痰標(biāo)本涂片鏡檢與細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果符合性的分析

汪林嬌易 薇趙曙剛

1.云南省德宏州人民醫(yī)院檢驗科，云南芒市 678400；2.云南省德宏州人民醫(yī)院藥劑科，云南芒市 678400

痰標(biāo)本涂片鏡檢與細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果符合性的分析

汪林嬌1易 薇1趙曙剛2

1.云南省德宏州人民醫(yī)院檢驗科，云南芒市 678400；2.云南省德宏州人民醫(yī)院藥劑科，云南芒市 678400

目的比較痰標(biāo)本涂片革蘭染色鏡檢結(jié)果與細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果之間的符合性，了解痰涂片鏡檢的臨床價值。方法選取我院2015年9月1日～11月30日住院及門診患者的865例痰標(biāo)本。將臨床送檢的865例痰標(biāo)本進行培養(yǎng)前的涂片鏡檢，根據(jù)涂片鏡檢結(jié)果，將痰標(biāo)本分為A、B、C三大類。同時對痰標(biāo)本進行培養(yǎng)鑒定，分析涂片鏡檢結(jié)果與細(xì)菌檢出率之間的關(guān)系。結(jié)果865例痰標(biāo)本中，涂片合格標(biāo)本695例，占80.3%；不合格標(biāo)本170例，占19.7%。在涂片合格的標(biāo)本中，有525例檢出627株細(xì)菌，細(xì)菌檢出率為75.5%。合格痰標(biāo)本涂片結(jié)果與細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果的符合率為82.4%。在170例涂片不合格的標(biāo)本中，43例痰標(biāo)本檢出60株細(xì)菌，細(xì)菌檢出率為25.3%。結(jié)論痰涂片能較早作出預(yù)測性報告，作為診治呼吸道感染的初步依據(jù)，指導(dǎo)臨床合理用藥。

痰涂片；培養(yǎng)；痰標(biāo)本；分析

下呼吸道感染患者標(biāo)本采集臨床通常采取自然咳痰法采集痰標(biāo)本，痰標(biāo)本容易受口腔正常菌群的污染，從而導(dǎo)致病原菌的檢出率降低，同時也會使細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果和臨床癥狀不符合的情況出現(xiàn)。隨著醫(yī)療水平的不斷發(fā)展，痰涂片鏡檢在臨床上得到了廣泛地應(yīng)用，可有效保障標(biāo)本質(zhì)量，提升培養(yǎng)結(jié)果的準(zhǔn)確性與科學(xué)性，幫助臨床醫(yī)師了解患者病情變化，并指導(dǎo)臨床用藥[1]。本研究選取我院所收集的865例痰標(biāo)本，在細(xì)菌培養(yǎng)前先進行涂片革蘭染色鏡檢，并和細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果做對照分析?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

選取2015年9月1日～11月30日間我院住院及門診患者的痰標(biāo)本。門診患者痰標(biāo)本主要選取懷疑有下呼吸道感染疾病患者的痰標(biāo)本，住院患者痰標(biāo)本主要選取存在肺炎、慢性支氣管炎、支氣管擴張等下呼吸道感染的患者的痰標(biāo)本。

1.2 儀器和試劑

VITEK2－Compact全自動微生物鑒定儀。珠海貝索公司生產(chǎn)的快速革蘭氏染色液，由法國生物梅里埃公司生產(chǎn)的巧克力瓊脂培養(yǎng)基、哥倫比亞血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板。

1.3 方法

1.3.1 痰標(biāo)本的預(yù)處理 痰標(biāo)本培養(yǎng)前的處理含有大量膿液或者血液和黏稠的痰，先用無菌生理鹽水將痰洗滌3次，再將痰標(biāo)本加入等量的胰酶溶液（PH=7.6），放置于35℃培養(yǎng)箱90min待痰標(biāo)本液化后再進行接種。外觀正常的標(biāo)本可直接接種。

1.3.2 痰標(biāo)本涂片鏡檢 痰標(biāo)本直接涂片檢查將痰標(biāo)本含有膿或者帶有血液的部分，涂成薄片待干，用快速革蘭染液染色鏡檢。痰標(biāo)本直接涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)分類按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第二版相關(guān)內(nèi)容、《實用臨床微生物診斷學(xué)》（蔡文誠相關(guān)章節(jié)）[2-3]結(jié)合本室的實際工作，將痰涂片結(jié)果分為ABC三類：A類低倍鏡視野下白細(xì)胞不低于25，鱗狀上皮細(xì)胞不超過10，屬于較理想標(biāo)本；B類低倍鏡下白細(xì)胞不低25，鱗狀上皮細(xì)胞大于10但不超過25，細(xì)菌種類不低于3種，屬于可接受標(biāo)本；C組低倍視野下鱗狀上皮細(xì)胞不低于25，屬于不合格痰標(biāo)本。A、B屬于合格痰標(biāo)本，適合做細(xì)菌培養(yǎng)，C為不合格痰標(biāo)本，不適合做細(xì)菌培養(yǎng)。

1.3.3 細(xì)菌培養(yǎng) 普通細(xì)菌培養(yǎng)將標(biāo)本前處理好的痰標(biāo)本接種于巧克力瓊脂平板、哥倫比亞血平板、麥康凱瓊脂平板，放置5%二氧化碳培養(yǎng)箱，35℃培養(yǎng)18～24h，直接涂片革蘭染色鏡檢如檢出真菌孢子或菌絲者應(yīng)加種沙保羅瓊脂培養(yǎng)基，觀察菌落特征對主要的病原菌和致病菌或優(yōu)勢生長細(xì)菌，經(jīng)梅里埃公司VITEK2-Compact微生物鑒定儀鑒定到種并進行體外藥物敏感性實驗。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料以%表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 痰培養(yǎng)標(biāo)本的合格率

根據(jù)痰標(biāo)本涂片鏡檢三分類標(biāo)準(zhǔn)，涂片鏡檢合格的痰標(biāo)本695例，合格率為80.3%，其中A類痰標(biāo)本365例，占總數(shù)的42.2%，B類痰標(biāo)本330例，占總數(shù)38.2%，涂片鏡檢不合格痰標(biāo)本C類170例，占總數(shù)的19.7%。

2.2 痰標(biāo)本涂片鏡檢ABC三類與細(xì)菌的檢出率的關(guān)系

865例痰標(biāo)本中有568例標(biāo)本檢出致病菌或優(yōu)勢生長菌，陽性檢出率為65.7%，涂片鏡檢合格痰標(biāo)本有695例，涂片鏡檢合格的痰標(biāo)本檢出細(xì)菌數(shù)為525例，檢出率為75.5%（525/695），涂片不合格痰標(biāo)本有170例，檢出細(xì)菌43例，檢出率為25.3%（43/170）。經(jīng)χ2檢驗，A、B、C三類標(biāo)本細(xì)菌檢出率存在顯著差異（χ2=162.460，P＜0.01），經(jīng)χ2分割A(yù)B兩類涂片合格標(biāo)本的細(xì)菌檢出率與C類涂片不合格標(biāo)本的細(xì)菌檢出率有顯著差異（χ2=152.946，P＜0.01），A類標(biāo)本細(xì)菌檢出率與C類標(biāo)本細(xì)菌檢出率有顯著差異（χ2=153.721，P＜0.01），B類標(biāo)本細(xì)菌檢出率與C類標(biāo)本細(xì)菌檢出率有顯著差異（χ2=89.24，P＜0.01），見表1。

表1 痰標(biāo)本涂片分類和細(xì)菌檢出率

2.3 合格痰標(biāo)本涂片鏡檢結(jié)果與細(xì)菌培養(yǎng)的符合率

695例合格痰標(biāo)本共檢出致病菌627株，涂片鏡檢合格痰標(biāo)本涂片與細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果總符合率為82.4%。在627株陽性標(biāo)本中檢出革蘭陰性菌395株（占63.0%)，革蘭陽性菌158株（25.2%）檢出的革蘭陰性菌主要為大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌及流感嗜血桿菌；革蘭陽性菌主要為金黃色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、肺炎鏈球菌、A群鏈球菌及糞腸球菌；真菌74株（11.8%）,包括白色念珠菌及熱帶念珠菌。涂片陰性而培養(yǎng)出致病菌的占10.5%，以鏈球菌屬（28.5%）、腸桿菌科細(xì)菌（20.8%）、白念珠菌（18.5%）和非發(fā)酵菌(15.8%)為主，涂片檢出細(xì)菌而細(xì)菌培養(yǎng)未培養(yǎng)出致病菌的為9.5%，其痰涂片鏡檢結(jié)果與細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果比較，見表2。

表2 695例合格痰標(biāo)本涂片鏡檢與細(xì)菌培養(yǎng)的結(jié)果比較

3 討論

痰標(biāo)本的直接涂片染色鏡檢，可以通過鏡檢結(jié)果判斷痰標(biāo)本是否合格，可以通過鏡檢結(jié)果來作為細(xì)菌培養(yǎng)的依據(jù)。痰標(biāo)本的質(zhì)量是確保痰培養(yǎng)結(jié)果準(zhǔn)確性的首要前提，只有在痰標(biāo)本合格基礎(chǔ)上培養(yǎng)的結(jié)果，才可能準(zhǔn)確[4]。在865例臨床痰標(biāo)本中，痰涂片鏡檢695例合格，合格率為80.3%，其合格率稍高于楊小琴[5]的報道，培養(yǎng)陽性檢出率為75.5%（525/695），不合格標(biāo)本170例，培養(yǎng)陽性檢出率為25.3%（43/170），兩者比較差異有顯著性（χ2=152.946，P＜0.01）。因此可見，在痰涂片鏡檢合格的標(biāo)本，培養(yǎng)陽性率最高，痰標(biāo)本涂片鏡檢對痰標(biāo)本的質(zhì)量進行了嚴(yán)格控制，提高了痰標(biāo)本的培養(yǎng)陽性檢出率。對于涂片不合格的痰標(biāo)本，可以聯(lián)系臨床要求重新留取痰標(biāo)本，提高痰培養(yǎng)的檢出率。影響痰標(biāo)本涂片的合格率主要由以下幾點原因造成：臨床醫(yī)護人員對痰標(biāo)本的采集沒有引起重視，沒有對患者給予說明和指導(dǎo)，從而導(dǎo)致患者沒有留取清晨深部的痰液，留取的是隨機的唾液。患者采集標(biāo)本后沒有及時送檢或檢驗人員沒有立即處理接種標(biāo)本，痰液受到上呼吸道正常菌群的污染。微生物室檢驗人員由于工作責(zé)任心和技術(shù)差異沒有挑取痰標(biāo)本的膿性或帶血的部分，涂片厚薄程度、涂片染色時間等因素。

695例合格痰標(biāo)本中涂片與細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果的總符合率為82.4%與Pagano等[6-8]報道符合率74.2%～80.2%基本一致，但較賀靖冬等[9]報道符合率的65.6%結(jié)果偏高。證明了合格痰標(biāo)本涂片與培養(yǎng)結(jié)果的符合率有較高的一致性，具有預(yù)先判斷的輔助價值。695例合格痰標(biāo)本共檢出627株致病菌，檢出的菌種與臨床主要病原菌一致，真菌檢出率為11.8%，主要為ICU、呼吸科和感染科。因酵母（樣）菌生長緩慢，而臨床對培養(yǎng)的需要又急迫，故可通過涂片檢查陽性者初報臨床，并有意識地將標(biāo)本培養(yǎng)延長觀察，以免漏檢[10]。

痰涂片的鏡檢結(jié)果與痰培養(yǎng)結(jié)果不符的原因分析 涂片檢出細(xì)菌而培養(yǎng)未檢出致病菌主要的原因可能是患者在留取標(biāo)本前已使用了抗菌藥物，抑制了致病菌的生長；另一原因可能為實驗室的條件有限或培養(yǎng)時間不足達不到苛養(yǎng)菌或真菌的生長條件。涂片未見細(xì)菌而培養(yǎng)出致病菌，其中檢出的致病菌主要是革蘭陰性桿菌和真菌，主要原因可能為標(biāo)本含菌量少，涂片時只能選取極少一部分標(biāo)本，沒有取到含有細(xì)菌的部分；當(dāng)痰標(biāo)本黏稠時，細(xì)菌被黏液和膿細(xì)胞包裹，鏡檢無法清晰地看到其形態(tài)，造成漏檢[11]。

綜上所述，痰涂片革蘭染色可以篩選出合格的痰標(biāo)本，提高痰培養(yǎng)的細(xì)菌檢出率。痰標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢查對下呼吸道感染的診斷有重要意義，痰標(biāo)本的直接涂片鏡檢可提高下呼吸道感染病原學(xué)診斷的特異性和敏感性[12]。可以較快的作出預(yù)測性報告，及時指導(dǎo)臨床合理用藥。

[1] 陳海強，羅凱.207份痰標(biāo)本涂片檢查與培養(yǎng)結(jié)果分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（6）：741-742.

[2] 葉應(yīng)嫵，王毓三.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].第2版，南京：東南大學(xué)出版社，1997：460-462.

[3] 蔡文誠.實用臨床微生物診斷學(xué)簡體字版[M].南京：東南大學(xué)出版社，1998：207.

[4] 郭銳，駢淮燕.單斌，等.痰標(biāo)本涂片鏡檢的價值分析[J].中國抗感染化療雜志，2003，3（3）：165-166.

[5] 楊小琴.痰涂片檢查與細(xì)菌培養(yǎng)的一致性分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7（14）：1476-1477.

[6] Pagano L，Girmeniac，Melel L，et al.Infections caused by filamentous fungi in patients with hematologic malignancies.A report of 391 cases by GMEMA Infection program[J].Hacmatologica，2001，86（8）：862-870.

[7] 張蓓，熊薇.230份痰標(biāo)本涂片檢查與培養(yǎng)結(jié)果分析[J].江西醫(yī)學(xué)檢驗，2001，19（5）：285-286.

[8] 袁飛，萬莉，謝幫才.358例標(biāo)本涂片鏡檢與培養(yǎng)結(jié)果的相關(guān)性分析[J].中國實驗診斷學(xué)，2008，12（6）：553-554.

[9] 賀靖冬，李慶，高強.889份痰標(biāo)本涂片與培養(yǎng)結(jié)果分析[J].江西醫(yī)學(xué)檢驗，2005，23（6）：553-554.

[10] 林嘉，劉華，李焱鑫，等.85份合格痰標(biāo)本涂片檢查與培養(yǎng)結(jié)果分析[J].上海醫(yī)學(xué)檢驗雜志，1998，13（2）：98-99.

[11] 文華，余德清.445份痰標(biāo)本涂片與培養(yǎng)結(jié)果分析[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2008，10（1）：47-48.

[12] 楊朵，辛續(xù)麗，馬東媛，等.痰培養(yǎng)標(biāo)本合格性評估標(biāo)準(zhǔn)的比較[J].檢驗醫(yī)學(xué)，2012，27（9）：773-775.

[13] 野麗莉，張淑芳.266份痰標(biāo)本涂片鏡檢結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果對比分析[J].中國熱帶醫(yī)學(xué)，2009，9（8）：1649-1650.

[14] 張肖，朱同華，沈國榮.痰標(biāo)本分析前涂片鏡檢的臨床價值分析[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2016，38（11）：1559-1561.

[15] 羅媛青.痰涂片和細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果符合性探討[J].微生物學(xué)免疫學(xué)進展，2011，39（2）：19-21.

Analysis on the compliance of sputum smears microscopy and bacterial culture results

WANG Linjiao1YI Wei1ZHAO Shugang2
1.Clinical Laboratory,Dehong People's Hospital,Mangshi 678400,China；2.Department of Pharmacy,Dehong People's Hospital,Mangshi 678400,China

ObjectiveTo compare the compliance of sputum specimens from gram staining and bacterial culture,and to evaluate the clinical value of sputum smear.Methods865 sputum specimens of inpatients and outpatients in Dehong People's Hospital from September 1st to December 30th 2015 were selected as the study objects.These 865 sputum specimens for clinical inspection were examined by gram staining and sputum smear before bacterial culture,and they were divided into three groups according to smear results.Meanwhile sputum specimens were cultured and identified.The correlation between sputum smear and bacterial culture on the bacterial detection rate was analyzed.ResultsThe qualified rate of sputum smear from 865 specimens was 80.3% (695/865),and unqualified rate was 19.7% (170/865).627 strains of bacteria were detected in 525 out of 695 qualified smears specimens.The detection rate was 75.5%.The coincidences rate of qualified sputum smear and culture was 82.4%.60 strains of bacteria were detected in 43 sputum specimens from 170 unqualified specimens.ConclusionSputum smear can provide early preliminary evidence for diagnosis of respiratory tract infections and guide rational drug use in the clinic.

Sputum smear;Culture;Sputum specimen;Analysis

R446.5

B

2095-0616（2016）19-139-03

2016-07-16）