瞬時受體電位6型通道在重大中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中病理生理機(jī)制及其作為藥物靶點(diǎn)的前景

屈忠偉，張 慧，王以政（軍事醫(yī)學(xué)研究院軍事認(rèn)知與腦科學(xué)研究所，北京 100850）

腦卒中、阿爾茨海默?。ˋlzheimer disease，AD）和癲癇等神經(jīng)系統(tǒng)疾病不僅嚴(yán)重影響患者的健康，而且造成極大的社會負(fù)擔(dān)。在中國，腦卒中已成為致殘率第一、致死率第二的疾病，每年用于該疾病的治療費(fèi)用＞100億；目前AD患者人數(shù)已＞800萬，預(yù)測2040年患病人數(shù)或?qū)⑦_(dá)到2600萬。癲癇因其致殘率高、病程長等特點(diǎn)亦嚴(yán)重?fù)p害患者生理及心理健康，對患者及家庭造成嚴(yán)重負(fù)擔(dān)。流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國癲癇患病率為0.4%～0.7%，由此推算目前在我國有600萬～900萬癲癇患者。臨床上70%～80%患者在服用抗癲癇藥物后癥狀得到控制，但仍有20%～25%的患者癥狀控制不理想，稱為難治性癲癇［1］。因此，重大腦疾病的防治在中國的腦研究計劃中占有重要組成部分。近年來大量研究發(fā)現(xiàn)，離子通道在神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色，逐漸成為開發(fā)防治神經(jīng)系統(tǒng)疾病的重要藥物靶點(diǎn)。

瞬時受體電位（transient receptor potential，TRP）通道最早在果蠅中被發(fā)現(xiàn)并克隆出來［2-3］。目前被發(fā)現(xiàn)的TRP家族成員已＞30種［4］，而根據(jù)序列同源性，這些成員又被分為7個亞家族：TRPC(TRP canonical），TRPV（TRP vanilloid），TRPM（TRP melastatin），TRPML（TRP muco-lipin），TRPN（TRP NOMP-C），TRPA（TRP ankyrin）和 TRPP（TRP polycystic）家族［5］。TRP亞基為六次跨膜蛋白，它們以同源或異源四聚體形式組成可通透Ca2+，Mg2+和Na+等離子的非選擇性陽離子通道。TRP通道在哺乳動物體內(nèi)廣泛分布，尤其是神經(jīng)系統(tǒng)。越來越多的研究表明，TRPC家族成員，尤其是TRPC6參與了許多中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central nervous system，CNS）疾病的發(fā)生發(fā)展過程。本文將簡述近年來TRPC6在CNS中的生理功能及其在疾病狀態(tài)下的病理改變，總結(jié)其作為藥物靶點(diǎn)治療疾病的前景。

1 TRPC6的激活方式及其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的生理功能

TRPC家族包括7個成員，根據(jù)序列同源性，又可分為3個亞家族，包括TRPC1/4/5，TRPC2和TRPC3/6/7［6］。其中 TRPC6亞基含有6個跨膜結(jié)構(gòu)域（S1～S6），在S5和S6之間形成孔區(qū)，以同源或異源四聚體形式組成非選擇性陽離子通道。該通道可通過多種形式被激活：①TRPC6通道可被磷脂酶C（phospholipase C，PLC）催化產(chǎn)生的甘油二酯（diacylglycerol，DAG）或其類似物1-油?；?2-乙?；?sn-丙三醇（1-oleoyl-2-acetyl-sn-glycerol，OAG）直接激活［7-9］；② Src家族成員Fyn也可使TRPC6磷酸化而使其活化［10］；③ TRPC6通道活性也受到細(xì)胞內(nèi)外鈣離子濃度的調(diào)節(jié)［11］，當(dāng)細(xì)胞外鈣離子濃度在0.1～1 mmol·L-1或細(xì)胞內(nèi)鈣離子在濃度20～200 nmol·L-1時，TRPC6通道活性上調(diào)；而當(dāng)胞內(nèi)外鈣離子濃度進(jìn)一步升高時，TRPC6通道活性受到抑制；④TRPC6通道也可被一些天然化合物激活，如貫葉金絲桃素（hyperforin）［12］。

TRPC6在神經(jīng)系統(tǒng)有著廣泛的表達(dá)，7～14 d齡大鼠的海馬組織中表達(dá)量達(dá)到峰值［13］，提示TRPC6在神經(jīng)元的發(fā)育階段發(fā)揮著重要的作用。近年研究發(fā)現(xiàn)，TRPC6參與諸多神經(jīng)發(fā)育的生理過程。

首先，TRPC6參與神經(jīng)元生長錐的導(dǎo)向［14］。腦內(nèi)神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的建立是大腦執(zhí)行功能的前提。因此，神經(jīng)元軸突如何精確地投射到下游功能核團(tuán)和靶細(xì)胞一直是神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的研究重點(diǎn)。研究表明，TRPC3和TRPC6介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流參與了腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）誘導(dǎo)的小腦顆粒細(xì)胞軸突生長錐的導(dǎo)向。在此過程中，阻斷TRPC通道活性，或敲低TRPC3和TRPC6表達(dá)后，均能有效地阻斷BDNF誘導(dǎo)的軸突生長錐導(dǎo)向。

其次，TRPC6促進(jìn)小腦顆粒細(xì)胞的存活［15］。體外培養(yǎng)的小腦顆粒細(xì)胞在血清剝奪條件下大量死亡，而外源性給予BDNF后細(xì)胞死亡明顯減少。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，這種保護(hù)作用是通過誘導(dǎo)TRPC3和TRPC6通道的開放、進(jìn)鈣并激活環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（cAMP-response element binding protein，CREB）信號通路實(shí)現(xiàn)的。在體敲除TRPC3或TRPC6，會導(dǎo)致小腦顆粒細(xì)胞的大量死亡。

第三，TRPC6參與樹突的生長和樹突棘形成［13，16］。樹突正常的生長發(fā)育和樹突棘的形成是神經(jīng)元之間建立突觸聯(lián)系、傳遞信號及神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)建立中重要的環(huán)節(jié)。而樹突發(fā)育異常則會影響智力發(fā)育或?qū)е录膊〉陌l(fā)生，如唐氏綜合征［17］和X染色體易裂癥［18］等。研究發(fā)現(xiàn)，大鼠海馬神經(jīng)元中TRPC6蛋白表達(dá)的高峰期與樹突最大生長期重合。體內(nèi)外實(shí)驗均證明，TRPC6過表達(dá)可增加鈣調(diào)蛋白激酶Ⅳ（calmodulin-dependent kinaseⅣ，CaMKⅣ）和CREB的磷酸化水平及樹突生長［13］。同時體外實(shí)驗發(fā)現(xiàn)，TRPC6表達(dá)被敲低后，樹突生長受到抑制。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元中，敲低TRPC6表達(dá)，樹突棘的數(shù)目明顯減少［13］。而在TRPC6轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)，海馬神經(jīng)元的樹突棘數(shù)量明顯增加，并且小鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力明顯增強(qiáng)［13］。

綜上所述，TRPC6的穩(wěn)定表達(dá)和激活在神經(jīng)元的存活、樹突的生長發(fā)育及神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的建立過程中都發(fā)揮著重要的作用。

2 TRPC6在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的病理改變

正常范圍內(nèi)的鈣離子濃度可調(diào)節(jié)神經(jīng)元的多種功能，如神經(jīng)元興奮性和突觸可塑性等，而鈣離子濃度異常則可能導(dǎo)致神經(jīng)元死亡［19-20］。作為Ca2+通道，TRPC6在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育階段發(fā)揮著重要的生理功能。此外，大量研究表明，TRPC6的表達(dá)異常參與許多神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理過程［21-22］。如在缺血性腦卒中，TRPC6表達(dá)下降；在AD病人腦組織中，TRPC6表達(dá)同樣下調(diào)；而癲癇病人皮質(zhì)中TRPC6表達(dá)上升。

2.1 TRPC6在缺血性腦卒中表達(dá)的變化

缺血性腦卒中具有高致殘率、高致死率和高復(fù)發(fā)率的特點(diǎn)。雖然大量研究表明，N-甲基-D-天冬氨酸（N-Methyl-D-aspartic acid receptor,NMDA）受體介導(dǎo)的大量鈣離子內(nèi)流是造成缺血性腦卒中過程中神經(jīng)元損傷的主要原因，但以NMDA受體為靶點(diǎn)開發(fā)的藥物因同時抑制了其正常生理功能，進(jìn)而產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用，臨床試驗結(jié)果并不理想［23-24］。在此基礎(chǔ)上，研究者提出通過激活或維持神經(jīng)元自身的促存活信號通路作為對抗神經(jīng)元損傷的新策略。

杜婉璐等［25］研究發(fā)現(xiàn)，在大鼠大腦中動脈局灶缺血模型中，半暗帶區(qū)TRPC6蛋白被NMDA受體介導(dǎo)激活的蛋白水解酶卡配因（calpain）切割，進(jìn)而發(fā)生降解，同時CREB信號通路被抑制。而無論是直接抑制卡配因的激活還是通過設(shè)計的小肽阻斷卡配因?qū)RPC6的切割，都可減少TRPC6的降解并維持CREB信號通路的激活，進(jìn)而減少缺血誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷，并且顯著提高模型大鼠術(shù)后的行為學(xué)評分和存活率。在隨后的進(jìn)一步研究中發(fā)現(xiàn)，TRPC6對神經(jīng)元的保護(hù)功能是通過抑制NMDA受體的活性實(shí)現(xiàn)的［26］。此外，也有研究發(fā)現(xiàn)，在缺血發(fā)生后，側(cè)腦室立即給予TRPC6激動劑貫葉金絲桃素同樣可減少TRPC6降解并激活CREB信號通路，減少腦組織梗死面積［27］。另外，TRPC6表達(dá)上調(diào)在大鼠視網(wǎng)膜缺血模型中同樣對視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞起到保護(hù)作用［28］。相反的是，Chen等［29］研究發(fā)現(xiàn)，在小鼠腦皮質(zhì)區(qū)缺血后，TRPC6的表達(dá)增加誘導(dǎo)的Na+內(nèi)流激活了NMDA受體，造成胞內(nèi)鈣超載和神經(jīng)元損傷。而敲除TRPC6則可減少缺血誘導(dǎo)的神經(jīng)元死亡。雖然，目前造成這些差異的原因尚不明確，但可肯定的是，在缺血性腦卒中過程中，維持TRPC6蛋白的穩(wěn)定表達(dá)及正常生理功能可抑制缺血誘導(dǎo)的NMDA受體過度活化、減少鈣離子內(nèi)流，維持神經(jīng)元內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)，進(jìn)而減少缺血造成的神經(jīng)元損傷。

2.2 TRPC6在阿爾茨海默病中表達(dá)的變化

β淀粉樣蛋白（β-amyloid protein，Aβ）的大量產(chǎn)生被認(rèn)為與AD發(fā)生相關(guān)。Aβ由β分泌酶和γ分泌酶切割淀粉樣前體蛋白（amyloid precursor protein，APP）產(chǎn)生，而α分泌酶切割A(yù)PP則產(chǎn)生神經(jīng)營養(yǎng)因子可溶性APPα（soluble APPα，sAPPα）［30］。γ分泌酶除切割底物APP外，還包括Notch和鈣黏蛋白（cadherin）等等［31］。因此，以抑制γ分泌酶活性為靶點(diǎn)開發(fā)的藥物，會引起包括認(rèn)知障礙和免疫系統(tǒng)異常等一系列嚴(yán)重的副作用［32］。能特異性地抑制γ分泌酶對APP的切割而不影響γ分泌酶對其他底物的作用成為當(dāng)前AD藥物開發(fā)的一個難點(diǎn)。

關(guān)于鈣通道與胞內(nèi)鈣離子濃度對Aβ形成的研究已有大量報道。如有研究發(fā)現(xiàn)，突觸上NMDA受體的激活可誘導(dǎo)α分泌酶切割A(yù)PP，從而減少Aβ的形成［33］。TRPC6作為鈣離子通道，具有促進(jìn)神經(jīng)元樹突的生長和樹突棘的形成及促神經(jīng)元存活，并增強(qiáng)小鼠空間學(xué)習(xí)和記憶能力［13，15-16］。此外也有研究發(fā)現(xiàn)，γ分泌酶的重要組成成分早老素2（presenilin 2）影響TRPC6介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流入HEK293細(xì)胞［34］。提示TRPC6可能參與了AD的病理過程。王軍峰等［35］在體外研究中發(fā)現(xiàn)，TRPC6蛋白與APP結(jié)合后阻斷了γ分泌酶對APP切割位點(diǎn)的識別，從而以不依賴自身通道活性的方式，特異性地減少了Aβ的產(chǎn)生，同時不影響γ分泌酶對其他底物的切割。隨后他們鑒定出TRPC6蛋白487-508位氨基酸序列阻斷了γ分泌酶對APP的切割，并合成了帶有穿膜肽序列及該段序列的融合肽段。在APP/PS1轉(zhuǎn)基因的AD模型小鼠體內(nèi)注射該肽段，在不影響γ分泌酶對Notch等底物切割的條件下，可有效減少Aβ的產(chǎn)生和老年斑的形成，并顯著提高小鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力。在隨后的大樣本、多中心臨床研究中發(fā)現(xiàn)，與無認(rèn)知功能障礙的對照組相比，輕度認(rèn)知障礙患者及不同臨床分期的AD患者血液中TRPC6的mRNA水平均明顯降低。對AD患者死后的額葉和顳葉組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)，TRPC6表達(dá)明顯減少［36］。這些結(jié)果提示，外周血液中TRPC6的mRNA水平可作為AD早期臨床診斷的生物標(biāo)志物，并通過ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，檢測血液中TRPC6的mRNA水平與檢測腦脊液中Aβ42具有相似的診斷精確性。

2.3 TRPC6在癲癇中表達(dá)的變化

癲癇是一種以癇性發(fā)作為主要特征的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，其神經(jīng)病理基礎(chǔ)為神經(jīng)元異常興奮和大腦神經(jīng)元異常同步放電。病因包括腦損傷、腦卒中、顱內(nèi)腫瘤和顱內(nèi)感染等。癲癇發(fā)作可導(dǎo)致皮質(zhì)、杏仁核及海馬區(qū)神經(jīng)元死亡，并伴有海馬硬化（hippocampal sclerosis，HS）、苔蘚纖維出芽（mossy fiber sprouting，MFS）和突觸重建等腦結(jié)構(gòu)和功能的變化。已有大量研究表明，鈣離子通道參與癲癇的發(fā)病過程，例如L型鈣通道的抑制劑尼卡地平（nicardipine）無論在體內(nèi)還是在體外的癲癇模型中都可有效阻斷MFS。TRPC6作為鈣離子通道，一方面，在海馬區(qū)，尤其是齒狀回，具有豐富的表達(dá)［37］；另一方面，又具有參與神經(jīng)元軸突生長錐導(dǎo)向、促進(jìn)樹突生長和樹突棘形成的能力。提示TRPC6可能參與了癲癇的病理過程。

目前，關(guān)于TRPC6在癲癇的病理過程中的功能尚無統(tǒng)一的結(jié)論，主要觀點(diǎn)有2種：①TRPC6可能參與了癲癇形成過程。Zeng等［38］研究發(fā)現(xiàn)，在匹羅卡品（pilocarpine）誘導(dǎo)的持續(xù)癲癇模型小鼠的海馬CA3區(qū)，TRPC3和TRPC6的表達(dá)都有明顯的升高。在此過程中通過抗體中和TRPC3可減少M(fèi)FS，而用抗體中和TRPC6則可減少CA3區(qū)錐體神經(jīng)元的樹突分支數(shù)量和樹突棘的數(shù)目。此外，在患有難治性癲癇患者的腦皮質(zhì)樣本中，同樣發(fā)現(xiàn)TRPC3和TRPC6的表達(dá)明顯升高。這些結(jié)果提示，TRPC3可能參與了匹羅卡品誘導(dǎo)的MFS，TRPC6參與了突觸重建的過程。Zheng等［39］研究發(fā)現(xiàn)，構(gòu)成頑固性癲癇重要病因之一的局灶皮質(zhì)發(fā)育不良癥（focal cortical dysplasia，F(xiàn)CD）患者皮質(zhì)組織中TRPC6，BDNF和CaMKⅣ表達(dá)明顯增加。上述結(jié)果提示，TRPC6可能參與了癲癇的形成過程。②TRPC6抑制神經(jīng)元對癲癇刺激的敏感性。Kim等［40］發(fā)現(xiàn)，在匹羅卡品誘導(dǎo)的癲癇模型大鼠海馬CA1、CA3和齒狀回TRPC6的表達(dá)水平是降低的，并參與了癲癇誘導(dǎo)的神經(jīng)元死亡。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，TRPC6的穩(wěn)定表達(dá)可降低神經(jīng)元對驚厥刺激的敏感性及對抗神經(jīng)元損傷。

綜上，TRPC6很可能同時參與癲癇的形成過程及癲癇誘導(dǎo)的神經(jīng)元死亡過程。但其具體機(jī)制仍不明確，可能的原因為海馬區(qū)不同的細(xì)胞亞群參與了癲癇誘導(dǎo)的不同的病理過程［41］，但有待進(jìn)一步的研究。

3 TRPC6作為藥物靶點(diǎn)的研究現(xiàn)狀

離子通道具有調(diào)節(jié)膜電位、影響基因表達(dá)等能力，參與機(jī)體許多重要生理功能，如信號傳導(dǎo)、肌肉伸縮、感覺傳導(dǎo)、血壓調(diào)節(jié)和細(xì)胞增殖等。而離子通道的表達(dá)或活性異常則會誘發(fā)多種系統(tǒng)疾病，如循環(huán)系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)等。因此，將離子通道作為藥物開發(fā)靶點(diǎn)治療疾病存在巨大潛力。

TRPC6參與許多CNS疾病的病理過程。特異性地控制TRPC6的表達(dá)調(diào)節(jié)，有可能減少或減緩疾病的發(fā)生發(fā)展。雖然，目前關(guān)于TRPC6異常病理變化的機(jī)制還不明確，但可以總結(jié)得出主要有以下2種方式：①通過影響通道活性，介導(dǎo)下游信號通路的激活；②通過其自身蛋白表達(dá)量變化影響相關(guān)酶與底物的結(jié)合?；谏鲜?種假說，TRPC6作為藥物靶點(diǎn)進(jìn)行藥物開發(fā)可從以下3個方面探索。

第一，篩選、開發(fā)TRPC6特異性的激動劑和抑制劑。研究表明，可通過調(diào)節(jié)TRPC6離子通道活性對疾病進(jìn)行干預(yù)，但目前尚無TRPC6特異性的激動劑和抑制劑。研究較明確且廣泛應(yīng)用的TRPC6非特異性激動劑僅有貫葉金絲桃素［42］。在貫葉金絲桃素對上述3種疾病的研究報道中，多數(shù)報道認(rèn)為，其對于缺血性卒中具有保護(hù)作用，但也有研究得到相反結(jié)論。因此，對于貫葉金絲桃素治療缺血性卒中仍有待進(jìn)一步探究。對于AD而言，貫葉金絲桃素能夠減少Aβ的沉積及其誘發(fā)的神經(jīng)毒性，從而減輕認(rèn)知損傷。目前對于貫葉金絲桃素治療癲癇的研究同樣存在爭議，但因研究較少尚無定論。研究發(fā)現(xiàn)，貫葉金絲桃素除激活TRPC6外，還具有質(zhì)子載體的性質(zhì)，可誘導(dǎo)線粒體釋放鋅離子和鈣離子等［43-44］。另外，也有一些研究人員試圖從化合物庫中篩選TRPC6特異性的激動劑。Sawamura等人從8000個化合物中篩選得到了兩個TRPC6的激動劑PPZ1和PPZ2，而且這兩個化合物具有促進(jìn)神經(jīng)元樹突生長和促進(jìn)神經(jīng)元存活的能力［45］。雖然實(shí)驗結(jié)果顯示這兩個化合物還可以激活TRPC3和TRPC7，但為進(jìn)一步的開發(fā)提供了方向。

第二，以TRPC6為靶點(diǎn)開發(fā)肽類藥物。多肽類藥物在臨床上已早有應(yīng)用，從胰島素到谷胱甘肽，再至催產(chǎn)素和內(nèi)啡肽等。在大鼠局灶腦缺血模型中，使用設(shè)計合成的小肽阻斷卡配因?qū)RPC6的切割可有效保護(hù)缺血誘導(dǎo)的腦損傷。同樣，在AD小鼠模型中，通過小肽阻斷γ分泌酶對APP的作用同樣可減少Aβ的產(chǎn)生，提高小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力。這些結(jié)果提示，肽類藥物在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中同樣可發(fā)揮良好的效果。當(dāng)然，除了制備困難、抗原性及易降解等缺點(diǎn)，神經(jīng)系統(tǒng)肽類藥物的開發(fā)還面臨著給藥方式、血腦屏障通透性等問題，需要在進(jìn)一步的研究中解決。

第三，以調(diào)控TRPC6表達(dá)的信號通路為靶點(diǎn)開發(fā)藥物。TRPC6在神經(jīng)元中的穩(wěn)定表達(dá)對維持神經(jīng)系統(tǒng)的生理功能至關(guān)重要。研究發(fā)現(xiàn)，TRPC6在神經(jīng)元中的表達(dá)受到興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸的調(diào)控［46］。一方面，谷氨酸可通過NMDA受體1型亞基（NMDA receptor subunit 1,NR1）和2A型亞基（NR2A）組成的離子通道（NR1/NR2A）鈣神經(jīng)素信號通路誘導(dǎo)TRPC6轉(zhuǎn)錄和翻譯增加；另一方面，谷氨酸又可通過NR1和2B型亞基（NR2B）組成的離子通道（NR1/NR2B）激活卡配因介導(dǎo)TRPC6的降解。因此可以針對調(diào)控TRPC6表達(dá)的信號通路開發(fā)藥物，從而影響TRPC6在神經(jīng)元中的表達(dá)，進(jìn)而達(dá)到治療目的。但目前研究尚少，潛在風(fēng)險仍待進(jìn)一步評估。

4 展望

綜上，TRPC6在正常生理狀態(tài)下具有促進(jìn)神經(jīng)元軸突生長錐導(dǎo)向、樹突生長和興奮性突觸形成等功能。同時大量研究表明，TRPC6的病理生理學(xué)改變在缺血性腦卒中、AD和癲癇等CNS疾病中亦發(fā)揮著重要作用。研究表明，干預(yù)TRPC6的表達(dá)及通道活性可影響缺血造成的神經(jīng)元死亡、Aβ產(chǎn)生及癲癇形成過程，有望成為治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病新靶點(diǎn)。雖然，新一步闡明TRPC6在相關(guān)神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的病理機(jī)制、增加藥物特異性和減少藥物副作用等問題還有待深入研究，但是，從篩選、開發(fā)TRPC6特異性激動劑和抑制劑、以TRPC6為靶點(diǎn)開發(fā)肽類藥物及以調(diào)控TRPC6表達(dá)的信號通路這3個方面探索藥物開發(fā)存在巨大潛力。

［1］Eadie MJ.Shortcomings in the current treatment of epilepsy［J］.Expert Rev Neurother，2012，12（12）：1419-1427.

［2 ］Cosens DJ，Manning A.Abnormal electroretinogram from a Drosophila mutant［J］.Nature，1969，224（5216）：285-287.

［3 ］Montell C，Rubin GM.Molecular characterization of the Drosophila TRP locus：a putative integral membrane protein required for phototransduction［J］.Neuron，1989，2（4）：1313-1323.

［4 ］Pedersen SF，Owsianik G，Nilius B.TRP channels：an overview［J］.Cell Calcium，2005，38（3-4）：233-252.

［5 ］Pan Z，Yang H，Reinach PS.Transient receptor potential（TRP）gene superfamily encoding cation channels［J］.Hum Genomics，2011，5（2）：108-116.

［6 ］Clapham DE.TRP channels as cellular sensors［J］.Nature，2003，426（6966）：517-524.

［7 ］Rohacs T.Regulation of transient receptor potential channels by the phospholipase C pathway［J］.Adv Biol Regul，2013，53（3）：341-455.

［8 ］Dietrich A，Gudermann T.TRPC6［J］.Handb Exp Pharmacol，2007，179：125-141.

［9］Hofmann T，Obukhov AG，Schaefer M，Harteneck C，Gudermann T，Schultz G.Direct activation of human TRPC6 and TRPC3 channels by diacylglycerol［J］.Nature，1999，397（6716）：259-263.

［10 ］Hisatsune C，Kuroda Y，Nakamura K，Inoue T，Nakamura T，Michikawa T，et al.Regulation of TRPC6 channel activity by tyrosine phosphorylation［J］.J Biol Chem，2004，279（18）：18887-18894.

［11 ］Shi J，Mori E，Mori Y，Mori M，Li J，Ito Y，et al.Multiple regulation by calcium of murine homologues of transient receptor potential proteins TRPC6 and TRPC7 expressed in HEK293 cells［J］.J Physiol，2004，561（Pt 2）：415-432.

［12 ］Leuner K，Kazanski V，Müller M，Essin K，Henke B，Gollasch M，et al.Hyperforin—a key constituent of St.John′s wort specifically activates TRPC6 channels［J］.FASEB J，2007，21（14）：4101-4111.

［13 ］Tai Y，F(xiàn)eng S，Ge R，Du W，Zhang X，He Z，et al.TRPC6 channels promote dendritic growth via the CaMK Ⅳ-CREB pathway［J］.J Cell Sci，2008，121（Pt 14）：2301-2307.

［14 ］Li Y，Jia YC，Cui K，Li N，Zheng ZY，Wang YZ，et al.Essential role of TRPC channels in the guidance of nerve growth cones by brain-derived neurotrophic factor［J］.Nature，2005，434（7035）：894-898.

［15 ］Jia Y，Zhou J，Tai Y，Wang Y.TRPC channels promote cerebellar granule neuron survival［J］.Nat Neurosci，2007，10（5）：559-567.

［16］Zhou J，Du W，Zhou K，Tai Y，Yao H，Jia Y，et al.Critical role of TRPC6 channels in the formation of excitatory synapses［J］.Nat Neurosci，2008，11（7）：741-743.

［17］Becker LE，Armstrong DL，Chan F.Dendritic atrophy in children with Down′s syndrome［J］.Ann Neurol，1986，20（4）：520-526.

［18 ］Dierssen M，Ramakers GJ.Dendritic pathology in mental retardation：from molecular genetics to neurobiology［J］.Genes Brain Behav，2006，5（Suppl 2）：S48-S60.

［19 ］Marty A.The physiological role of calcium-dependent channels［J］.Trends Neurosci，1989，12（11）：420-424.

［20］Orrenius S，Zhivotovsky B，Nicotera P.Regulation of cell death：the calcium-apoptosis link［J］.Nat Rev Mol Cell Biol，2003，4（7）：552-565.

［21 ］Bezprozvanny I.Calcium signaling and neurodegenerative diseases［J］.Trends Mol Med，2009，15（3）：89-100.

［22］Pchitskaya E，Popugaeva E，Bezprozvanny I.Calcium signaling and molecular mechanisms underlying neurodegenerative diseases［J/OL］.Cell Calcium，2017（2017-06-30）.http：//dx.doi.org/10.1016/j.ceca.2017.06.008

［23 ］Hoyte L，Barber PA，Buchan AM，Hill MD.The rise and fall of NMDA antagonists for ischemic stroke［J］.Curr Mol Med，2004，4（2）：131-136.

［24］Ginsberg MD.Neuroprotection for ischemic stroke：past，present and future［J］.Neuropharmacology，2008，55（3）：363-389.

［25 ］Du W，Huang J，Yao H，Zhou K，Duan B，Wang Y.Inhibition of TRPC6 degradation suppresses ischemic brain damage in rats［J］.J Clin Invest，2010，120（10）：3480-3492.

［26 ］Li H，Huang J，Du W，Jia C，Yao H，Wang Y.TRPC6 inhibited NMDA receptor activities and protected neurons from ischemic excitotoxicity［J］.J Neurochem，2012，123（6）：1010-1018.

［27 ］Lin Y，Zhang JC，F(xiàn)u J，Chen F，Wang J，Wu ZL，et al.Hyperforin attenuates brain damage induced by transientmiddle cerebralartery occlusion（MCAO）in rats via inhibition of TRPC6 channels degradation［J］.J CerebBloodFlow Metab，2013，33（2）：253-262.

［28 ］Wang X，Teng L，Li A，Ge J，Laties AM，Zhang X.TRPC6 channel protects retinal ganglion cells in a rat model of retinal ischemia/reperfusion-induced cell death［J］.Invest Ophthalmol Vis Sci，2010，51（11）：5751-5758.

［29 ］Chen J，Li Z，Hatcher JT，Chen QH，Chen L，Wurster RD，et al.Deletion of TRPC6 attenuates NMDA receptor-mediated Ca2+entry and Ca2+-induced neurotoxicity following cerebral ischemia and oxygenglucose deprivation［J/OL］.Front Neurosci，2017，11：138（2017-03-28）.http：//www.frontiersin.org

［30 ］De Strooper B，Vassar R，Golde T.The secretases：enzymes with therapeutic potential in Alzheimer disease［J］.Nat Rev Neurol，2010，6（2）：99-107.

［31］Haapasalo A，Kovacs DM.The many substrates of presenilin/γ-secretase［J］.J Alzheimers Dis，2011，25（1）：3-28.

［32 ］Doody RS，Raman R，F(xiàn)arlow M，Iwatsubo T，Vellas B，Joffe S， et al.A phase 3 trial of semagacestat for treatment of Alzheimer′s disease［J］.N Engl J Med，2013，369（4）：341-350.

［33 ］Hoey SE，Williams RJ，Perkinton MS.Synaptic NMDA receptor activation stimulates alpha-secretase amyloid precursor protein processing and inhibits amyloid-beta production［J］.J Neurosci，2009，29（14）：4442-4460.

［34］Lessard CB，Lussier MP，Cayouette S，Bourque G，Boulay G.The overexpression of presenilin2 and Alzheimer′s-disease-linked presenilin2 variants influences TRPC6-enhanced Ca2+entry into HEK293 cells［J］.Cell Signal，2005，17（4）：437-445.

［35］Wang J，Lu R，Yang J，Li H，He Z，Jing N，et al.TRPC6 specifically interacts with APP to inhibit its cleavage by γ-secretase and reduce Aβ production［J/OL］.Nat Commun，2015，6：8876（2015-11-19）.http：//www.nature.com/naturecommunications

［36］Lu R,Wang J,Tao R,Wang J,Zhu T,Guo W,et al.Reduced TRPC6 mRNA levels in the blood cells of patients with Alzheimer′s disease and mild cognitive impairment［J］.Molecular psychiatry,2017（2017-07-11）.http://www.nature.com/doifinder/10.1038/mp.2017.136

［37 ］Nagy GA，Botond G，Borhegyi Z，Plummer NW，F(xiàn)reund TF，Hájos N.DAG-sensitive and Ca2+permeable TRPC6 channels are expressed in dentate granule cells and interneurons in the hippocampal formation［J］.Hippocampus，2013，23（3）：221-232.

［38］Zeng C，Zhou P，Jiang T，Yuan C，Ma Y，F(xiàn)eng L，et al.Upregulation and diverse Roles of TRPC3 and TRPC6 in synapticreorganization ofthe mossy fiber pathway in temporal lobe epilepsy［J］.Mol Neurobiol，2015，52（1）：562-572.

［39 ］Zheng DH，Guo W，Sun FJ，Xu GZ，Zang ZL，Shu HF，et al.Expression of TRPC6 and BDNF in cortical lesions from patients with focal cortical dysplasia［J］.J Neuropathol Exp Neurol，2016，75（8）：718-730.

［40 ］Kim YJ，Kang TC.The role of TRPC6 in seizure susceptibility and seizure-related neuronal damage in the rat dentate gyrus［J］.Neuroscience，2015，307：215-330.

［41］Deng W，Mayford M，Gage FH.Selection of distinct populations of dentate granule cells in response to inputs as a mechanism for pattern separation in mice［J/OL］.Elife，2013，2：e00312（2013-03-20）.https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3602954/pdf/elife00312.pdf

［42］W?lfle U， Seelinger G， Schempp CM.Topical application of St.John′s wort（Hypericum perforatum）［J］.Planta Med，2014，80（2-3）：109-120.

［43 ］Tu P，Gibon J，Bouron A.The TRPC6 channel activator hyperforin induces the release of zinc and calcium from mitochondria［J］.J Neurochem，2010，112（1）：204-213.

［44］Sell TS，Belkacemi T，F(xiàn)lockerzi V，Beck A.Protonophore properties of hyperforin are essential for its pharmacological activity［J］.Sci Rep，2014，4：7500（2014-12-16）.https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4266863/pdf/srep07500.pdf

［45］Sawamura S,Hatano M,Takada Y,Hino K,Kawamura T,Tanikawa J,et al.Screening of Transient Receptor Potential Canonical Channel Activators Identifies Novel Neurotrophic Piperazine Compounds［J］.Molecular pharmacology,2016,89(3):348-363.

［46 ］Qu Z，Wang Y，Li X，Wu L，Wang Y.TRPC6 expression in neurons is differentially regulated by NR2A-and NR2B-containing NMDA receptors［J］.J Neurochem，2017，143（3）：282-293.