳統(tǒng)方法主要包括漂洗、勻漿、振蕩、超聲提取、索氏提取等，前3種方法消耗溶劑多，提取效率低；索氏提取是農(nóng)藥殘留提取的經(jīng)典方法，但提取溫度高、耗時(shí)長(zhǎng)。近年來，微波輔助萃取法（MAE）[9]、快速溶劑萃取法（ASE）[10]、超臨界流體萃取法（SFE）[11]以及QuEChERS法（Quick easy cheap effective rugged safe）等新的提取方法憑借其安全、高效、耐用、廉價(jià)等特點(diǎn)，在藥用植物中農(nóng)藥殘留檢測(cè)領(lǐng)域得到越來越廣泛的應(yīng)用。

3.3 凈化

凈化是農(nóng)藥殘留檢測(cè)前處理的核心，液-液分配法和柱層析法是目前國(guó)內(nèi)常用的凈化方法，簡(jiǎn)便易行，不需昂貴的設(shè)備和試劑，但有機(jī)溶劑用量大，易形成乳狀液。近年來，固相萃取法（SPE）、固相微萃取法（SPME）、凝膠滲透色譜法（GPC）、基質(zhì)固相分散萃取法（MSPDE）、逆流色譜法（CCC）、二維氣相色譜法（GCGC）、磺化法等一些新的凈化方法已被用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)前處理中。

3.4 富集濃縮

自然揮發(fā)法、真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法、吹氣法等是富集濃縮的傳統(tǒng)方法，效率較低。免疫親和色譜法（IAC）將色譜分析與免疫反應(yīng)相結(jié)合，把抗體固定在支持物上，利用抗體與抗原或半抗原的可逆反應(yīng)來富集分析物，滿足了農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的低檢測(cè)限、高分辨率與高靈敏度的要求，其高選擇性的富集能力使得復(fù)雜樣品的前處理過程大大簡(jiǎn)化。

4 藥用植物中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)技術(shù)

4.1 色譜分析技術(shù)

色譜法是農(nóng)藥殘留檢測(cè)的主要方法，包括氣相色譜法（GC）、高效液相色譜法（HPLC）、薄層色譜法（TLC）、GC-質(zhì)譜（MS）聯(lián)用法與HPLC-MS聯(lián)用法等。

4.1.1 GC法 GC法在藥用植物中農(nóng)藥殘留檢測(cè)方面應(yīng)用普遍，所需樣品量少，適合于痕量農(nóng)藥的檢測(cè)。相關(guān)研究如：同時(shí)檢測(cè)西洋參根中六六六、五氯硝基苯等12種農(nóng)藥殘留量（平均回收率為94.1%～99.4%）[12]；檢測(cè)鐵皮石斛中3種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量[13]；檢測(cè)珠子參中滴滴涕等3種有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量[14]。GC法靈敏度高、分離效能好、選擇性強(qiáng)、分析速度快。該法常用的檢測(cè)器有電子捕獲檢測(cè)器（ECD）、火焰光度檢測(cè)器（FPD）、氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）、氮磷檢測(cè)器（NPD）等。

4.1.2 HPLC法 HPLC法適合于分析熱不穩(wěn)定和強(qiáng)極性農(nóng)藥及其代謝產(chǎn)物，在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中應(yīng)用越來越廣泛。相關(guān)研究如：采用液-液微萃取技術(shù)結(jié)合HPLC法測(cè)定蜂蜜中溴氰菊酯殘留量，檢測(cè)限為8 μg/kg，定量限為40 μg/kg[15]；采用反相HPLC法（RP-HPLC）測(cè)定元參、黃芩和杭白菊中多菌靈殘留量，檢測(cè)限分別為0.01、0.05和0.01 mg/kg[16]。

4.1.3 TLC法 TLC法操作簡(jiǎn)單，不需特殊設(shè)備，分析樣品種類多，可通過顯色劑觀察斑點(diǎn)顏色和計(jì)算比移值（Rf）定性，也可與其他技術(shù)聯(lián)用進(jìn)行定性或定量分析，多用于分離和篩選復(fù)雜混合物，但該法靈敏度低，近年來已少有使用。相關(guān)研究如：采用TCL法測(cè)定益母草中百治磷的殘留量，結(jié)果含量為0.282%～0.292%，平均回收率為99.8%[17]。

4.1.4 GC-MS聯(lián)用法 GC-MS聯(lián)用法和GC-串聯(lián)MS （MS/MS）聯(lián)用法既具有GC的高分離效能，又具有MS可鑒定化合物結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，可同時(shí)快速測(cè)定樣品中多種殘留農(nóng)藥及其衍生物。相關(guān)研究如：采用改良QuEChERS法前處理樣品，對(duì)車前草、甘草、枸杞、金銀花等9種藥用植物中六六六、乙草胺、三唑酮、甲氰菊酯等13種代表性農(nóng)藥殘留量進(jìn)行GC-MS聯(lián)用法檢測(cè)，方法定量限為0.004～0.03 mg/kg，檢測(cè)限為0.009～0.01 mg/kg[18]；以GPC法和SPE法凈化，GC-MS聯(lián)用法同時(shí)測(cè)定紫皮石斛中10種有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留量，結(jié)果含量為0.02～0.5 μg/ml，檢測(cè)限為0.0052～0.011 mg/kg[19]。

4.1.5 HPLC-MS聯(lián)用法 HPLC-MS聯(lián)用法以HPLC作為分離系統(tǒng)，MS作為檢測(cè)系統(tǒng)，將HPLC對(duì)復(fù)雜樣品的高分離能力與MS具有高選擇性、高靈敏度及能夠提供相對(duì)分子質(zhì)量與結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合起來，在藥物分析、食品分析和環(huán)境分析等許多領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。相關(guān)研究如：采用HPLC-MS/MS法測(cè)定黃芩中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量，6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測(cè)限為0.002～0.004 mg/kg[20]；黃芪中25種有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留量采用超高效液相色譜（UPLC）-MS/MS聯(lián)用法檢測(cè)，測(cè)得上述各有機(jī)磷類農(nóng)藥成分的檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍，各有機(jī)磷類農(nóng)藥成分的定量限為2～120 μg/kg[21]；甘草及其提取物中11種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量采用UPLC-MS/MS聯(lián)用法檢測(cè)，11種待測(cè)成分的回收率為73.8%～94.7%[22]。

近年來，GC、HPLC、GC-MS和HPLC-MS法等在農(nóng)藥殘留檢測(cè)領(lǐng)域發(fā)揮了重要作用。2015年版《中國(guó)藥典》（四部）農(nóng)藥殘留量測(cè)定方法中采用GC法測(cè)定了37種農(nóng)藥殘留量，GC-MS法測(cè)定了76種農(nóng)藥殘留量，HPLC-MS法測(cè)定了155種農(nóng)藥殘留量[23]。

4.2 免疫分析技術(shù)

免疫分析技術(shù)（IA）具有簡(jiǎn)單、靈敏、快速、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，是利用抗原與抗體特異性結(jié)合反應(yīng)來檢測(cè)農(nóng)藥殘留的方法，適于檢測(cè)一種或一類農(nóng)藥，適于大量樣品和現(xiàn)場(chǎng)樣品的快速檢測(cè)，可分為酶免疫分析法（EIA）、化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）等。

4.2.1 EIA法 靈敏度高，檢測(cè)下限可達(dá)ng甚至pg水平，操作簡(jiǎn)單，特異性強(qiáng)，適用于大批樣品農(nóng)藥殘留的快速分析。其基本原理是在抗體或抗原分子上連接酶分子，形成免疫復(fù)合物，進(jìn)行免疫反應(yīng)時(shí)，免疫復(fù)合物上的酶可將反應(yīng)底物轉(zhuǎn)化為特定的顏色，顏色的深淺能夠反映待測(cè)物的量。EIA法主要分為兩類：酶放大免疫法（EMIT）和酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）。其中，ELISA法把酶的高效催化作用與抗原抗體的高特異性反應(yīng)有機(jī)結(jié)合起來，在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中應(yīng)用較多。相關(guān)研究如：采用ELISA法檢測(cè)水中氰戊菊酯含量，檢測(cè)限達(dá)0.017 mg/L，對(duì)其他大部分?jǐn)M除蟲菊酯類農(nóng)藥如甲氰菊酯、三氟氯氰菊酯等沒有交叉反應(yīng)[24]；采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法（icELISA）檢測(cè)環(huán)境水樣中的異丙甲草胺，檢測(cè)限為6.3 ng/mL，對(duì)其他結(jié)構(gòu)類似物無交叉反應(yīng)[25]。

4.2.2 CLIA法 由化學(xué)發(fā)光和免疫反應(yīng)兩個(gè)系統(tǒng)組成，是將化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記在待檢測(cè)的抗原或抗體上，反應(yīng)后形成抗原-抗體復(fù)合物，復(fù)合物上的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)催化與氧化后形成激發(fā)態(tài)中間體，該中間體在穩(wěn)定狀態(tài)下發(fā)射出光子，基于待測(cè)物濃度與發(fā)光強(qiáng)度的比例關(guān)系，可計(jì)算出待測(cè)物含量。相關(guān)研究如：采用CLIA法檢測(cè)養(yǎng)殖的海參中有機(jī)氯類農(nóng)藥滴滴涕殘留量，檢測(cè)限為0.05 ng/mL，回收率為91.4%～107.8%[26]；采用CLIA法檢測(cè)蔬菜中敵敵畏殘留量，檢測(cè)限為0.42 ng/L，檢測(cè)時(shí)間較ELISA法短[27]。以CLIA法檢測(cè)農(nóng)藥殘留量，特異性強(qiáng)、靈敏度高、分析時(shí)間短，可用于小分子殘留物的檢測(cè)。

4.3 生物傳感器分析技術(shù)

生物傳感器分析技術(shù)建立在傳感技術(shù)和生物化學(xué)基礎(chǔ)之上，通常以酶、抗原、抗體、核酸、細(xì)胞、組織等生物活性單元作為敏感基元，與被檢測(cè)農(nóng)藥殘留物產(chǎn)生高選擇性生物親和或催化反應(yīng)，反應(yīng)過程中的物理、化學(xué)變化被捕獲、轉(zhuǎn)化成光信號(hào)或電信號(hào)，將這些信號(hào)放大后通過電子儀器測(cè)量，從而將生物學(xué)信息轉(zhuǎn)換為可識(shí)別和測(cè)量的電信號(hào)[28-29]。該技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一種新型農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)，可在復(fù)雜的有機(jī)、生化樣品中對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行快速分析，選擇性好、靈敏度高，可在復(fù)雜體系中連續(xù)監(jiān)測(cè)，具有自動(dòng)化、微型化與集成化的特點(diǎn)，在藥用植物中農(nóng)藥殘留檢測(cè)方面應(yīng)用前景廣闊。

4.3.1 酶生物傳感器技術(shù) 酶生物傳感器技術(shù)是指將酶與固相載體特異性結(jié)合形成固定化酶，將此作為敏感元件，與被檢測(cè)農(nóng)藥殘留物進(jìn)行酶促反應(yīng)時(shí)會(huì)產(chǎn)生可測(cè)信號(hào)，通過信號(hào)轉(zhuǎn)換器（電極）捕捉這些信號(hào)，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)物的定量測(cè)定[30]。酶生物傳感器檢測(cè)適于痕量農(nóng)藥殘留量檢測(cè)，具有靈敏、快速的特點(diǎn)。相關(guān)研究如：采用AchE生物傳感器技術(shù)結(jié)合脂質(zhì)體制備技術(shù)和多層膜組裝技術(shù)檢測(cè)樣品中敵敵畏殘留量，檢測(cè)限為（0.68± 0.076）μg/L[31]；采用AchE電化學(xué)傳感器技術(shù)檢測(cè)白菜樣品中乙基對(duì)氧磷殘留量，檢測(cè)限達(dá)1.3×10－9mol/L[32]。

4.3.2 電化學(xué)免疫傳感器技術(shù) 電化學(xué)免疫傳感器技術(shù)是通過將循環(huán)伏安法、差分脈沖伏安法、溶出伏安法、電化學(xué)流動(dòng)注射分析法、脈沖差分法等電分析技術(shù)和免疫技術(shù)相結(jié)合，測(cè)量免疫反應(yīng)前后電化學(xué)信號(hào)的變化，由此可以用于藥用植物中農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)[33]。根據(jù)電化學(xué)信號(hào)可分為電位型、電容型和電流型免疫傳感器等。在研究中可于電極表面修飾碳納米材料、金納米粒子、電信號(hào)標(biāo)記分子等的條件下進(jìn)行檢測(cè)。相關(guān)研究如：基于納米金/硫脲/納米金納米復(fù)合膜修飾基礎(chǔ)上制備的電化學(xué)免疫傳感器檢測(cè)（大頭菜中）克百威農(nóng)藥殘留量，檢測(cè)限為0.11 ng/mL，并基于納米金/殼聚糖-功能化多壁碳-磁性納米四氧化三鐵基礎(chǔ)上制備的電化學(xué)免疫傳感器檢測(cè)（大頭菜中）克百威農(nóng)藥殘留量，檢測(cè)限為0.032 ng/mL，二者均具有良好的檢測(cè)精度、重復(fù)性和穩(wěn)定性[34]；將毒死蜱人工抗原作為識(shí)別元件固定在金電極表面制備電化學(xué)免疫傳感器，檢測(cè)青菜、蘋果等農(nóng)產(chǎn)品中毒死蜱農(nóng)藥殘留量，檢測(cè)限為0.01 μg/mL，回收率＞85%，此傳感器再生后可重復(fù)使用，檢測(cè)時(shí)間短，靈敏、準(zhǔn)確[35]。

4.3.3 分子印跡聚合物（MIPs）傳感器技術(shù) MIPs傳感器主要由MIPs敏感膜和信號(hào)轉(zhuǎn)換裝置組成，其基本原理為農(nóng)藥殘留物經(jīng)擴(kuò)散進(jìn)入敏感層，與MIPs敏感膜上的印跡位點(diǎn)發(fā)生特異性結(jié)合，信號(hào)轉(zhuǎn)換裝置將敏感膜上接受到的信號(hào)轉(zhuǎn)換為可測(cè)信號(hào)，由此實(shí)現(xiàn)對(duì)農(nóng)藥殘留物的測(cè)定[36]。相關(guān)研究如：將吡咯與毒死蜱作為模板分子通過電化學(xué)聚合法制備毒死蜱分子印跡膜，檢測(cè)玉米葉人工樣品中毒死蜱殘留量，檢測(cè)限達(dá)1.28×10－8mol/L[37]。4.3.4 表面等離子共振（SPR）傳感器技術(shù) SPR傳感器由光源、棱鏡、金屬膜和生物分子識(shí)別膜等構(gòu)成，當(dāng)一束P-偏振光以一定角度照射到棱鏡，在棱鏡與金屬膜界面將發(fā)生折射與反射，如入射角大于臨界角，光線被全內(nèi)反射，此時(shí)，金屬與棱鏡界面處的電場(chǎng)向金屬介質(zhì)中傳輸消失波，引發(fā)金屬薄膜中電子形成表面等離子體（SP）。SP的集體振蕩能夠產(chǎn)生表面等離子波（SPW）。當(dāng)消失波矢量與金屬膜內(nèi)SPW矢量相等時(shí)，兩者產(chǎn)生共振，且入射光能量被SP吸收，反射光強(qiáng)度達(dá)最小，并在SPR反射光譜上出現(xiàn)共振峰，相應(yīng)的入射光角度被稱為“SPR角”，SPR角的改變隨金屬薄膜表面折射率的改變而改變，這樣附著在金屬薄膜表面殘留農(nóng)藥成分的量、構(gòu)型等發(fā)生改變時(shí)均可被SPR傳感器檢測(cè)出來[38]。SPR傳感器具有快捷、定量、前處理簡(jiǎn)單、樣品用量少、無需標(biāo)定等優(yōu)勢(shì)，現(xiàn)已得到廣泛發(fā)展。相關(guān)研究如：基于亞胺硫磷多克隆抗體建立SPR傳感器，檢測(cè)蘋果汁、桃汁和橙汁中亞胺硫磷殘留量，檢測(cè)限為0.1 μg/L，比EIA法在精確度、靈敏度、檢測(cè)限等方面更具優(yōu)勢(shì)[39]。

4.4 酶抑制技術(shù)

適于有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測(cè)，其基本原理在于有機(jī)磷及氨基甲酸酯能夠抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中AchE活性，在AchE及乙酰膽堿共存時(shí)，加入待測(cè)有機(jī)磷類或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留物，根據(jù)AchE受抑制程度，判斷藥用植物中農(nóng)藥殘留量[40]。該技術(shù)目前廣泛應(yīng)用于各種速測(cè)片和速測(cè)儀的研制中。相關(guān)研究如：采用酶抑制技術(shù)對(duì)西紅柿、青椒、白菜、豆角和空心菜5種蔬菜中有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)，5種蔬菜對(duì)AchE酶活性抑制率均在35%以下，該法對(duì)敵敵畏、辛硫磷和毒死蜱3種有機(jī)磷農(nóng)藥回收率都在80%～120%，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠[41]。

5 結(jié)語

目前，色譜法仍是國(guó)內(nèi)外藥用植物中農(nóng)藥殘留檢測(cè)的主流方法，該類方法靈敏度高，分離效能好，所需樣品量小，能夠同時(shí)檢測(cè)多種農(nóng)藥殘留量，但所需儀器設(shè)備昂貴、體積龐大且需要專業(yè)技術(shù)人員操作，只能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，而且樣品前處理復(fù)雜，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，成本高，限制了其在大規(guī)模農(nóng)藥殘留檢測(cè)或現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)中的應(yīng)用。因此，有必要進(jìn)一步研究新的檢測(cè)方法，從而在藥用植物生長(zhǎng)期、采收期、貯存期都能批量檢測(cè)其農(nóng)藥殘留，以全流程避免其農(nóng)藥污染，有效保證其質(zhì)量。IA技術(shù)、生物傳感器分析技術(shù)和酶抑制技術(shù)等具有快速、靈敏、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，適于快速檢測(cè)一種或一類農(nóng)藥，目前多用于水果、蔬菜等食品中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)，在藥用植物方面應(yīng)用較少。而將IA技術(shù)或酶抑制技術(shù)與生物傳感器技術(shù)相結(jié)合，優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，開發(fā)出可用于藥用植物中農(nóng)藥殘留檢測(cè)的高效、快捷、可靠、靈敏、低成本的批量檢測(cè)方法，是該領(lǐng)域一個(gè)新的發(fā)展方向。

[1] 葉榮華.我國(guó)中藥出口貿(mào)易現(xiàn)狀調(diào)查[J].現(xiàn)代商貿(mào)工業(yè)，2012，24（3）：79.

[2] 傅巧真，管仁偉，顧正位，等.中藥材農(nóng)藥殘留檢測(cè)與脫除的研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20（16）：231-233.

[3] 榮維廣，郭華，楊紅.我國(guó)中藥材農(nóng)藥殘留污染研究現(xiàn)狀[J].農(nóng)藥，2006，45（5）：302-305.

[4] Hao LL，Xue J.Multiresidue analysis of 18 organochlorine pesticides in traditional Chinese medicine[J].JCS，2006，44（8）：518-522.

[5] 陳芳，楊冰儀，龍軍標(biāo)，等.有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測(cè)的研究進(jìn)展[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2007，17（2）：382-384.

[6] Chang QY，F(xiàn)eng T，Song SJ，et al.Analysis of eight py-rethroids in water samples by liquid-liquid microextraction based on solidification of floating organic droplet combined with gas chromatography[J].MCA，2010，171 （3）：241-247.

[7] Wu JL，Li LQ，Zou YH.Determination of carbamate insecticides in Chinese medicinal herbs by gas chromatography with a nitrogen phosphorus[J].J Aoac Int，2005，88 （4）：1261-1264.

[8] 佟鶴芳，薛健蘋，吳曉波.中藥材農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法與標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2011，13（6）：49-54.

[9] 石杰，劉婷，劉惠民，等.煙草中有機(jī)氯類農(nóng)藥多殘留分析前處理方法對(duì)比研究[J].分析試驗(yàn)室，2010，29（2）：52-55.

[10] Richter BE，Ezzell JL，F(xiàn)elix D，et al.An accelerated solvent extraction system for the rapid preparation of environmental organic compounds in soil[J].American Laboratory，1995，27（4）：24-28.

[11] 楊立榮，陳安良，馮俊濤，等.小白菜中殘留高效氯氰菊酯及氟氯氰菊酯的超臨界流體萃取條件的研究[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)，2005，24（3）：616-619.

[12] 趙春杰，侯哲，袁麗華，等.氣相色譜法同時(shí)測(cè)定西洋參藥材根中12種農(nóng)藥殘留的含量[J].沈陽大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2014，26（3）：193-197.

[13] 楊青.擬除蟲菊酯類農(nóng)藥在鐵皮石斛中的殘留量研究[J].海峽藥學(xué)，2016，28（1）：60-62.

[14] 游燕，牛延菲，楊曉燕，等.GC-ECD法測(cè)定珠子參中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2013，34（7）：54-56.

[15] 于玲.超聲輔助分散液液微萃取-高效液相色譜法測(cè)定蜂蜜中溴氰菊酯殘留[J].食品工業(yè)科技，2016，37（2）：68-72.

[16] 吳加倫，王天玉，王懷昌，等.高效液相色譜法測(cè)定元參、黃芩和杭白菊中的多菌靈殘留[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2010，12 （4）：489-493.

[17] 權(quán)彥.薄層掃描法檢測(cè)益母草中農(nóng)藥百治磷的限量[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，30（3）：47.

[18] 劉曉亮，李雪生，劉紹文，等.中草藥中13種代表性農(nóng)藥多殘留的分散固相凈化與氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定[J].分析化學(xué)，2013，41（4）：553-558.

[19] 劉超，梅麗寶，張紹龍，等.全自動(dòng)凝膠凈化-濃縮-固相萃取/氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定紫皮石斛中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留

[J].中國(guó)無機(jī)分析化學(xué)，2015，5（4）：8-12.

[20] 趙瑛博，田宏哲，周艷明，等.HPLC-MS/MS法測(cè)定黃芩藥材中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].農(nóng)藥，2010，49（6）：434-435、438.

[21] 李娜，邵輝，劉磊，等.中藥材黃芪中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法研究[J].藥物分析雜志，2012，32（5）：852-856.

[22] 楊如緘，王金花，張蓉，等.凝膠滲透色譜凈化超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)甘草及其提取物中的11種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].色譜，2010，28（8）：769-775.

[23] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：四部[S].2015年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：209-224.

[24] 盧希勤.氰戊菊酯和甲氰菊酯酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法的研究[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

[25] 張熾堅(jiān)，王強(qiáng)，唐秋實(shí)，等.酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)除草劑異丙甲草胺[J].食品科學(xué)，2013，34（10）：126-129.

[26] 張峰，倪慧，張斯.用化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)有機(jī)氯農(nóng)藥DDTs的殘留量[J].大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，26（1）：30-34.

[27] Chen XM，Lin ZJ，Cai ZM，et al.Electrochemiluminescence detection of dichlorvos pesticide in luminol-CTAB medium[J].Talanta，2008，76（5）：1083-1087.

[28] Sun QQ，Xu M，Bao SJ，et al.pH-controllable synthesis of unique nanostructured tungsten oxide aerogel and its sensitive glucose biosensor[J].Nanotechnology，2015，26 （11）：115602.

[29] Erden PE，Kacar C，Ozturk F，et al.Amperometric uric acid biosensor based on poly（vinylferrocene）-gelatin-carboxylated multiwalled carbon nanotube modified glassy carbon electrode[J].Talanta，2015，134：488-495.

[30] 陳藝煊.酶生物傳感器在食品分析檢測(cè)中的應(yīng)用[J].科技傳播，2013（6）：98、109.

[31] Yan JX，Guan HN，Yu J，et al.Acetylcholinesterase biosensor based on assembly of multiwall carbon nanotubes onto liposome bioreactors for detection of organophosphates pesticides[J].Pestic Biochem Physiol，2013，105 （3）：197-202.

[32] Wang BX，Ye C，Zhong X，et al.Electrochemical biosensor for organophosphate pesticides and huperzine：a detection based on Pd wormlike nanochains/graphitic carbon nitride nanocomposites and acetylcholinestesterase[J].Electroanalysis，2015，28（2）：304-311.

[33] 吳健民.臨床化學(xué)自動(dòng)化免疫分析[M].北京：科學(xué)出版社，2000：20-25.

[34] 李青青.檢測(cè)克百威農(nóng)藥殘留的電流型免疫傳感器制備方法的研究[D].淄博：山東理工大學(xué)，2012.

[35] 蔣雪松，王維琴，盧利群，等.電化學(xué)免疫傳感器快速檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品中的毒死蜱[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)，2014，30（12）：278-283.

[36] 曾延波.新型表面分子印跡和識(shí)別聚合物材料的制備及其在電化學(xué)傳感器的應(yīng)用研究[D].上海：華東師范大學(xué)，2013.

[37] Uygun ZO，Dilgin Y.A novel impedimetric sensor based on molecularly imprinted polypyrrole modified pencil graphite electrode for trace level determination of chlorpyrifos[J].Sens Actuators B Chem，2013，188（11）：78-84.

[38] 劉霞，李蕾，李文進(jìn)，等.表面等離子共振傳感器快速檢測(cè)農(nóng)藥殘留的研究進(jìn)展[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2013，4（2）：321-327.

[39] 宋洋，王靜，陳曉明.表面等離子共振傳感器檢測(cè)3種果汁中亞胺硫磷殘留[J].食品科學(xué)，2015，36（18）：172-176.

[40] 楊靜，王歡，謝偉強(qiáng)，等.酶抑制法速測(cè)技術(shù)在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2015（17）：161、164.

[41] 邱朝坤，劉曉宇，任紅敏，等.酶抑制法檢測(cè)蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留[J].食品與機(jī)械，2010，26（2）：40-42.

R282.7；R927

A

1001-0408（2017）12-1721-06

2016-07-31

2017-03-21）

（編輯：周 箐）

中國(guó)科學(xué)院“西部之光”人才培養(yǎng)計(jì)劃資助項(xiàng)目（No.科發(fā)人字〔2013〕165號(hào)）

＊碩士研究生。研究方向：生藥學(xué)。E-mail：382660202@qq.com

#通信作者：副教授，碩士生導(dǎo)師，博士。研究方向：中藥品質(zhì)與資源。E-mail：zwhjzs@126.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.12.38