多重PCR法及糞乳鐵蛋白檢測在急性腹瀉患者診斷中的運(yùn)用

游 李

福建省第二人民醫(yī)院，福建福州 350003

多重PCR法及糞乳鐵蛋白檢測在急性腹瀉患者診斷中的運(yùn)用

游 李

福建省第二人民醫(yī)院，福建福州 350003

目的探討多重PCR法及糞便乳鐵蛋白在診斷急性腹瀉伴脫水患者中的臨床價(jià)值。方法選取2015年1月～12月于我院急診科就診患者共59例，其中包括輕度脫水患者29例，中到重度脫水患者30例。兩組患者都進(jìn)行血常規(guī)（白細(xì)胞計(jì)數(shù)）、CRP、糞白細(xì)胞鏡檢、糞乳鐵蛋白等檢測，病原學(xué)檢查包括傳統(tǒng)糞便培養(yǎng)及多重PCR。結(jié)果在輕度脫水患者中多重PCR法病原體檢出率為79.31%（23/29），傳統(tǒng)糞培養(yǎng)檢出率為24.13%（7/29）。在中到重度脫水患者中，多重PCR法病原體檢出率為73.33%（22/30），傳統(tǒng)糞培養(yǎng)檢出率為30.00%（9/30），在兩組患者中，多重PCR法病原檢出率均大于傳統(tǒng)糞培養(yǎng)檢出率，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。輕度脫水患者糞乳鐵蛋白檢出率為44.82%（13/29），中到重度脫水患者糞乳鐵蛋白檢出率為76.67%（23/30），中到重度脫水患者糞乳鐵蛋白檢出率大于輕度脫水患者，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論在腹瀉所致脫水患者中，多重PCR法在病原學(xué)的檢出率上優(yōu)于傳統(tǒng)法。糞乳鐵蛋白檢測對腹瀉患者脫水情況的判斷有一定臨床價(jià)值。

急性腹瀉；多重PCR；乳鐵蛋白；脫水

全球約有一半的人口每年都會(huì)受到腹瀉的影響。腹瀉的發(fā)病率及死亡率也持續(xù)維持并未下降。感染是急性腹瀉的主要原因。除非患者出現(xiàn)嚴(yán)重的脫水、發(fā)熱及血便等癥狀，一般不會(huì)進(jìn)行病原學(xué)檢查。急性腹瀉一般為自限性，且糞培養(yǎng)診斷率很低，約為1.5%～5.6%。當(dāng)患者的糞便中出現(xiàn)白細(xì)胞時(shí)，意味著炎癥反應(yīng)的發(fā)生，急性腹瀉的患者病情較為嚴(yán)重，這時(shí)糞培養(yǎng)等更深入的檢查應(yīng)該介入[1-2]。但是微生物檢查結(jié)果通常依賴于實(shí)驗(yàn)技術(shù)及樣品的新鮮程度，故陽性率較低。乳鐵蛋白是中性粒細(xì)胞顆粒中具有殺菌活性的單體糖蛋白，與伴隨感染性腹瀉的一些嚴(yán)重功能疾病相關(guān)，其在白細(xì)胞形態(tài)破壞后仍可檢測，乳鐵蛋白在消化系統(tǒng)疾病中具有一定的診斷價(jià)值[3]。在急性腹瀉中，對病原學(xué)準(zhǔn)確快速的檢測可能對縮短病程及減少發(fā)病率及并發(fā)癥有幫助。隨著多種分子生物學(xué)檢測水平的快速發(fā)展，病原學(xué)的檢測水平得到提高，其敏感度及特異度也高于傳統(tǒng)的培養(yǎng)[4-7]。本研究將討論非侵入性的糞便檢測指標(biāo)糞乳鐵蛋白及多重PCR對提高急性腹瀉診斷水平的影響，并探討糞乳鐵蛋白在腹瀉患者中判斷脫水嚴(yán)重程度的應(yīng)用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月～12月于我院急診科就診腹瀉患者，年齡20～80歲，2周內(nèi)急性腹瀉癥狀（＞5次/d），有腹瀉相關(guān)癥狀（脫水，體溫＞37℃，或者出現(xiàn)血性腹瀉）。排除炎癥性腸疾病、腸道腫瘤、肝硬化、慢性胰腺炎、醫(yī)院獲得性腸疾病及1個(gè)月內(nèi)注射過抗生素的患者。臨床評價(jià)包括是否發(fā)熱、脫水嚴(yán)重過程度、腹瀉持續(xù)時(shí)間等。對住院患者使用環(huán)丙沙星進(jìn)行治療，2次/d。所有糞便樣品均在用藥后24h內(nèi)收集。本次檢查共納入病例59例。將患者按腹瀉脫水程度分為兩組，即輕度脫水組及中到重度脫水組，其中輕度脫水組患者為29例，中到重度脫水組患者30例。輕度脫水組中男18例，女11例，年齡21～59歲，平均（40.6±9.3）歲；中到重度脫水患者中，男16例，女14例，年齡23～57歲，平均（45.2±7.9）歲。各組間患者性別、年齡構(gòu)成比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。中度到重度脫水的標(biāo)準(zhǔn)為患者出現(xiàn)直立性低血壓（當(dāng)改變體位時(shí)收縮壓下降＞20mm Hg，舒張壓下降＞10mm Hg），或者出現(xiàn)明顯的低血壓（收縮壓＜80mm Hg，舒張壓＜60mm Hg）。

1.2 檢查指標(biāo)

對兩組患者收集患者糞便后分為兩份，分別進(jìn)行病原學(xué)檢查，包括傳統(tǒng)糞便培養(yǎng)及多重PCR。另對兩組患者分別行血常規(guī)（白細(xì)胞計(jì)數(shù)）、CRP、糞白細(xì)胞鏡檢組及糞乳鐵蛋白檢測組，觀察上述指標(biāo)在輕度脫水患者及中到重度脫水患者中是否存在差異。兩組血常規(guī)（白細(xì)胞檢查）、CRP、糞白細(xì)胞檢查、糞乳鐵蛋白檢查都在使用抗生素24h內(nèi)完成。

1.3 試劑與材料

乳鐵蛋白檢測試劑盒購自北京博歐實(shí)德生物技術(shù)有限公司，PCR引物購自北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限公司。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

糞培養(yǎng)與PCR病原學(xué)檢驗(yàn)方法、糞白細(xì)胞鏡檢、糞乳鐵蛋白檢查采用一般四格表χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析。血常規(guī)（白細(xì)胞計(jì)數(shù)）及CRP數(shù)據(jù)采用成組t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。所有數(shù)據(jù)經(jīng)電腦錄入，由SPSS20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 糞培養(yǎng)與PCR病原學(xué)檢驗(yàn)方法一致性比較

在輕度脫水組及中到重度脫水組中傳統(tǒng)的糞培養(yǎng)與PCR病原學(xué)檢驗(yàn)方法的陽性結(jié)果均有差別（P＜0.01），輕度脫水組PCR的病原學(xué)檢測陽性率為79.31%（23/29），糞培養(yǎng)的陽性率為24.13%（7/29）。中到重度脫水組PCR的病原學(xué)檢測陽性率為73.33%（22/30），糞培養(yǎng)的陽性率為30.00%（9/30）。見表1。

表1 糞培養(yǎng)與PCR病原學(xué)檢驗(yàn)方法一致性比較

2.2 兩組在各實(shí)驗(yàn)室檢查中的比較

對兩組患者進(jìn)行血常規(guī)（白細(xì)胞計(jì)數(shù)）、CRP、糞乳鐵蛋白、糞白細(xì)胞鏡檢測并對結(jié)果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)在輕度脫水與中到重度脫水患者中，糞乳鐵蛋白檢測存在差異（P＜0.05），其中在輕度脫水患者中糞乳鐵蛋白檢出13例，未檢出16例，陽性率為44.82%（13/29），在中到重度脫水患者中，乳鐵蛋白檢出23例，未檢出7例，陽性率為76.67%（23/30），在血常規(guī)（白細(xì)胞計(jì)數(shù)）、CRP、糞白細(xì)胞鏡檢中，兩組結(jié)果比較未見明顯差異。見表2～3。

表2 兩組患者白細(xì)胞計(jì)數(shù)及CRP的比較（

表2 兩組患者白細(xì)胞計(jì)數(shù)及CRP的比較（

組別 WBC（×109/L） CRP（mg/L）輕度脫水組 12.05±3.28 18.55±5.32中到重度脫水組 14.46±4.02 22.83±6.54t1.925 1.838P0.080 0.093

表3 兩組患者糞乳鐵蛋白及糞白細(xì)胞鏡檢結(jié)果比較

3 討論

腹瀉是臨床工作中最常見的疾病之一，根據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球范圍內(nèi)腹瀉的發(fā)病率為300～500億例每年，其中因?yàn)閲?yán)重腹瀉而可能致死的例數(shù)約為500～1000萬例左右[8]。急性腹瀉可能由多種病毒、細(xì)菌及寄生蟲等引起，較常見的如輪狀病毒、大腸桿菌、霍亂弧菌及沙門氏菌[9]。因此，對腹瀉患者及時(shí)的診斷、評估及治療相當(dāng)重要。腹瀉患者常規(guī)的檢查主要包括血常規(guī)、糞培養(yǎng)及糞白細(xì)胞鏡檢等。但由于糞培養(yǎng)的效率低下及周期較長，其對該病的診斷及治療很難起到有效的指導(dǎo)，故采用新的檢查手段快速并準(zhǔn)確判斷病原體勢在必行。本研究旨在探討急性腹瀉脫水患者中，用多重PCR法檢測病原較傳統(tǒng)糞便培養(yǎng)方法對患者病原體的檢出是否有差異，并研究判斷急性腹瀉患者脫水嚴(yán)重程度的可靠檢查指標(biāo)。通過研究發(fā)現(xiàn)，多重PCR法較傳統(tǒng)糞培養(yǎng)對病原體的檢測能力也更強(qiáng)。其主要原因可能為多重PCR技術(shù)除了在細(xì)菌感染中保持較高的準(zhǔn)確性外，在病毒感染中對病毒的檢出也較為準(zhǔn)確，已有部分醫(yī)院在兒童腹瀉的診斷中運(yùn)用了多重PCR技術(shù)[10]。PCR技術(shù)也已經(jīng)運(yùn)用在其他臨床檢查中，如結(jié)核桿菌的檢測，但其在糞便樣本檢查中并未常規(guī)運(yùn)用。在我們的研究中發(fā)現(xiàn)，在多重PCR法與傳統(tǒng)糞培養(yǎng)對病原體的檢出陽性率結(jié)果不一致，多重PCR法在輕度脫水患者及中到重度脫水患者中的病原體檢出陽性率分別為79.31%和73.33%，而傳統(tǒng)糞培養(yǎng)的方法僅為24.13%及30.00%。故多重PCR法若能盡早應(yīng)用于糞便樣品的常規(guī)檢查中，對腹瀉伴脫水患者診斷的周期及準(zhǔn)確率都將大大提高。

通過對患者的糞便樣本檢測進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)糞白細(xì)胞鏡檢對患者脫水程度的判斷能力有限。其可能原因?yàn)樵跈z測過程中，白細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生改變，且容易細(xì)胞正常結(jié)構(gòu)破壞，故難以作為糞便檢查中的有效指標(biāo)。衛(wèi)霖等[11-12]的研究表明，糞乳鐵蛋白在炎癥性腸疾病的鑒別診斷中存在價(jià)值。同時(shí)，在李剛等[13-14]研究中發(fā)現(xiàn)，在潰瘍性結(jié)腸炎中，糞乳鐵蛋白也存在一定診斷價(jià)值。由此引起我們的思考，在急性腹瀉伴隨脫水癥狀的患者中，糞乳鐵蛋白的檢測是否也可作為參考指標(biāo)之一。我們對急性腹瀉患者糞乳鐵蛋白進(jìn)行檢測，并探尋其是否與脫水癥狀相關(guān)。我們注意到，在進(jìn)行糞乳鐵蛋白檢測時(shí)，輕度脫水患者及中到重度脫水患者中，其陽性率的構(gòu)成比不同（P＜0.05）。在中到重度脫水患者中，其陽性率為76.67%，而在輕度脫水患者中，其陽性率為44.82%。故我們可以推測，在糞便乳鐵蛋白的定性檢測中，若其為陽性，應(yīng)及時(shí)注意患者是否發(fā)生了中到重度脫水，并及時(shí)補(bǔ)液，維持水電解質(zhì)平衡。我們的結(jié)論是在判斷患者的脫水程度中，糞乳鐵蛋白的檢測起到一定作用。本研究存在一定的局限性。首先，進(jìn)入到研究中的病例數(shù)較少；其次，多重PCR檢測因其引物設(shè)計(jì)可能存在假陽性的可能。綜上，在腹瀉患者的診斷中運(yùn)用多重PCR技術(shù)能有效地檢測到更多病原體。在判斷腹瀉患者的脫水嚴(yán)重程度時(shí)，糞乳鐵蛋白的檢出可作為重要的參考指標(biāo)之一。若其為陽性，則更當(dāng)著重注意對患者脫水癥狀的治療。

[1] 俞玲巧.成人急性腹瀉患者血常規(guī)診斷意義研究[J].中國保健營養(yǎng)(上旬刊)，2014，24（7）：4498.

[2] 劉翠華.急性腹瀉患者血常規(guī)與 C-反應(yīng)蛋白的檢測意義[J].臨床合理用藥雜志，2014，5（32）：120.

[3] 衛(wèi)霖，韓明子.乳鐵蛋白在消化疾病中的應(yīng)用價(jià)值[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2013，22（2）：181-184.

[4] 韋小瑜，游旅，田克誠，等.貴陽地區(qū)2013年腹瀉病例中致瀉性大腸桿菌的病原監(jiān)測分析[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2015，31（9）：881-885.

[5] 劉白薇，高志勇，王全意，等.北京市2013-2014年腸道門診腹瀉患者中諾如病毒感染的流行病學(xué)及臨床特征分析[J].中華流行病學(xué)雜志，2015，36（4）：383-386.

[6] 度堯，吳纓芳，陳云天，等.708例腹瀉患者糞標(biāo)本病毒檢測及臨床特點(diǎn)[J].中華傳染病雜，2013，31（12）：740-743.

[7] 袁超文，江馗語，張力國，等.遼寧地區(qū)腹瀉患者大腸桿菌分離株Ⅱ型不耐熱腸毒素的檢測及測序分析[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2016，32（7）：644-650.

[8] Kim KH，Kabir E，Ara Jahan SA review of the consequences of global climate change on human health[J]. Journal of environmental science and health，2014，32（3）：299-318.

[9] 侯鳳琴，王艷，李俊，等.北京10所三級醫(yī)院成人急性腹瀉的診斷治療調(diào)查研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2015，（18）：4186-4188.

[11] 余峰，曾玫，杜艷，等.海市閔行區(qū)嬰幼兒輪狀病毒腹瀉監(jiān)測結(jié)果分析[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2015，35（12）：896-899.

[11] 衛(wèi)霖，韓明子，金世柱.糞便乳鐵蛋白在炎癥性腸病中的應(yīng)用價(jià)值[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2013，22（3）：276-278.

[12] 葉院寧，汪芳裕.糞便生物標(biāo)志物在炎癥性腸病中的應(yīng)用[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2015，24（12）：1517-1521.

[13] 李剛，楊麗莉，武赟堂，等.糞便生物標(biāo)記物檢測對潰瘍性結(jié)腸炎的診斷價(jià)值研究[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2014，23（7）：783-785.

[14] 嚴(yán)喜章，常盼，于軍，等.糞鈣衛(wèi)蛋白和乳鐵蛋白檢測在診斷潰瘍性結(jié)腸炎中的臨床意義[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志，2016 ，45（7）：921-922，927.

The use of multiple PCR and fecal lactoferrin test in the diagnosis of patients with acute diarrhea

YOU Li
Fujian Second People's Hospital,Fuzhou 350003,China

ObjectiveTo investigate the clinical value of multiple PCR method and fecal lactoferrin in diagnosis of patients with dehydration in acute diarrhea.Methods59 patients visited the emergency department from January 2015 to December were randomly selected and divided into two groups,which included 29 patients in mild dehydration group,and 30 patients in moderate to severe dehydration group.All the patients in the two groups were treated with routine blood (white blood cells count),CRP and fecal lactoferrin detection.Etiological examination included traditional stool culture and multiplex PCR.ResultsThe etiological detection rate of PCR method in mild dehydration group was 79.31%(23/29),which was 24.13%(7/29) with traditional method.In the moderate to severe dehydration group,the etiological detection rate of PCR method was 73.33%(22/30),which was 30.00%(9/30) with traditional method.In both groups,etiological detection rate was higher when using multiple PCR method compared to the traditional fecal culture,the results were statistically significant(P＜ 0.05).The fecal lactoferrin detection rate was 44.82%(13/29) in patients with mild dehydration,which was 76.67%(23/30) in patients with moderate to severe dehydration.The detection rate of fecal lactoferrin in moderate to severe dehydration group was higher than mild dehydration group,the results were statistically significant(P＜ 0.05).ConclusionIn patients with acute diarrhea dehydration,PCR method is superior to the traditional method in the detection rate of pathogens.There is a certain clinical value of fecal lactoferrin on the judgment of patients with dehydration.

Acute diarrhea;Multiple PCR;Fecal lactoferrin;Dehydration

R450;R446.13

B

2095-0616（2016）19-119-04

2016-08-22）