試述高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室的安全防范

孟軻音，王承宇，萬(wàn)忠海

試述高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室的安全防范

孟軻音，王承宇，萬(wàn)忠海

高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室是專門(mén)從事高致病性病原微生物研究的技術(shù)平臺(tái)，因此，高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室的安全防范工作在實(shí)驗(yàn)室管理中占有極其重要的地位。本文結(jié)合工作實(shí)際從安全防范意識(shí)、安全防范措施及實(shí)驗(yàn)室資源3個(gè)方面加以闡述和探討。

高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室；安全防范意識(shí)；安全防范措施；實(shí)驗(yàn)室資源

高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室是指防護(hù)等級(jí)為三級(jí)和四級(jí)的生物安全實(shí)驗(yàn)室，是專門(mén)從事烈性傳染病和新發(fā)現(xiàn)外來(lái)傳染病的病原研究及防治藥物篩選的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)（如感染動(dòng)物、建立動(dòng)物模型、藥物篩選）工作的技術(shù)平臺(tái)[1-2]。隨著近年來(lái)全球新發(fā)突發(fā)傳染病的不斷暴發(fā)，人類社會(huì)公共健康和環(huán)境受到嚴(yán)重威脅，烈性傳染病的研究也日益得到國(guó)際社會(huì)的高度重視。世界各國(guó)紛紛加大高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室建設(shè)力度，同時(shí)也紛紛出臺(tái)相應(yīng)建筑建設(shè)規(guī)范及實(shí)驗(yàn)室管理相應(yīng)法律法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)[3]。盡管如此，實(shí)驗(yàn)室事故事件也時(shí)有發(fā)生[4]。因此，單純依靠外部政策及建筑設(shè)施是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，依靠外部政策及建筑設(shè)施的同時(shí)應(yīng)加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部管理才能從根本上解決此類問(wèn)題的發(fā)生。本文從在實(shí)驗(yàn)室管理工作中占有重要地位的安全防范工作角度出發(fā)，在如何正確培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室工作人員的安全防范意識(shí)、如何采取恰當(dāng)?shù)陌踩婪洞胧┮约叭绾谓鉀Q實(shí)驗(yàn)室資源缺乏帶來(lái)的問(wèn)題方面加以闡述。

1 正確培養(yǎng)安全防范意識(shí)

思想指導(dǎo)行動(dòng)，意識(shí)決定行動(dòng)，能正確識(shí)別和估量危害發(fā)生的方式和程度才能采取正確合理的防范措施。一般來(lái)講，培養(yǎng)生物安全防范意識(shí)的方法主要是采取安全知識(shí)宣傳和普及教育的方法[5]。但如果采取千篇一律的宣傳和教育勢(shì)必會(huì)存在許多問(wèn)題。人員知識(shí)層次不同，教育背景不同，行為習(xí)慣不同甚至性格不同均會(huì)導(dǎo)致安全防范意識(shí)不同。

目前，在實(shí)際工作中生物安全實(shí)驗(yàn)室，尤其是高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室工作人員的安全防范意識(shí)主要存在以下四方面問(wèn)題：一是由于無(wú)知導(dǎo)致防范意識(shí)淡薄或毫無(wú)防范意識(shí)；二是由于心理素質(zhì)問(wèn)題造成思想高度緊張，防范意識(shí)過(guò)強(qiáng)，導(dǎo)致遇事即恐慌；三是由于存在某種僥幸心理或權(quán)宜之計(jì)遇事瞞報(bào)漏報(bào)，導(dǎo)致重大生物安全事故發(fā)生；四是由于工作年限較長(zhǎng)，安全防范意識(shí)逐漸淡漠，也會(huì)導(dǎo)致事故的發(fā)生。

針對(duì)以上存在的問(wèn)題，在培養(yǎng)安全防范意識(shí)上應(yīng)采取將實(shí)驗(yàn)室相關(guān)人員進(jìn)行分類并開(kāi)展持續(xù)宣傳和教育的方式進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室相關(guān)人員大體上可分為實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員、管理人員、后勤保障人員及外來(lái)人員。

2 采取恰當(dāng)?shù)陌踩婪洞胧?/h2>

為了確保高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室的安全運(yùn)行，僅僅有安全防范意識(shí)是不夠的，還要在識(shí)別危險(xiǎn)的前提下采取相應(yīng)的防范措施。安全防范措施大體上可分為兩大類：一是常規(guī)性安全防范措施，其建立的主要依據(jù)是《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489-2008）。二是實(shí)驗(yàn)活動(dòng)過(guò)程中的安全防范措施，其建立的主要依據(jù)是危險(xiǎn)度評(píng)估。

2.1常規(guī)性安全防范措施

2.1.1 建立實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)規(guī)章制度完善的規(guī)章制度有助于實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范化管理。建立完備且切實(shí)可行的高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室管理制度不但能起到規(guī)范實(shí)驗(yàn)室管理的作用，還能起到保證實(shí)驗(yàn)室工作人員和周圍環(huán)境安全的作用。雖然《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489-2008）已經(jīng)規(guī)定了生物安全實(shí)驗(yàn)室法規(guī)化管理體系，但結(jié)合實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況對(duì)相關(guān)程序化文件進(jìn)行細(xì)化仍是必不可少的。高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度歸納起來(lái)主要有以下幾個(gè)方面：（1）實(shí)驗(yàn)室日常管理制度。（2）實(shí)驗(yàn)室工作人員行為規(guī)范。（3）實(shí)驗(yàn)室人員進(jìn)出制度。（4）實(shí)驗(yàn)室物品管理制度。（5）實(shí)驗(yàn)室物品進(jìn)出制度。（6）實(shí)驗(yàn)室危險(xiǎn)品管理制度。（7）實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理制度。（8）實(shí)驗(yàn)室消毒滅菌制度等。

2.1.2 人員培訓(xùn)與考核人員培訓(xùn)是一項(xiàng)重要的、必需的工作，并且是需要長(zhǎng)期堅(jiān)持的工作。僅有安全防范意識(shí)，各項(xiàng)規(guī)章制度，而無(wú)專業(yè)知識(shí)技能作支撐，一切皆為空談[6]。

人員培訓(xùn)可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室人員工作性質(zhì)的不同組織專家進(jìn)行分類培訓(xùn)。培訓(xùn)形式可分為理論培訓(xùn)和實(shí)踐技能培訓(xùn)兩種。主要培訓(xùn)內(nèi)容大體分為：（1）生物安全基礎(chǔ)知識(shí)。（2）微生物操作技術(shù)規(guī)范。（3）實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)備使用規(guī)范。（4）個(gè)體防護(hù)裝備配備規(guī)范。（5）意外事故的處理方法及處置程序。（6）廢棄物處理方法。（7）消毒滅菌方法。（8）儀器設(shè)備的維護(hù)保養(yǎng)。（9）實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)運(yùn)行操作等。

人員培訓(xùn)后還應(yīng)組織相關(guān)專家進(jìn)行考核，考核合格人員均頒發(fā)合格證書(shū)?？己瞬缓细袢藛T，需經(jīng)再培訓(xùn)，直至考核合格，方可上崗。

2.1.3 常規(guī)體檢和免疫接種實(shí)驗(yàn)室工作人員上崗前均需進(jìn)行全面體檢，同時(shí)須保留實(shí)驗(yàn)室工作人員的本底血清，以備出現(xiàn)人員安全事故時(shí)進(jìn)行比對(duì)；工作人員上崗前還應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中接觸的病原進(jìn)行相應(yīng)的免疫接種[7]。

2.1.4 制定年度安全計(jì)劃制定切實(shí)可行的年度安全計(jì)劃，也是安全防范措施的一項(xiàng)重要內(nèi)容?！秾?shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489-2008）已經(jīng)對(duì)年度安全計(jì)劃的內(nèi)容作了大體規(guī)定，我們應(yīng)在遵守規(guī)定的同時(shí)結(jié)合實(shí)驗(yàn)室工作實(shí)際制定切實(shí)可行的安全計(jì)劃，切不可千篇一律地照抄照搬。

2.1.5 運(yùn)營(yíng)維護(hù)高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室不同于普通的實(shí)驗(yàn)室，根據(jù)《人間傳染的病原微生物名錄》（國(guó)家衛(wèi)生部，2006），需在此類實(shí)驗(yàn)室中操作的病原及實(shí)驗(yàn)活動(dòng)方可在此操作。否則，由于該類實(shí)驗(yàn)室的運(yùn)行成本較高，將會(huì)造成不必要的巨大浪費(fèi)。因此，高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室每年開(kāi)展的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)一般來(lái)講都不是滿負(fù)荷的，甚至有些高等級(jí)實(shí)驗(yàn)室常年僅處于備戰(zhàn)狀態(tài)。無(wú)論如何，定期的運(yùn)營(yíng)維護(hù)都是必不可少的。運(yùn)營(yíng)維護(hù)方式可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室人員配備情況及能力進(jìn)行選擇，如果實(shí)驗(yàn)室配備了相關(guān)專業(yè)人員，則可每年定期自行運(yùn)營(yíng)維護(hù)；如果實(shí)驗(yàn)室未配備相關(guān)專業(yè)技術(shù)人員，可與專業(yè)技術(shù)公司簽訂運(yùn)營(yíng)維護(hù)協(xié)議，由該公司定期為本實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展運(yùn)營(yíng)維護(hù)[8]。

2.1.6 監(jiān)督指導(dǎo)高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室應(yīng)成立專家組對(duì)工作人員的工作狀況進(jìn)行監(jiān)督，及時(shí)發(fā)現(xiàn)工作過(guò)程中存在及暴露的問(wèn)題，并通過(guò)制定相應(yīng)的措施加以規(guī)范和約束，以提高工作人員對(duì)規(guī)章制度的執(zhí)行力[9]。

2.2實(shí)驗(yàn)活動(dòng)中采取的安全防范措施實(shí)驗(yàn)活動(dòng)過(guò)程中應(yīng)采取哪些安全防范措施，其主要依賴于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估主要是指專業(yè)技術(shù)人員應(yīng)用專業(yè)知識(shí)對(duì)所從事實(shí)驗(yàn)活動(dòng)可能發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行充分而及時(shí)的識(shí)別，繼而制定出防范該風(fēng)險(xiǎn)的方法和措施。故風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告的內(nèi)容涵蓋了所有實(shí)驗(yàn)活動(dòng)中的安全防范措施，其重要性是不言而喻的。世界衛(wèi)生組織把風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估定義為生物安全工作的核心。目前風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告已作為我國(guó)生物安全實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證認(rèn)可材料審核的一項(xiàng)重要內(nèi)容。有關(guān)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，我們國(guó)家在2007年出臺(tái)了《微生物危險(xiǎn)性評(píng)估的原則和指南》（GB21235-2007），2013年擬定了《檢驗(yàn)檢疫實(shí)驗(yàn)室病原微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估指南》送審稿。這些法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)為風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供了一些指導(dǎo)性意見(jiàn)，但由于研究的病原不同，從事的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)不同，各種新發(fā)突發(fā)狀況不同，還需結(jié)合工作實(shí)際進(jìn)行具體而全面的分析，根據(jù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)展進(jìn)行實(shí)時(shí)評(píng)估。

下面介紹一下實(shí)驗(yàn)活動(dòng)中采取的幾項(xiàng)主要的安全防范措施。

2.2.1 健康檢查實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前均應(yīng)接受監(jiān)控室值班人員的健康檢查，必須如實(shí)認(rèn)真填寫(xiě)健康狀況登記表，內(nèi)容大體包括：精神狀態(tài)、皮膚感染情況、是否感冒、體溫、自覺(jué)癥狀等。凡有不適或不符合檢查要求的均不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作。

2.2.2 個(gè)體防護(hù)裝備的選擇實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)根據(jù)自己所從事的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)選擇個(gè)體防護(hù)裝備。高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室的個(gè)體防護(hù)裝備包括：正壓防護(hù)服（P4實(shí)驗(yàn)室用）、正壓頭套、一次性防護(hù)服、棉質(zhì)連體防護(hù)服、護(hù)目鏡、一次性乳膠手套、一次性N95口罩、防護(hù)鞋套、隔離衣等。實(shí)驗(yàn)人員選擇個(gè)體防護(hù)裝備時(shí)一定要根據(jù)當(dāng)日工作實(shí)際，避免不加分析一概配備最高層次防護(hù)裝備，造成資源的浪費(fèi)[10]。進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室時(shí)防護(hù)用品的穿戴流程一般為穿棉質(zhì)連體防護(hù)服→穿工作鞋→穿棉質(zhì)鞋套→戴口罩→戴帽子→戴一層手套（防護(hù)服袖口扎在手套內(nèi)）→穿一次性防護(hù)服→穿一次性防水鞋套→穿一次性塑料鞋套→戴防護(hù)鏡→戴第二層手套（防護(hù)服袖口扎在手套內(nèi)）。退出時(shí)穿脫順序正好相反。實(shí)驗(yàn)人員要正確穿戴防護(hù)用品，保持有效防護(hù)狀態(tài)，隨時(shí)檢查防護(hù)用品完好情況，發(fā)現(xiàn)破損及時(shí)更換，防止交叉污染。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的制定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程是實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員根據(jù)所從事的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)制定的實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范，也是實(shí)驗(yàn)操作人員在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中必須遵守的程序和步驟。實(shí)驗(yàn)活動(dòng)不同，標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程也不盡相同。這里的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程主要包括實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)程和儀器設(shè)備操作規(guī)程。實(shí)驗(yàn)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程又分為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)和常規(guī)微生物操作實(shí)驗(yàn)技術(shù)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)一般包括：動(dòng)物的麻醉、采血及血清收集、病毒接種、體溫檢測(cè)、鼻咽及肛拭子采集、動(dòng)物處死、動(dòng)物解剖、組織研磨、勻漿等[11]。常規(guī)微生物操作技術(shù)包括：微生物培養(yǎng)、檢測(cè)、離心、移液、超聲、銳器的使用、消毒、感染性物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)等。儀器設(shè)備標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程主要包括：生物安全柜標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、負(fù)壓隔離器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、負(fù)壓解剖臺(tái)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、高壓滅菌器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、廢水處理標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、傳遞窗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程等。

2.2.4 緊急事件處理預(yù)案的制定實(shí)驗(yàn)過(guò)程中總是會(huì)不可避免地發(fā)生緊急意外事故。緊急意外事故主要有：（1）感染性液體的外溢：感染性液體溢出在生物安全柜內(nèi)或生物安全柜外的工作臺(tái)面、地面和其他表面。感染性液體外溢在防護(hù)服，感染性液體外溢在皮膚及黏膜。（2）實(shí)驗(yàn)人員受傷：實(shí)驗(yàn)人員被注射器刺傷，被解剖工作造成機(jī)械傷，動(dòng)物抓咬傷或其他皮膚傷。（3）感染性固體破裂：出現(xiàn)飛沫和碎片；離心機(jī)破裂，離心物外溢。（4）實(shí)驗(yàn)人員健康狀況出現(xiàn)異常。（5）動(dòng)物逃逸。（6）生物安全柜或?qū)嶒?yàn)室出現(xiàn)正壓。（7）自然災(zāi)害等。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中無(wú)論何種原因出現(xiàn)意外事故，都應(yīng)及時(shí)采取緊急應(yīng)對(duì)措施，同時(shí)必須及時(shí)報(bào)告相關(guān)生物安全負(fù)責(zé)人，并將事故原因、處理過(guò)程、處理結(jié)果進(jìn)行詳細(xì)記錄[7]。意外事故的處理都要遵循保護(hù)實(shí)驗(yàn)者、保護(hù)環(huán)境和將事故危害降低到最低程度的原則。

2.2.5 應(yīng)急演練應(yīng)急演練是以應(yīng)急預(yù)案為依據(jù)開(kāi)展的實(shí)戰(zhàn)和演習(xí)，并通過(guò)演練查找出應(yīng)急預(yù)案中的問(wèn)題和不足，進(jìn)而對(duì)應(yīng)急預(yù)案進(jìn)行修改和完善，同時(shí)應(yīng)急演練也是對(duì)相關(guān)工作人員處理應(yīng)急事件能力的一種考查。應(yīng)急演練應(yīng)開(kāi)展定期演練和不定期演練。定期演練是指無(wú)論是否開(kāi)展實(shí)驗(yàn)活動(dòng)都應(yīng)定期進(jìn)行的演練，包括的人員范圍較大；不定期演練是根據(jù)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)開(kāi)展的實(shí)驗(yàn)前演練，演練人員包括參加此次實(shí)驗(yàn)活動(dòng)的相關(guān)人員。

2.2.6 實(shí)驗(yàn)廢棄物的消毒滅菌和終末消毒高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室的廢棄物包括固體和液體兩種。固體廢棄物須經(jīng)雙扉高壓滅菌器滅菌后方可轉(zhuǎn)運(yùn)。液體廢棄物須經(jīng)微生物廢水處理系統(tǒng)處理后排放。且消毒滅菌應(yīng)按預(yù)先制定好的消毒滅菌程序和方案進(jìn)行，同時(shí)開(kāi)展消毒效果的監(jiān)測(cè)和評(píng)價(jià)。終末消毒是指一次實(shí)驗(yàn)活動(dòng)結(jié)束后開(kāi)展的實(shí)驗(yàn)室的徹底消毒。終末消毒的具體方法應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)所接觸的病原微生物而定。一般采用的方法有甲醛熏蒸法和過(guò)氧化氫噴霧法。由于甲醛具有較強(qiáng)的刺激性,且對(duì)人體有較大毒性，故過(guò)氧化氫噴霧法已作為高等級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室終末消毒的首選[11]。

3 實(shí)驗(yàn)室資源

實(shí)驗(yàn)室資源的缺乏會(huì)給實(shí)驗(yàn)工作人員帶來(lái)很大的困擾。目前發(fā)展中國(guó)家普遍存在機(jī)械制造業(yè)不發(fā)達(dá)的現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)所需儀器設(shè)備主要依賴于從發(fā)達(dá)國(guó)家進(jìn)口，而進(jìn)口的儀器設(shè)備又都是標(biāo)準(zhǔn)配置。隨著世界各國(guó)生物科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，個(gè)性化需求越來(lái)越強(qiáng)烈，標(biāo)配已經(jīng)不能完成滿足個(gè)性化的需求。因此實(shí)驗(yàn)人員依據(jù)需求進(jìn)行儀器設(shè)備的適度改造也是風(fēng)險(xiǎn)防范的必要措施之一[12]。

總之，科研人員要積極發(fā)揮主觀能動(dòng)性，兼顧實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能出現(xiàn)方方面面的風(fēng)險(xiǎn)，采取相應(yīng)的防范措施，進(jìn)而全面徹底地達(dá)到安全防范的目的。

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（收稿：2017-04-11修回：2017-05-03編校：史忠梅）

Q338

A[文章編號(hào)]2095-3496（2017）02-0112-04

10.19372/j.cnki.issn.2095-3496.2017.02.013

國(guó)家科技部重點(diǎn)研發(fā)項(xiàng)目（2016YFC1202303）

130122吉林長(zhǎng)春，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院十一所（孟軻音，王承宇，萬(wàn)忠海）

萬(wàn)忠海，E-mai l：wzhyjs531@163.com