HCN通道在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能和調(diào)節(jié)機制研究進展

翁謝川

（軍事醫(yī)學研究院1.軍事認知與腦科學研究所，2.國家蛋白質(zhì)組學重點實驗室，北京 100850）

超極化激活的環(huán)核苷酸門控（hyperpolarizationactivated and cyclic nucleotide-gated，HCN）陽離子通道是一類新近發(fā)現(xiàn)的由HCN1-4基因家族編碼的離子通道［1］。不同于經(jīng)典的去極化激活的Na+通道和K+通道，HCN通道在膜電位超極化時開放，其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能和角色倍受關(guān)注。

HCN通道對K+和Na+具有通透性，其離子通透比率為3～5∶1，其反轉(zhuǎn)電位在-30 mV左右［1］。HCN通道需要細胞外有Cl-和K+存在時才能開放。有趣的是，在HCN通道的C末端有一個環(huán)核苷酸結(jié)合域（cyclic nucleotide-binding domain，CNBD），稱為C-linker，在HCN通道的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。C-linker可通過結(jié)合環(huán)磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）和環(huán)磷酸鳥苷（cyclic guanosine monophosphate，cGMP）等信號分子誘導HCN通道的電壓依賴曲線右移，從而使HCN通道更容易開放［2-4］。因此，HCN通道電流也被稱為“有意思的電流（funny current，If）”或“奇怪的電流（queer current，Iq）”。HCN 通道在神經(jīng)系統(tǒng)中的功能和角色與它的這些電生理特征緊密相連［5］。本文重點探討HCN通道在神經(jīng)系統(tǒng)的生理功能和作用、調(diào)節(jié)因子及其作為新藥靶點可能的臨床意義。

1 HCN通道蛋白家族

HCN通道于20世紀70年代在竇房結(jié)細胞和神經(jīng)元中被發(fā)現(xiàn)和鑒定，由4個相同的亞基組成聚合體（homomeric）或由4個不同的亞基構(gòu)成復合體（heteromeric）［6］。在哺乳動物中，HCN 通道家族包含HCN1，HCN2，HCN3和HCN4 4個亞單位，亞單位之間序列的同源性約為60%。每個亞單位都有6個跨膜區(qū)，跨膜區(qū)包括6個α-螺旋（S1～S6），其中S5和S6螺旋區(qū)域負責離子的選擇性通透，帶正電的S4螺旋區(qū)域為電壓感受器［7］。

雖然HCN通道4個亞型介導的電流互不相同，但依據(jù)其激活的動力學特征，它們激活的速度都具有強烈的電壓依賴性，其激活速度HCN1＞HCN2＞HCN3＞HCN4。另外，HCN通道4個亞型對cAMP，cCMP 和 cGMP的敏感性也存在差異［2，4］。例如，cAMP能使HCN2和HCN4的激活曲線右移+15 mV，而對HCN1和HCN3的調(diào)節(jié)作用卻很弱［4］?？梢韵胂蟮氖?，不同亞基構(gòu)成的HCN通道，其生物物理特性由每個亞單位共同確定，而這種通道的構(gòu)成方式對于不同類型神經(jīng)元中HCN電流的多樣性具有重要意義。

2 HCN通道在神經(jīng)系統(tǒng)中的表達模式

HCN通道主要在大腦和心臟中表達。近年來，在味蕾、胰腺細胞、睪丸、平滑肌、內(nèi)耳和腎等組織中也發(fā)現(xiàn)有HCN通道蛋白的存在，其功能和角色作用還不清楚［5，8-12］。在大腦中，HCN2亞型的表達最為普遍，幾乎存在于所有的腦內(nèi)核團；而HCN1在大腦皮質(zhì)、海馬和上丘中表達最為豐富［13］。HCN3的表達多見于嗅球、下丘腦核團和視網(wǎng)膜。HCN4主要在丘腦核團、基底神經(jīng)節(jié)、嗅球及大鼠脊髓和海馬的快速放電的中間神經(jīng)元中表達［10，14］。

在神經(jīng)元，HCN通道存在于樹突、胞體和軸突的末端，其在神經(jīng)元表面表達的密度不盡相同［1］。例如，HCN通道在丘腦網(wǎng)狀神經(jīng)元遠端樹突的表達比在胞體豐富，而在丘腦皮質(zhì)的中繼神經(jīng)表面的分布幾乎是均勻的。在成熟大鼠大腦皮質(zhì)的V層錐體神經(jīng)元中，HCN1在樹突中表達豐富，而HCN2主要表達在神經(jīng)元的胞體［15］。

本課題組近期發(fā)現(xiàn)，HCN1，HCN2和HCN3在各種類型的感覺神經(jīng)元上均有表達，與文獻報道一致［5，11，16-17］。RT-PCR 和免疫組化證實，HCN1，HCN2和HCN3共存于正常大鼠的脊髓背根神經(jīng)節(jié)（dorsal root ganglions，DRG），主要在大型神經(jīng)元上，其中HCN1是表達最為豐富的亞型。

HCN1和HCN2通道蛋白在傷害性感覺神經(jīng)元和低閾值的機械感覺神經(jīng)元中都有表達，這可能與其參與神經(jīng)的傳導速率相關(guān)［11］。HCN1和HCN2通道蛋白水平在非傷害性感覺神經(jīng)元中的高表達，可能與其參與DRG傳導非疼痛性刺激相關(guān)。對比DRG中的其他神經(jīng)元，HCN2較HCN1更高表達于肌梭傳入神經(jīng)元（muscle spindle afferents，MSA）［5］，該結(jié)果與MSA中記錄到的大的HCN電流相一致。而在正常大鼠的C纖維傷害性感覺神經(jīng)元，HCN1和HCN2通道蛋白的表達水平較低，其HCN電流比較小，甚至低于一些低閾值的C纖維神經(jīng)，盡管傷害性感覺神經(jīng)元中的HCN2在慢性疼痛中發(fā)揮著非常重要的角色［6，11］。

3 HCN通道在慢性疼痛中的重要作用

越來越多的證據(jù)表明，HCN通道在炎性和神經(jīng)病理性疼痛中扮演重要角色［5-6，11，16，18］。利用在體胞內(nèi)技術(shù)記錄正常大鼠和弗氏完全佐劑（complete Freund′s adjuvant，CFA）誘導的后肢炎性痛大鼠L4/L5的DRG神經(jīng)元，本課題組發(fā)現(xiàn)，負責傷害性感覺的C纖維神經(jīng)元而不是Aδ纖維神經(jīng)元興奮性增強，其HCN通道電流幅度顯著增加［5］。免疫組化實驗進一步發(fā)現(xiàn)，HCN通道電流的增大與HCN2而不是HCN1和HCN3的表達上調(diào)相關(guān)。其他研究也證實了小型神經(jīng)元中的HCN2在皮膚炎癥1 d后表達即開始上調(diào)，而大型神經(jīng)元中的HCN2表達在炎癥4 d后下降。因此，HCN2在炎性疼痛中發(fā)揮重要的角色［11］。

在部分神經(jīng)損傷的模型中，盡管HCN電流Ih增大，但HCN1和HCN2通道m(xù)RNA和蛋白表達卻降低，而HCN3和HCN4的表達未發(fā)生變化，因此說明HCN通道還存在轉(zhuǎn)錄后的調(diào)節(jié)機制［1］。研究發(fā)現(xiàn)，在神經(jīng)根型頸椎病模型中，大鼠坐骨神經(jīng)損傷后Aδ而非Aα/β神經(jīng)元Ih電流增加。在這個模型中，通過插入不銹鋼棒進入椎間孔的L4和L5直接進行DRG的慢性壓迫，5～7 d后進行疼痛的行為學和電生理測試。從傷害性神經(jīng)元中敲除HCN2亞型可以消除熱誘發(fā)炎性疼痛和神經(jīng)病理性疼痛的癥狀，但急性疼痛感覺不受影響［6，18-19］。另外，神經(jīng)藥理學研究發(fā)現(xiàn)，HCN通道選擇性拮抗劑ZD7288可以顯著逆轉(zhuǎn)慢性疼痛中痛覺過敏、痛覺超敏和自發(fā)性疼痛的癥狀［1，5］。以上研究表明，HCN 通道在慢性炎性疼痛和神經(jīng)病理性疼痛中具有重要功能，選擇性HCN通道阻斷劑可能成為有價值的鎮(zhèn)痛藥。

4 HCN通道參與部分腦疾病的發(fā)生

中樞神經(jīng)系統(tǒng)是由神經(jīng)細胞構(gòu)成的錯綜復雜的網(wǎng)絡，具有多種電學特性。對于一個特定的神經(jīng)元，細胞HCN電流大小和動力學的增加或減少可能對大腦功能、興奮性或抑制性產(chǎn)生不同的影響，這取決于神經(jīng)元的內(nèi)在特性及其在大腦信號整合背景下的角色［20］。在大腦中，HCN通道的表達和動力學特征的改變與癲癇、失神發(fā)作、帕金森病、抑郁癥及一些環(huán)境刺激等病理疾病緊密相關(guān)［1，21-24］。例如，在毛果蕓香堿誘導的癲癇持續(xù)性抽搐狀態(tài)中，HCN通道蛋白在膜表面表達，但在隨后1周內(nèi)，HCN通道蛋白和mRNA表達降低，其電壓依賴性也在癲癇病中發(fā)生改變［17-18］。

感覺傳入是增加或保持HCN通道表達水平的必要條件。研究發(fā)現(xiàn)，胡須剝奪實驗減少了大鼠軀體感覺皮質(zhì)樹突HCN通道的表達［7］。在同一癲癇模型中，HCN2在海馬CA3區(qū)增加，而在海馬CA1區(qū)HCN1和HCN2通道蛋白減少［25-26］。研究還發(fā)現(xiàn)，在社交沖突模型和慢性不可預見性輕度應激（chronic unpredictable mild stress，CUMS）所致的抑郁模型中，HCN通道蛋白表達上調(diào)且Ih電流增大，而ZD7288能有效治療抑郁的發(fā)生，表明HCN參與了抑郁癥的發(fā)生［24］。另外，近期研究發(fā)現(xiàn)，HCN通道還參與了甲基苯丙胺成癮的發(fā)生。這些研究表明，HCN通道廣泛參與了大腦疾病。然而，HCN通道表達的調(diào)控機制仍然需要進一步的探討［26-30］。

5 HCN通道參與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的機制

5.1 HCN通道對神經(jīng)興奮性的調(diào)節(jié)

HCN通道參與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生與其對神經(jīng)元興奮性的調(diào)節(jié)直接相關(guān)。由于典型的HCN通道電流反轉(zhuǎn)電位約為-30 mV，高于動作電位產(chǎn)生的正常閾值，HCN通道電流控制膜電位在靜息膜電位附近［7］。當移除HCN通道的電導，模擬神經(jīng)元顯示超極化膜電位。例如，阻斷HCN通道可以誘導大鼠上丘神經(jīng)元的超極化［1］。雖然HCN通道電導降低了興奮性突觸后電位（excitatory postsynaptic potential，EPSP）振幅，但這種抑制效應被膜電位的去極化作用所掩蓋［7］。此外，HCN通道減弱抑制性突觸輸入的影響，因為抑制性突觸超極化電導可以打開HCN通道，喚起極化電導［6-7］。當電壓依賴的HCN通道被cAMP或者磷脂酰肌醇二磷酸（phosphatidylinositol 4，5-bisphosphate，PIP2）調(diào)節(jié)時，通道在靜息膜電位附近即可激活，并可作為一個興奮因子［2］。而且，用光纖刺激大鼠的上丘時，樹突的HCN通道被激活產(chǎn)生短和固定潛伏期的樹突電位［2-3，31］。

一般認為，活化的HCN通道電導可以降低膜電阻。這種降低可以抑制突觸輸入對膜電位的影響［1，7］。隨著HCN通道的激活，突觸后電位的振幅和動力參數(shù)逐漸變小變短。樹突的HCN通道可以使皮質(zhì)和海馬神經(jīng)元突觸輸入正?；CN通道的密度隨著海馬和新皮質(zhì)錐體神經(jīng)元體細胞的距離的增加而增大［21］。這種樹突HCN通道決定著神經(jīng)元胞體上EPSP振幅的大小，并且抑制海馬和新皮質(zhì)錐體神經(jīng)元突觸輸入的位置依賴性［1］。

激活的HCN通道參與了突觸輸入的過程。由于HCN通道電導通過降低膜電阻而縮短了EPSP的上升時間和衰減時間，因此抑制了在低頻時發(fā)生的重復EPSP的總和。這種抑制過濾出低頻輸入，從而提高了同步突觸輸入的選擇性［7］。離子通道的主動電導使神經(jīng)元產(chǎn)生固有的膜電位振蕩和共振。這樣的節(jié)律性活動可以在一定的頻率過濾輸入，并能影響峰電位的定時精度［7］。HCN通道電流過濾出慢頻輸入。有證據(jù)表明，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的特定區(qū)域中，Ih電流對神經(jīng)元同步放電的產(chǎn)生有促進作用［32］，例如在丘腦皮質(zhì)中繼神經(jīng)元的Ih電流參與了調(diào)節(jié)睡眠和覺醒狀態(tài)的活動［14］。需要指出的是，HCN通道的表達必須是賦予細胞有節(jié)奏的放電能力，原因在于細胞啟動和（或）維持有節(jié)奏活動的能力取決于功能上不同類的離子通道的相互作用［7］。

5.2 細胞內(nèi)信號分子對HCN通道的調(diào)節(jié)

HCN通道可以被細胞內(nèi)信號分子調(diào)控，包含cAMP，PIP2和三角形四肽重復的相互作用蛋白（tetratricopetide repeat-containing Rab8b-interacting protein，TRIP8b）［2，33-34］。此外，電壓門控性鉀通道對HCN通道活動有很強的影響［7］。由于這些特性，HCN通道電流可以有廣泛的功能，并由一個微妙的平衡調(diào)節(jié)系統(tǒng)決定。研究證實，背根神經(jīng)節(jié)的許多神經(jīng)調(diào)質(zhì)如P物質(zhì)、前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）、血清素和神經(jīng)介素U都有增強Ih電流的作用［35］。增加神經(jīng)元Ih電流可能意味著炎癥介質(zhì)和神經(jīng)肽產(chǎn)生痛覺過敏的一種新的機制。此外，鈣依賴磷酸酶的激活和P38絲裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinases，p38 MAPK）的失活參與到電壓依賴性的超極化轉(zhuǎn)移中［35］。

有報道顯示，一些蛋白質(zhì)和HCN通道蛋白一起組裝，其功能意義尚不清楚。這種蛋白質(zhì)包括電壓門控性鉀通道蛋白、Isk相關(guān)的家庭成員2、鉀通道調(diào)節(jié)器1、細絲蛋白A（filamin A）、腸抑胃肽（gastric inhibition polypeptide，GRP1）相關(guān)的支架蛋白以及小窩蛋白-3（caveolin-3）等。這些蛋白質(zhì)在HCN通道功能方面的具體作用有待進一步研究驗證。

除了輔助亞基，HCN通道也被幾個小分子質(zhì)量因子調(diào)控［6］。這些因子中最典型的是PIP2，它能使HCN通道的激活曲線右移約+20 mV。這個調(diào)節(jié)是非常重要的，因為它需要在生理電壓范圍內(nèi)激活HCN通道。除了PIP2，一些其他酸性脂類如磷脂酸和花生四烯酸，它們是二酰甘油激酶-磷酯酶A2信號轉(zhuǎn)導通路的產(chǎn)物，能促進HCN通道的激活。HCN通道活動也受細胞外的K+、Cl-濃度和細胞內(nèi)外的H+濃度的調(diào)節(jié)。

第三組HCN 通道調(diào)節(jié)器包括蛋白激酶［6，35］。酪氨酸蛋白激酶可以直接與HCN1，HCN2和HCN4相互作用，并通過磷酸化的酪氨酸來調(diào)節(jié)Ih電流。酪氨酸蛋白激酶在生理條件下對HCN通道的調(diào)節(jié)作用在大鼠竇房結(jié)起搏細胞和神經(jīng)元都得到了證實。P38 MAPK能上調(diào)海馬錐體神經(jīng)元中HCN通道的表達，而鈣依賴磷酸酶能通過誘導激活曲線超極化偏移來抑制海馬錐體神經(jīng)元中HCN通道［1，6］。而P38 MAPK和鈣依賴磷酸酶的這種雙向調(diào)節(jié)是由HCN通道直接的磷酸化或去磷酸化還是由其他蛋白機制引起［36］，還有待進一步確定。cGMP依賴性蛋白激酶2已被確定為HCN通道在大腦中的另一個調(diào)節(jié)因子。它結(jié)合到HCN2 C末端并且磷酸化CNBD的一個特定絲氨酸殘基［37］。該修飾使激活曲線向超極化方向偏移。因此，cGMP通過2種方式來調(diào)節(jié)HCN通道活動：①直接結(jié)合到通道蛋白的CNBD來增強HCN電流；②磷酸化CNBD抑制通道的開放。

6 HCN通道未來的臨床意義

HCN通道可以在興奮和抑制2種狀態(tài)下工作，并且這種作用通過藥理學調(diào)節(jié)來修飾。因此，HCN通道是潛在的治療腦部疾病的理想靶標。

影響Ih的藥物常被稱為減慢心率藥，常被用來研究HCN通道的功能［1，25］。由于對cAMP敏感，β受體阻滯劑主要影響HCN2和HCN4，但其他減慢心率的藥物對HCN通道并沒有特定的選擇性。一些藥物包括ZD7288、烯丙尼定（alinidine）、扎替雷定（zatebradine）和伊伐布雷定（ivabradine）［5，38-40］，這些藥物已被用來治療心動過速。

本課題組研究表明，對CFA誘導的慢性炎性疼痛模型大鼠和神經(jīng)損傷模型大鼠，HCN通道阻斷劑ZD7288具有明顯的減輕疼痛和反轉(zhuǎn)慢性疼痛癥狀的作用。另外，其他臨床常用的鎮(zhèn)痛藥也被證明可能是通過調(diào)節(jié)HCN通道功能而發(fā)揮鎮(zhèn)痛效果［6，19，39］。例如，一些局麻藥曾被認為是通過阻斷電壓門控鈉通道來發(fā)揮作用，但其對鈉通道并無高選擇性，可能還存在其他藥理作用機制［38］。全身給予利多卡因（lidocaine）對神經(jīng)病理性疼痛有效，其有效劑量下血漿利多卡因濃度與其抑制心肌細胞HCN通道電流的IC50接近，但比其作用于鈉通道的IC50低得多［40-41］。雖然尚不足以斷定利多卡因治療疼痛與其抑制Ih電流相關(guān)，但利多卡因?qū)CN通道的抑制作用可能強于其對鈉離子通道的抑制作用。

總之，由于HCN通道在神經(jīng)系統(tǒng)重要的功能及其對神經(jīng)元興奮性調(diào)節(jié)的重要性，已成為慢性疼痛及一些腦疾病的潛在治療靶點。一些臨床使用的藥物將為我們HCN通道亞基選擇性拮抗劑提供線索。此外，HCN通道在神經(jīng)系統(tǒng)的功能和相關(guān)機制仍有待進一步闡明。

［1 ］Benarroch EE.HCN channels：function and clinical implications［J］.Neurology，2013，80（3）：304-310.

［2］Zong X，Krause S，Chen CC，Krüger J，Gruner C，Cao-Ehlker X，et al.Regulation of hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated（HCN）channel activity by cCMP［J］.J Biol Chem，2012，287（32）：26506-26512.

［3］Wu S，Gao W，Xie C，Xu X，Vorvis C，Marni F，et al.Inner activation gate in S6 contributes to the state-dependent binding of cAMP in full-length HCN2 channel［J］.J Gen Physiol，2012，140（1）：29-39.

［4 ］Zheng JH，Walters ET，Song XJ.Dissociation of dorsal root ganglion neurons induces hyperexcitability that is maintained by increased responsiveness to cAMP and cGMP［J］.J Neurophysiol，2007，97（1）：15-25.

［5 ］Weng X，Smith T，Sathish J，Djouhri L.Chronic inflammatory pain is associated with increased excitability and hyperpolarization-activated current（Ih）in C-but not Aδ-nociceptors［J］.Pain，2012，153（4）：900-914.

［6 ］Emery EC，Young GT，McNaughton PA.HCN2 ion channels：an emerging role as the pacemakers of pain［J］.Trends Pharmacol Sci，2012，33（8）：456-463.

［7 ］Weng XC，Liu SJ.Role of HCN channels in the nervous system：membrane excitability and various modulations［J］.Chin J Appl Physiol.2014，30（6）：506-510.

［8 ］Matsuyoshi H， Masuda N， Chancellor MB，Erickson VL，Hirao Y，de Groat WC，et al.Expression of hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channels in rat dorsal root ganglion neurons innervating urinary bladder［J］.Brain Res，2006，1119（1）：115-123.

［9］Kouranova EV，Strassle BW，Ring RH，Bowlby MR，Vasilyev DV.Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel mRNA and protein expression in large versus small diameter dorsal root ganglion neurons：correlation with hyperpolarization-activated current gating［J］.Neuroscience，2008，153（4）：1008-1019.

［10 ］Ramakrishnan NA， Drescher MJ， Khan KM，Hatfield JS，Drescher DG.HCN1 and HCN2 proteins are expressed in cochlear hair cells：HCN1 can form a ternary complex with protocadherin 15 CD3 and F-actin-binding filamin A or can interact with HCN2［J］.J Biol Chem，2012，287（45）：37628-37646.

［11 ］AcostaC， McMullanS， DjouhriL， GaoL，Watkins R，Berry C，et al.HCN1 and HCN2 in rat DRG neurons：levels in nociceptors and non-nociceptors，NT3-dependence and influence of CFA-induced skin inflammation on HCN2 and NT3 expression［J/OL］.PLoS One（2012-12-07）.http：//www.plosone.org

［12 ］Kim YH，Holt JR.Functional contributions of HCN channels in the primary auditory neurons of the mouse inner ear［J］.J Gen Physiol，2013，142（3）：207-223.

［13 ］Xiao J，Nguyen TV，Ngui K，Strijbos PJ，Selmer IS，Neylon CB，et al.Molecular and functional analysis of hyperpolarisation-activated nucleotide-gated（HCN）channels in the enteric nervous system［J］.Neuroscience，2004，129（3）：603-614.

［14］Abbas SY，Ying SW，Goldstein PA.Compartmental distribution of hyperpolarization-activated cyclic-nucleotide-gated channel 2 and hyperpolarization-activated cyclic-nucleotide-gated channel 4 in thalamic reticular and thalamocortical relay neurons［J］.Neuroscience，2006，141（4）：1811-1825.

［15］Antal M，Papp I，Bahaerguli N，Veress G，Vereb G.Expression of hyperpolarization-activated and cyclic nucleotide-gated cation channel subunit 2 in axon terminals of peptidergic nociceptive primary sensory neurons in the superficial spinal dorsal horn of rats［J］.Eur J Neurosci，2004，19（5）：1336-1342.

［16 ］Huang T，F(xiàn)u B，Wang J，Wang B，Liu SJ，Weng XC.Effects of HCN2 in the development of peripheral neuropathic pain in rats［J］.Chin J Appl Physiol（中國應用生理學雜志），2017，33（4）：294-298，303.

［17 ］Takasu K，Ono H，Tanabe M.Spinal hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channels at primary afferent terminals contribute to chronic pain［J］.Pain，2010，151（1）：87-96.

［18 ］Du L，Wang SJ，Cui J，He WJ，Ruan HZ.The role of HCN channels within the periaqueductal gray in neuropathic pain［J］.Brain Res，2013，1500：36-44.

［19 ］He C，Chen F，Li B，Hu Z.Neurophysiology of HCN channels：from cellular functions to multiple regulations［J］.Prog Neurobiol，2014，112：1-23.

［20 ］Brown SM，Dubin AE，Chaplan SR.The role of pacemaker currents in neuropathic pain［J］.Pain Pract，2004，4（3）：182-193.

［21 ］Albertson AJ，Williams SB，Hablitz JJ.Regulation of epileptiform discharges in rat neocortex by HCN channels［J］.J Neurophysiol，2013，110（8）：1733-1743.

［22 ］Saito Y，Inoue T，Zhu G，Kimura N，Okada M，Nishimura M，et al.Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide gated channels：a potential molecular link between epileptic seizures and Aβ generation in Alzheimer′s disease［J/OL］.Mol Neurodegener（2012-10-03）.http：//www.molecularneurodegeneration.com/content/7/1/50

［23 ］Kitchigina V，Popova I，Sinelnikova V，Malkov A，Astasheva E，Shubina L，et al.Disturbances of septohippocampal theta oscillations in the epileptic brain：reasons and consequences［J］.Exp Neurol，2013，247：314-327.

［24 ］Friedman AK，Walsh JJ，Juarez B，Ku SM，Chaudhury D，Wang J，et al.Enhancing depression mechanisms in midbrain dopamine neurons achieves homeostatic resilience ［J］.Science，2014，344（6181）：313-319.

［25 ］Shah MM，Huang Z，Martinello K.HCN and Kv7（M-）channels as targets for epilepsy treatment［J］.Neuropharmacology，2013，69：75-81.

［26 ］Poolos NP.Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated（HCN）ion channelopathy in epilepsy［M/OL］//Noebels JL，Avoli M，Rogawski MA，Olsen RW，Delgado-Escueta AV.Jasper′s Basic Mechanisms of the Epilepsies.4th ed.Oxford:Oxford University Press,2012.http://depts.washington.edu/nplab/Publications_files/jaspers_2012.pdf

［27 ］Ji RR.Recent progress in understanding the mech anisms of pain and itch［J］.Neurosci Bull，2012，28（2）：89-90.

［28］Greene D，Kang S，Kosenko A，Hoshi N.Adrenergic regulation of HCN4 channel requires protein association with β2-adrenergic receptor［J］.J Biol Chem，2012，287（28）：23690-23697.

［29］Marcelin B，Lugo JN，Brewster AL，Liu Z，Lewis AS，McClelland S，et al.Differential dorso-ventral distributions of Kv4.2 and HCN proteins confer distinct integrative properties to hippocampal CA1 pyramidal cell distal dendrites［J］.J Biol Chem，2012，287（21）：17656-17661.

［30 ］Marcelin B，Liu Z，Chen Y，Lewis AS，Becker A，McClelland S，et al.Dorsoventral differences in intrinsic properties in developing CA1 pyramidal cells［J］.J Neurosci，2012，32（11）：3736-3747.

［31 ］Marni F，Wu S，Shah GM，Xu XP，Hackett AR，Xie C，et al.Normal-mode-analysis-guided investigation of crucial intersubunit contacts in the cAMP-dependent gating in HCN channels［J］.Biophys J，2012，103（1）：19-28.

［32］Scicchitano P，Carbonara S，Ricci G，Mandurino C，Locorotondo M，Bulzis G，et al.HCN channels and heart rate［J］.Molecules，2012，17（4）：4225-4235.

［33］Xu X，Marni F，Wu S，Su Z，Musayev F，Shrestha S，et al.Local and global interpretations of a diseasecausing mutation near the ligand entry path in hyperpolarization-activated cAMP-gated channel［J］.Structure，2012，20（12）：2116-2123.

［34］Brager DH，Lewis AS，Chetkovich DM，Johnston D.Short-and long-term plasticity in CA1 neurons from mice lacking H-channel auxiliary subunit TRIP8b［J］.J Neurophysiol，2013，110（10）：2350-2357.

［35］Wilkars W，Liu Z，Lewis AS，Stoub TR，Ramos EM，Brandt N，et al.Regulation of axonal HCN1 trafficking in perforant path involves expression of specific TRIP8b isoforms［J/OL］.PLoS One（2012-02-21）.http：//www.plosone.org

［36］Postea O，Biel M.Exploring HCN channels as novel drug targets［J］.Nat Rev Drug Discov，2011，10（12）：903-914.

［37］Hammelmann V，Zong X，Hofmann F，Michalakis S，Biel M.The cGMP-dependent protein kinaseⅡis an inhibitory modulator of the hyperpolarization-activated HCN2 channel［J/OL］.PLoS One（2011-02-14）.http：//www.plosone.org

［38］Postea O，Biel M.Exploring HCN channels as novel drug targets［J］.Nat Rev Drug Discov，2011，10（12）：903-914.

［39 ］Wu X，Liao L，Liu X，Luo F，Yang T，Li C.Is ZD7288 a selective blocker of hyperpolarizationactivated cyclic nucleotide-gated channel currents？［J］.Channels（Austin），2012，6（6）：438-442.

［40 ］Boehlen A，Kunert A，Heinemann U.Effects of XE991，retigabine，losigamone and ZD7288 on kainate-induced theta-like and gamma network oscillations in the rat hippocampus in vitro［J］.Brain Res，2009，1295：44-58.

［41 ］Emery EC，Young GT，Berrocoso EM，Chen L，McNaughton PA.HCN2 ion channels play a central role in inflammatory and neuropathic pain［J］.Science，2011，333（6048）：1462-1466.