血清標(biāo)本保存溫度對乙型肝炎病毒五項指標(biāo)定量測定的影響

韓來紅 韓 敏 焦 湃 鐘奇峰

（內(nèi)蒙古呼倫貝爾市人民醫(yī)院檢驗科，內(nèi)蒙古 呼倫貝爾 021008）

血清標(biāo)本保存溫度對乙型肝炎病毒五項指標(biāo)定量測定的影響

韓來紅 韓 敏 焦 湃 鐘奇峰

（內(nèi)蒙古呼倫貝爾市人民醫(yī)院檢驗科，內(nèi)蒙古 呼倫貝爾 021008）

目的分析不同溫度保存下的血清標(biāo)本對乙型肝炎病毒五項指標(biāo)半定量測定的影響。方法采集院內(nèi)進(jìn)行乙型肝炎病毒五項指標(biāo)檢查的40例患者的血清標(biāo)本，一式兩份，分別保存在4 ℃和-20 ℃，于不同時間段，采用羅氏E601型號化學(xué)發(fā)光儀定量測定乙型肝炎五項指標(biāo)，并行組內(nèi)比較。結(jié)果在4 ℃環(huán)境，14 d，乙型肝炎病毒e抗原和核心抗體結(jié)果發(fā)生變化，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；而-20 ℃連續(xù)保存6月均未見明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。結(jié)論不同保存溫度對乙型肝炎兩對半定量測定結(jié)果可產(chǎn)生較大影響，相對而言，低溫保存（-20 ℃）環(huán)境下，結(jié)果影響較小。

乙型肝炎病毒；血清；保存溫度

乙型肝炎是由于乙型肝炎病毒（HBV）引起的慢性傳染疾病[1]，其易演變?yōu)橐倚透窝赘斡不?，最終發(fā)展為肝癌，對患者及其家庭帶來嚴(yán)重影響。早預(yù)防、早診斷、早治療是控制本病的關(guān)鍵，乙型肝炎病毒血清學(xué)標(biāo)志物包括：乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒表面抗體（抗-HBs）、乙型肝炎病毒e抗體（抗-HBe）、乙型肝炎病毒核心抗體（抗-HBc）五項，是乙型肝炎病毒感染常用檢測項目[2]，在臨床檢測過程，兩對半血清樣品常存儲于冰箱中集中檢測，不同溫度下存儲時間對樣品是否會產(chǎn)生干擾，保存多久后檢測結(jié)果會出現(xiàn)較大差異，是臨床檢測人員常需關(guān)注的問題。本文由此出發(fā)，考察不同溫度下，血清乙型肝炎病毒五項樣品的穩(wěn)定性，結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2015年2月至2016年4月來我院就診的患者HBsAg、HBeAg、抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc分別陽性的血清樣本40例，排除嚴(yán)重溶血、高脂濁、高黃疸樣本。

1.2 方法：檢測人員均空腹采集靜脈血5 mL，采用羅氏化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測乙型肝炎五項指標(biāo)，剩余血液（＞4 mL）分離血清后均分到A、B組，每組血清樣品再次均分為4份，A組樣品保存于（4±2）℃環(huán)境，分別于1 d、7 d、14 d、30 d測定乙型肝炎五項指標(biāo)；B組樣品保存于（-20±2）℃環(huán)境，分別于1 d、30 d、90 d、180 d測定乙型肝炎五項指標(biāo)。所有標(biāo)本均加塞防止水分蒸發(fā)，所有操作均由同一組人員按照標(biāo)準(zhǔn)操作完成。

為排除樣品取出后檢測過程溫度變化的影響，A組實驗前，在室溫平衡半小時后檢測，而B組則放置恒溫（37 ℃）水浴箱待血清融化后再行檢測。

1.3 陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：HBsAg≥0.05 IU/mL為陽性，抗-HBs≥l0 mIU/mL為陽性，其余3項指標(biāo)均由S/CO值表示（S為標(biāo)本的吸光度值，CO為cut off值），抗-HBe以S/CO≤1為陽性，其余兩項則以S/CO≥1為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理：應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x-±s）的形式表示，不同時間段樣品含量比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用t檢驗，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 A組保存時間對結(jié)果影響：A組HBsAg、HBeAg、抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc組內(nèi)比較，均經(jīng)F檢驗，結(jié)果顯示，HBeAg，抗-HBc不同時間段，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與第1天結(jié)果比較顯示，兩組指標(biāo)均在14 d后出現(xiàn)明顯變化（P＜0.05），而HBsAg，抗-HBs，抗-HBe指標(biāo)14 d未見明顯變化（P＞0.05），結(jié)果見表1。

2.2 B組保存時間對結(jié)果影響：B組HBsAg、HBeAg、抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc組內(nèi)比較，均經(jīng)F檢驗，第1～120天未見明顯變化（P＞0.05），結(jié)果見表2。

3 討 論

HBV為球形雙股環(huán)狀DNA病毒，由HBsAg、HBcAg和HBeAg共同組成，當(dāng)其侵入人體時，HBsAg最先出現(xiàn)于血液中，故當(dāng)HBsAg陽性即可提示HBV感染，而HBcAg包裹于病毒外膜，不易檢出，但可通過抗-HBc加以分析。目前乙型肝炎五項半定量檢測常用來動態(tài)檢測患者療效及病情而被廣泛用于臨床，但在血清樣本檢測過程由于沒有統(tǒng)一規(guī)定，多數(shù)樣本是保存在冰箱（2～8 ℃）集中檢測，隨著醫(yī)患問題加劇，血清樣品常需長期保存以方便復(fù)查，故此，血清樣本保存時間、保存溫度成為檢驗人員關(guān)注的重點之一。本組研究結(jié)果顯示，保存在4 ℃環(huán)境下，與第1天比較，血清抗-HBc和HBeAg第14天均發(fā)生明顯變化（P＜0.05），其具體改變機(jī)制目前尚不可知，推測是因保存過程中一些細(xì)菌分泌的蛋白對抗原、抗體有一定分解作用引起；而在-20 ℃環(huán)境下，乙型肝炎五項指標(biāo)放置180 d均未見明顯變化（P＞0.05），這一結(jié)果與朱廣君[4]研究基本一致。

由以上結(jié)果我們可知，乙型肝炎五項結(jié)果血清若存放普通冰箱，建議在1周內(nèi)完成集中檢測，若時間超出，建議存放-20 ℃冰箱以備檢測，而對于存放-20 ℃中的復(fù)檢樣品，為防止物資浪費建議6個月內(nèi)完成檢測，若需更長時間，建議選擇更低溫度下（如-80 ℃）保存。

[1] 王碧玉,黃燕妮.乙肝兩對半定量,乙肝DNA定量與乙肝前S1抗原聯(lián)合檢測的臨床意義[J].海南醫(yī)學(xué),2016,27(7):55.

[2] 魏炘.淺談乙肝二對半定量檢測的臨床意義[J].大家健康,2014,9(17):162.

[3] 胡建慧,殷網(wǎng)虎.血清標(biāo)本的保存溫度和時間對乙型肝炎兩對半定量測定的影響[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2007,4(9):810-811.

[4] 朱廣君.不同條件的血清標(biāo)本對乙肝病毒五項指標(biāo)定量結(jié)果的影響[J].醫(yī)藥前沿,2012,2(17):47-48.

R512.6+2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B 文章編號：1671-8194（2017）30-0065-02