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    美洲大蠊提取物CⅡ—3對(duì)家兔血常規(guī)及抗氧化活性的影響

    2017-01-11 14:59:01邵維莉吳道勛彭芳劉光明陳俊
    關(guān)鍵詞:抗炎血常規(guī)抗氧化

    邵維莉吳道勛彭芳劉光明 陳俊雅 王濤

    【摘 要】 目的:研究美洲大蠊提取物CⅡ-3對(duì)正常家兔血常規(guī)和血清抗氧化能力的影響。方法:給予正常家兔高(16mg/kg)、中(8mg/kg)、低(4mg/kg)耳緣靜脈注射CⅡ-3,對(duì)各劑量組血常規(guī)和血清中抗氧化因子活性進(jìn)行測定。結(jié)果:單次給藥后,高劑量CⅡ-3能夠明顯降低正常家兔血液中白細(xì)胞、紅細(xì)胞的數(shù)量(P<005);多次給藥后,與NS組比較,CⅡ-3對(duì)CAT、MPO的含量及T-AOC活性均有一定的提高作用(P<005)。結(jié)論:美洲大蠊提取物CⅡ-3具有一定的抗炎和抗氧化活性。

    【關(guān)鍵詞】 美洲大蠊;血常規(guī);抗炎;抗氧化

    【中圖分類號(hào)】R967 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517(2016)23-0036-03

    美洲大蠊(Periplaneta americana L.)為蜚蠊目蜚蠊科昆蟲,俗稱蟑螂。據(jù)《本草綱目》記載,蟑螂以干燥或新鮮全體入藥,有活血化瘀、解毒消疳、利水消腫等功效[1]。自20世紀(jì)70年代以來,國內(nèi)外學(xué)者從其體內(nèi)分離純化出多種活性物質(zhì),如與組織再生有關(guān)的p10蛋白[2]、促進(jìn)血細(xì)胞吸收感染細(xì)菌的防御型分子脂多糖結(jié)合蛋白[3]以及具有利尿作用的多肽[4]等。并開發(fā)了美洲大蠊系列昆蟲藥品,如康復(fù)新液、心脈隆注射液和肝龍膠囊等[5]。實(shí)驗(yàn)通過測定美洲大蠊醇提取物CⅡ-3對(duì)家兔外周血細(xì)胞因子和血清液中抗氧化因子的含量,進(jìn)一步闡明美洲大蠊的抗炎及抗氧化作用,為其進(jìn)一步研究提供參考。

    1 儀器與材料

    11 美洲大蠊提取物的制備 受試藥物CⅡ-3(批號(hào):20140823,由大理大學(xué)藥學(xué)院劉光明教授提供)為棕褐色凍干粉末,其制備過程如下:用溶劑提取粉碎后的美洲大蠊蟲體干品,濃縮回收溶劑,得到的濃縮液經(jīng)大孔吸附樹脂材料柱層析,水洗,然后用醇溶劑洗脫,所得洗脫液經(jīng)減壓濃縮至無醇味,干燥后得到產(chǎn)品CⅡ-3[6]。實(shí)驗(yàn)前受試藥物用生理鹽水分別配制成不同濃度的藥液,然后用022 μm的微孔濾膜進(jìn)行過濾滅菌。

    12 動(dòng)物與試劑 家兔42只,體重15~20kg,由大理大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,許可證號(hào)SYXK(滇)2011-0004,普通級(jí)別。過氧化氫酶(CAT,批號(hào):20150707)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px,批號(hào):20150421)、髓過氧化物酶(MPO,批號(hào):20150415)、總抗氧化能力(T-AOC,批號(hào):20150706)等試劑盒均購自南京建成生物工程研究所;XFA6000動(dòng)物血細(xì)胞分析儀用稀釋液(批號(hào):PD1501)、HB探針清洗液(批號(hào):PB9407);ANI-3D溶血?jiǎng)ㄅ?hào):PF2402);HB含酶清洗液(批號(hào):PB7501)等購自南京普朗醫(yī)療設(shè)備有限公司。

    13 儀器 TL-16R高速冷凍離心機(jī)(上海市離心機(jī)機(jī)械研究所);EMP-168G半自動(dòng)生化分析儀(深圳市恩普電子技術(shù)有限公司);XFA6000全自動(dòng)動(dòng)物血細(xì)胞分析儀(南京普朗醫(yī)療設(shè)備有限公司)。

    2 方法

    21 單次給藥對(duì)家兔血細(xì)胞含量的影響 體重15~20kg健康雄性家兔18只,隨機(jī)分為3組,每組6只,即CⅡ-3高(16mg/kg)、中(8mg/kg)、低(4mg/kg)劑量組。各組家兔按給藥量2mL/kg通過耳緣靜脈給藥1次,分別于給藥前,給藥后5、15、30、60、120、240min耳緣靜脈采血20μL,全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀上檢測不同時(shí)間點(diǎn)家兔血液中白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板等含量的變化。

    22 連續(xù)給藥對(duì)家兔血清中抗氧化因子含量的影響 體重15~20kg健康雄性家兔24只,按體重隨機(jī)分為4組,每組6只,分別為3個(gè)給藥組(與21中相同)和1個(gè)生理鹽水對(duì)照組(NS組)。給藥組家兔每日耳緣靜脈給藥,給藥量均為2mL/kg,NS組給予生理鹽水,連續(xù)給藥5d。末次給藥后24 h,心臟采血5 mL,并分離血清,參照試劑盒說明書分別測定血清中過氧化氫酶(Catalase;CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(Myeloperoxidase;GSH-PX)、髓過氧化物酶(Myeloperodidase;MPO)的含量以及血清總抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity ;T-AOC)的活性。

    23 數(shù)據(jù)分析 采用SPSS170分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,單次給藥數(shù)據(jù)采用配對(duì)t檢驗(yàn),多次給藥數(shù)據(jù)均數(shù)的比較用單因素方差分析,P<005為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    3 結(jié)果

    31 單次給藥美洲大蠊提取物CⅡ-3對(duì)家兔血細(xì)胞含量的影響

    311 單次給藥后CⅡ-3對(duì)家兔白細(xì)胞含量的影響 與給藥前比較,給藥后30、60min時(shí),高劑量組家兔血液中白細(xì)胞含量明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<005)。結(jié)果見表1。

    312 單次給藥CⅡ-3對(duì)家兔紅細(xì)胞含量的影響 與給藥前比較,給藥后240min時(shí)高劑量CⅡ-3組紅細(xì)胞數(shù)量的減少較明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<005)。結(jié)果見表 2。

    313 單次給藥CⅡ-3對(duì)家兔血小板含量的影響 與給藥前比較,CⅡ-3各劑量組對(duì)家兔血小板的影響不明顯,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>005)。結(jié)果見表 3。

    32 多次給藥CⅡ-3對(duì)正常家兔血清中抗氧化因子含量的影響 與NS組比較,CⅡ-3能夠明顯增強(qiáng)正常家兔血清中MPO的活性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<005)。低劑量、中劑量CⅡ-3能使血清中CAT的含量顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<005),中劑量CⅡ-3還可以顯著提高血清中T-AOC的活性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<005);另外,高劑量CⅡ-3也能提高血清中GSH-PX的含量,但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>005)。結(jié)果見表4。

    4 討論

    血常規(guī)檢查是血液細(xì)胞部分的檢查,也是臨床一項(xiàng)基本的常規(guī)檢查[7-8]。根據(jù)其數(shù)量和分布的變化,可以作為疾病診斷的輔助手段。紅細(xì)胞各項(xiàng)參數(shù)出現(xiàn)異常時(shí),可對(duì)一些疾病的診斷提供依據(jù)。白細(xì)胞可以保護(hù)機(jī)體避免各種病毒性和細(xì)菌性感染,以及其他異物的入侵[9]。有證據(jù)表明[10],血小板對(duì)急性炎癥和損傷,包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腦型瘧和急性肺損傷等起主要作用。試驗(yàn)中,高劑量CⅡ-3能夠降低正常家兔血液中白細(xì)胞、紅細(xì)胞的數(shù)量,提示其具有一定的抗炎作用。

    過氧化氫酶(CAT)能夠刺激H2O2生成水并且可以清除機(jī)體氫過氧化物,且過氧化氫酶利用H2O2可以氧化一些毒素,包括酚類、甲酸、甲醛和酒精等[11]。過氧化氫作為機(jī)體代謝過程中產(chǎn)生的廢物,能夠?qū)C(jī)體造成損害。為了避免這種損害,過氧化氫必須被快速地轉(zhuǎn)化為其他無害或毒性較小的物質(zhì),而過氧化氫酶就是常常被細(xì)胞用來催化過氧化氫分解的工具。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與NS組相比,低、中劑量CⅡ-3能夠明顯增強(qiáng)家兔血清中過氧化物酶的活力(P<005)。谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的抗氧化酶,它在信號(hào)平衡、免疫調(diào)節(jié)[12],以及清除氫過氧化物,避免氧化損傷中發(fā)揮重要作用[13-14]。實(shí)驗(yàn)中,中、高劑量CⅡ-3可以增加家兔血清中谷胱甘肽過氧化物酶的含量。髓過氧化物酶(MPO)存在于吞噬細(xì)胞中,是抗微生物系統(tǒng)和炎癥調(diào)節(jié)的基本成分[15],其活性的變化可對(duì)早期組織損傷做出較敏感的反應(yīng)[16]。作為中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的標(biāo)志酶[17],其水平與細(xì)胞數(shù)量成正比,與血常規(guī)中的中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞數(shù)的增加一致;且根據(jù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),各劑量CⅡ-3均能明顯提高家兔血清中MPO的活性(P<005)。而從整體抗氧化水平而言,總抗氧化能力(T-AOC)對(duì)防御體的抗氧化作用主要通過消除自由基和活性氧,分解過氧化物,去除催化作用的金屬離子等來實(shí)現(xiàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),中劑量CⅡ-3能夠明顯增加家兔血清中T-AOC水平(P<005)。根據(jù)所測定家兔血清中抗氧化因子的活性和水平,可以認(rèn)為CⅡ-3具有一定的體內(nèi)抗氧化作用。

    實(shí)驗(yàn)通過對(duì)正常家兔外周血細(xì)胞含量及抗氧化因子進(jìn)行測定,結(jié)果顯示,給予美洲大蠊提取物CⅡ-3后,正常家兔血液中白細(xì)胞、紅細(xì)胞數(shù)量減少,對(duì)抗氧化因子MPO、CAT、GSH-PX、T-AOC具有一定的提高作用,從而表明美洲大蠊提取物CⅡ-3具有一定的抗炎、抗氧化作用,這一結(jié)果將為美洲大蠊的下一步研究提供理論依據(jù)。

    參考文獻(xiàn)

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