慢性應(yīng)激肝郁脾虛模型大鼠行為學(xué)變化及逍遙散調(diào)節(jié)作用*

河北中醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院

王杰鵬 曠湘楠△ 張城浩△ 王少賢 方朝義 趙 丹 申曉日△(石家莊 050200)

慢性應(yīng)激肝郁脾虛
模型大鼠行為學(xué)變化及逍遙散調(diào)節(jié)作用*

河北中醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院

王杰鵬 曠湘楠△張城浩△王少賢 方朝義 趙 丹 申曉日△(石家莊 050200)

目的：研究分析慢性應(yīng)激肝郁脾虛模型大鼠行為學(xué)變化及逍遙散的調(diào)節(jié)作用。方法:采用捆綁束縛方式建立大鼠模型，60只大鼠隨機(jī)平均分為3組，正常對(duì)照組、模型組、模型+逍遙散組。觀察各組大鼠一般狀態(tài)、體質(zhì)量、攝食量和曠場(chǎng)、高架十字實(shí)驗(yàn)行為學(xué)指標(biāo)變化。 結(jié)果：模型組大鼠在慢性束縛應(yīng)激初期呈積極抵抗?fàn)顟B(tài)，繼而抑郁，甚或呈絕望狀態(tài)；曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ痛笫? min內(nèi)移動(dòng)總路程、中央?yún)^(qū)移動(dòng)距離均減少；高架十字試驗(yàn)5 min內(nèi)模型組大鼠在開放臂內(nèi)停留時(shí)間和進(jìn)入次數(shù)較正常組減少，進(jìn)入封閉臂次數(shù)減少而停留時(shí)間增加。說明慢性應(yīng)激可引起動(dòng)物探究性自主活動(dòng)能力下降，隨著應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)，動(dòng)物的行為表現(xiàn)逐漸出現(xiàn)郁悶、淡漠、抑郁、焦慮狀態(tài)，同時(shí)伴隨著大鼠體質(zhì)量和攝食量較正常組明顯下降；逍遙散則對(duì)模型大鼠的上述改變具有一定的調(diào)節(jié)作用。 結(jié)論：逍遙散可在一定程度上改善慢性應(yīng)激肝郁脾虛模型大鼠的抑郁或焦慮狀態(tài)，調(diào)節(jié)其體質(zhì)量、攝食量及行為學(xué)的異常變化。

逍遙散；慢性應(yīng)激；肝郁脾虛；行為學(xué)；抑郁；焦慮

隨著生活節(jié)奏的日益加快，人們承受著越來越多來自工作和生活的壓力，從而導(dǎo)致人們處于一種慢性應(yīng)激的狀態(tài)，亦即亞健康狀態(tài)，長(zhǎng)此以往，終會(huì)導(dǎo)致疾病的發(fā)生。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，肝主疏泄而調(diào)情志，情志疾病的發(fā)生多與肝有關(guān)。因此，從肝主疏泄而調(diào)情志的角度出發(fā)，探討分析慢性應(yīng)激的生理病理學(xué)改變，已然成為如今的研究熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)以捆綁束縛方式制備慢性應(yīng)激大鼠模型，動(dòng)態(tài)觀察逍遙散對(duì)模型大鼠飲食量、體質(zhì)量以及行為學(xué)的變化，從宏觀角度觀察分析逍遙散對(duì)慢性應(yīng)激的調(diào)節(jié)作用，為其生理病理學(xué)的微觀變化觀察提供模型依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性SPF級(jí)SD大鼠60只，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司[動(dòng)物合格證編號(hào)：SCXK(京)2012-0001]，體質(zhì)量160～180 g。飼養(yǎng)于清潔級(jí)動(dòng)物房：室溫(21±1)℃，相對(duì)濕度30%～40%，光照明暗各12 h(明7：00～19：00，暗19：00～7：00)，自由飲用純凈水，常規(guī)飼養(yǎng)。大鼠適應(yīng)喂養(yǎng)1周后，按體質(zhì)量編號(hào)，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表，隨機(jī)分為3組，正常對(duì)照組、模型組、模型+逍遙散組，每組20只。

1.2 實(shí)驗(yàn)用藥及制備 依據(jù)《太平惠民和劑局方》所載逍遙散(北柴胡、白芍、當(dāng)歸、白術(shù)各30 g，茯苓、炙甘草各15 g，薄荷、生姜各10 g)制備藥物，藥物飲片購自于北京同仁堂。經(jīng)河北中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院中藥藥理實(shí)驗(yàn)室鑒定為合格藥材。并由河北中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院中藥藥理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行藥材的煎煮和濃縮(以成人7倍用藥量)，最終濃縮成濃度為3 g/mL的混懸液。置于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 行為學(xué)設(shè)備

1.3.1 曠場(chǎng)箱：長(zhǎng)×寬×高為100×100×40 cm的木制箱。內(nèi)側(cè)面、底面為灰色紙壁，用黑線平均劃分為25塊，每塊面積20×20 cm。中心9格為中央?yún)^(qū)。曠場(chǎng)箱中央正上方安置攝像頭，觀察記錄大鼠活動(dòng)情況。

1.3.2 高架十字：由兩條相對(duì)的開放臂(45×15 cm) 和兩條相對(duì)的封閉臂(45×15×30 cm)以及一個(gè)聯(lián)結(jié)4條臂的中央平臺(tái)(15×15 cm)組成，呈十字形。封閉臂頂部開放。內(nèi)壁及底面為黑色，距地面高度50 cm。在中央平臺(tái)正上方安置攝像頭，觀察大鼠活動(dòng)情況。

1.3.3 行為學(xué)記錄分析軟件：由上海欣軟信息科技有限公司提供(Version2.0)。

2 方法

2.1 模型的制備與給藥 根據(jù)課題組前期制備模型方法，[1-2]以慢性捆綁束縛方法制備大鼠模型：將大鼠束縛于特制的束縛架上(T型束縛臺(tái)：底座寬10 cm、長(zhǎng)20 cm、厚2.8 cm，上端束縛臺(tái)長(zhǎng)22 cm，最寬處6.6 cm，前端有固定頭部的小架和適合四肢放置的凹槽，上端束縛臺(tái)有兩條可調(diào)的軟帶，可分別將動(dòng)物胸、腹部固定)，每日3 h，束縛時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)，連續(xù)束縛21 d。每天于束縛前30 min進(jìn)行灌胃。逍遙散組灌服逍遙散混懸液(根據(jù)造模前所稱體質(zhì)量，計(jì)算灌胃量為2.98 g/kg·d-1，并根據(jù)體質(zhì)量的變化調(diào)整灌胃量)，模型組和正常組灌服同等體積的生理鹽水。

2.2 觀察項(xiàng)目

2.2.1 一般狀態(tài)觀察：于每日上午給藥前與束縛造模前后，肉眼觀察動(dòng)物精神狀態(tài)、束縛反應(yīng)、糞便質(zhì)地及皮毛、耳廓、眼裂黏膜色澤等外觀表征。

2.2.2 體質(zhì)量：實(shí)驗(yàn)開始前一天用電子稱稱量大鼠體質(zhì)量，作為第0 d體質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)開始后每3 d于灌胃前稱量大鼠體質(zhì)量并記錄，動(dòng)態(tài)觀察各組大鼠的體質(zhì)量變化趨勢(shì)。

2.2.3 攝食量：在正式捆綁束縛開始前一天對(duì)各組大鼠進(jìn)行定食，并于次日稱剩余量，計(jì)算攝食量(攝食=定食量-剩余量)，作為第0 d飲食量。正式捆綁束縛后每3 d記錄各組大鼠攝食量，動(dòng)態(tài)觀察各組大鼠攝食量的變化。

2.2.4 行為學(xué)觀察：環(huán)境要求：安靜、避光，避免干擾。分別于實(shí)驗(yàn)第0(捆綁束縛之前)、7、21天相同時(shí)間段進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，用行為學(xué)分析軟件進(jìn)行記錄。每只大鼠實(shí)驗(yàn)完畢后，撿拾糞粒，并用毛巾蘸清水和75%醫(yī)用酒精徹底擦拭，待其揮發(fā)晾干，避免大鼠留有尿、糞氣味干擾下只動(dòng)物活動(dòng)情況。具體的行為學(xué)觀測(cè)指標(biāo)包括：各組大鼠5 min在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中移動(dòng)總路程、在中央?yún)^(qū)移動(dòng)總路程和停留時(shí)間，在高架十字實(shí)驗(yàn)中進(jìn)入開放臂和封閉臂次數(shù)以及停留時(shí)間。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠一般狀態(tài)觀察 束縛造模前，各組大鼠均活潑好動(dòng)、動(dòng)作反應(yīng)靈敏、毛色光白明亮、柔潤(rùn)整潔、耳廓與爪部色澤紅潤(rùn)，糞便正常球形、干濕適中。

束縛造模初，正常組大鼠未有明顯改變。模型組和逍遙散組大鼠警惕性增強(qiáng)，在捕捉前扎堆現(xiàn)象比較明顯，易被激惹，捕捉時(shí)反抗較為強(qiáng)烈，出現(xiàn)弓背、毛發(fā)豎立的狀態(tài)，束縛后出現(xiàn)撕咬束縛架、身體強(qiáng)烈扭動(dòng)掙脫束縛的現(xiàn)象。束縛7 d后，模型組大鼠出現(xiàn)精神萎靡，趴臥少動(dòng)，甚至嗜睡懶動(dòng)，動(dòng)作靈敏度降低，活動(dòng)量減少，趴臥、蜷臥、扎堆現(xiàn)象多見。皮毛逐漸泛黃干枯、晦暗無澤、散亂不潔，耳廓與爪部顏色變淡白無光澤，舌色淡白，糞便呈濕軟便。捕捉時(shí)動(dòng)作反應(yīng)不靈敏，反抗不積極，弓背減少。束縛后撕咬、身體扭動(dòng)掙脫次數(shù)減少，呈呆滯狀態(tài)。待松開束縛帶，放入籠中后，多數(shù)趴臥蜷縮蟄伏于角落。逍遙散組大鼠，最初表現(xiàn)大多同于模型組，但從束縛第2周末開始，各項(xiàng)狀態(tài)較模型組好轉(zhuǎn)，尤其在第3周末，精神狀態(tài)良好，反應(yīng)靈敏，活潑好動(dòng)，皮毛色可有光澤、稍枯但整潔不亂，耳廓與爪部色淡粉，舌色淡紅，糞便干濕適中，成形尚好。

3.2 各組大鼠體質(zhì)量、攝食量變化 在束縛應(yīng)激前，各組大鼠體質(zhì)量、攝食量之間比較無差別。造模后，模型大鼠在各時(shí)間點(diǎn)的體質(zhì)量、攝食量均較正常組降低，尤其體質(zhì)量變化明顯(P<0.05或P<0.01)；逍遙散則具有相應(yīng)的調(diào)節(jié)作用，尤其在實(shí)驗(yàn)第3、9、18 d體質(zhì)量較模型組明顯增加(P<0.05或P<0.01)。詳見表1、表2。

時(shí)間(d)正常組 模型組 模型+逍遙散組 026507±129026131±74026853±1073329246±162427283±850※29088±1430▲631698±177028894±1083※※30945±1810933655±216530002±1188※※32847±1887▲▲1235322±227131058±1363※※33487±20831536973±243632221±1232※※34318±21091838609±262633202±1255※※35947±2119▲2140185±268534857±1320※※37391±2242

注：與正常組比較，※P<0.05，※※P<0.01；與模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01

時(shí)間(d)正常組 模型組 模型+逍遙散組 02903±4792930±5552940±52333087±1272593±068※※2753±121※※63043±0802490±075※※2700±072※※▲93057±1882550±010※2770±286123087±3812507±282797±133153087±4712543±2112700±050183083±0992510±1002790±502213030±2232493±042※※2783±129

注：與正常組比較，※P<0.05，※※P<0.01；與模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01

3.3 各組大鼠行為學(xué)變化

3.3.1 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)：各組大鼠5 min在曠場(chǎng)中移動(dòng)總路程、中央?yún)^(qū)移動(dòng)距離和停留時(shí)間比較。在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，5 min內(nèi)模型組大鼠活動(dòng)的總路程和在中央?yún)^(qū)移動(dòng)距離、停留時(shí)間，與正常組相比有減少趨勢(shì)，尤其是21 d模型組大鼠在中央?yún)^(qū)的移動(dòng)距離明顯減少(P<0.01)，逍遙散組大鼠活動(dòng)的總路程和在中央?yún)^(qū)移動(dòng)距離、停留時(shí)間較模型組有增加趨勢(shì)。詳見表3～表5。

組別0d 7d 21d 正常組430869±85256295747±68956270816±99494模型組377385±109083230532±99797173125±98440模型+逍遙散組398768±96545267871±100281207053±134278

組別0d 7d 21d正常組62521±2567332083±2420551617±23444模型組62126±3149829766±9733 20598±23267※※模型+逍遙散組66368±1520528226±2100924665±16510※※▲

注：與正常組比較，※P<0.05，※※P<0.01; 與模型組比較，▲P<0.05

3.3.2 高架十字實(shí)驗(yàn)：各組大鼠5 min進(jìn)入開放臂次數(shù)和停留時(shí)間、進(jìn)入封閉臂次數(shù)和停留時(shí)間比較。在高架十字試驗(yàn)中，5 min內(nèi)模型組大鼠在開放臂內(nèi)停留時(shí)間、進(jìn)入次數(shù)較正常組有所減少，尤其是21 d模型組大鼠進(jìn)入封閉臂的次數(shù)下降明顯(P<0.05)，逍遙散組大鼠大鼠在開放臂內(nèi)停留時(shí)間、進(jìn)入次數(shù)較模型組大鼠明顯增加(P<0.05或P<0.01)；同時(shí)，模型大鼠進(jìn)入封閉臂次數(shù)有所減少，而在封閉臂內(nèi)停留時(shí)間有所增加，21 d模型組大鼠尤其明顯。逍遙散組大鼠與模型組大鼠相比進(jìn)入封閉臂次數(shù)增多，但停留時(shí)間減少。詳見表6～表9。

組別0d7d21d正常組3296±7462359±14192934±1732模型組3290±4402059±18631977±1699模型+逍遙散組3123±17322243±22882575±2783

組別0d 7d 21d正常組3042±286551664±21361401±1104模型組2952±2054928±1393540±324模型+逍遙散組2829±20721244±3111967±705▲▲

注：與模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01

表7各組大鼠5 min進(jìn)入開放臂次數(shù)比較 (n=10，次，

注：與正常組比較，※P<0.05， 與模型組比較，▲P<0.05

組別0d7d21d正常組26330±352631165±575328730±4439模型組26578±527334771±148632641±2522模型+逍遙散組26424±484432120±375728606±9295

表9 各組大鼠5 min進(jìn)入封閉臂次數(shù)比較 (n=10，次，

注：與正常組比較，※P<0.05，※※P<0.01; 與模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01

4 討論

在本試驗(yàn)中，筆者采用每天束縛捆綁3 h，連續(xù)21 d方法制備慢性應(yīng)激大鼠模型，主要采用曠場(chǎng)試驗(yàn)和高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)觀察慢性應(yīng)激大鼠的自主活動(dòng)狀態(tài)以反映動(dòng)物的情緒狀態(tài)變化。

行為的變化可以客觀的反應(yīng)肌體的生理或病理狀態(tài)。曠場(chǎng)試驗(yàn)(OFT)是目前最常用于測(cè)定大鼠情緒、心理狀態(tài)的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，能以量化的指標(biāo)客觀反映大鼠的活動(dòng)性、探索性和抑郁、焦慮程度以及對(duì)未知的探究欲望，從而提示受試大鼠的情緒狀態(tài)；高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)[3]是利用動(dòng)物對(duì)新奇環(huán)境的探究特性與對(duì)高懸敞開臂的恐懼心理，形成動(dòng)物的矛盾行為。有研究表明，大鼠經(jīng)慢性應(yīng)激刺激后會(huì)出現(xiàn)一系列情緒性行為改變。[4-6]Kaur R等[7]研究表明，束縛應(yīng)激可導(dǎo)致大鼠在曠場(chǎng)試驗(yàn)運(yùn)行路線和理毛次數(shù)等自主活動(dòng)減少。

結(jié)合既往研究結(jié)果[8-9]表明，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中5 min內(nèi)模型組大鼠活動(dòng)的總路程和在中央?yún)^(qū)移動(dòng)距離、停留時(shí)間，與正常組相比均減少，探究性自主活動(dòng)能力下降；高架十字試驗(yàn)中5 min內(nèi)模型組大鼠在開放臂內(nèi)停留時(shí)間和進(jìn)入次數(shù)較正常大鼠有所減少，進(jìn)入封閉臂次數(shù)有所減少而停留時(shí)間有所增加，21 d模型組大鼠尤其明顯。說明慢性應(yīng)激可引起動(dòng)物自主行為活動(dòng)減少，隨著應(yīng)激時(shí)程的延長(zhǎng)，動(dòng)物的行為表現(xiàn)逐漸出現(xiàn)郁悶、淡漠、抑郁、焦慮狀態(tài)，同時(shí)伴隨著大鼠體質(zhì)量和攝食量較正常組的明顯下降。

束縛應(yīng)激方式剝奪了動(dòng)物的活動(dòng)自由，與人類心身性疾病的過程有相似性，可見肌體出現(xiàn)抑郁、焦慮等情緒障礙和行為、食欲、體質(zhì)量異常改變，臨床表現(xiàn)與中醫(yī)肝郁致脾虛證候類似。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，脾的運(yùn)化和胃的受納腐熟功能有賴于肝的疏泄功能，“土得木而達(dá)”(《素問·寶命全形論》)。一旦肝失疏泄，則木郁乘土，影響脾胃的健運(yùn)。

在本研究中，筆者選用具有疏肝解郁、健脾養(yǎng)血之功效的逍遙散(《太平惠民和劑局方》)進(jìn)行干預(yù)。作為國(guó)內(nèi)學(xué)者抗應(yīng)激的首選方藥，逍遙散抗應(yīng)激效應(yīng)得到了廣泛研究，并取得了階段性成果。[10-13]本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果顯示，應(yīng)激模型大鼠的體質(zhì)量、攝食量及外觀表現(xiàn)，與行為學(xué)的變化相一致，而逍遙散則具有明顯的調(diào)節(jié)作用。至于其改善的具體機(jī)制，本課題組將著重從下丘腦弓狀核攝食調(diào)控相關(guān)通路(NPY/AgRP和CART/POMC)進(jìn)一步研究。

[1]WangSX,ChenJX,YueGX,et al. Xiaoyaosan Decoction Regulates Changes in Neuropeptide Y and Leptin Receptor in the Rat Arcuate Nucleus after Chronic Immobilization Stress[J] .Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2012,doi:10.1155/ 2012/381278

[2]WangSX,ChenJX,YueGX. Neuropeptide Y and leptin receptor expression in the hypothalamus of rats with chronic Immobilization stress[J].Neural Regeneration Research, 2013, 8(18): 1 721-1 726

[3]Lister RG. The use of a plus-maze to measure anxiety in the mice[J]．Psvchoph- aimacolony (Berl)，1987，92 (2) ：180-185

[4]李慶和，李慧吉，李杰，等．慢性應(yīng)激對(duì)氣機(jī)失調(diào)證大鼠行為的影響[J]．中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2004，11(4)：251-252

[5]陳夫銀，柳威，趙虎，等．強(qiáng)迫游泳應(yīng)激大鼠行為和血清皮質(zhì)酮的變化[J]．中國(guó)行為醫(yī)學(xué)科學(xué)，2006，15(3)：229-231

[6]陳純姿，劉少文，趙巍峰．慢性應(yīng)激對(duì)大鼠行為和體重的影響[J]．中國(guó)民康醫(yī)學(xué)，2005，17(3)：129-130

[7]Kaur R, Jaggi AS, Singh N. Studies on effect of stress preconditioning in restrain stress induced behavioral alterations.Yakugaku Zasshi, 2010, 130(2): 215-221

[8]Chen JX, Li W, Zhao X, et al. Effects of the Chinese traditional prescription Xiaoyaosan decoction on chronic immobilization stress-induced changes in behavior and brain BDNF, TrkB, and NT-3 in rats[J]． Cell Mol Neurobiol, 2008, 28(5): 745-755

[9]陳家旭，李偉，趙歆，等．三種中藥復(fù)方對(duì)慢性束縛應(yīng)激大鼠行為及皮層和海馬NT3 的影響[J]．北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，27(2)：19-23

[10]臧知明，楊力強(qiáng)，李曉紅．逍遙散對(duì)慢性束縛應(yīng)激肝郁脾虛證模型大鼠NPYmRNA表達(dá)的影響[J]．中華中醫(yī)藥雜志，2014，29(12)：3 995-3 997

[11]劉玥蕓，郭曉玲，趙宏波，等.逍遙散提取物對(duì)肝郁脾虛證模型大鼠療效的行為學(xué)評(píng)價(jià)[J]．中華中醫(yī)藥雜志，2013，28(7)：2 138-2 141

[12]姜幼明，張漢霆，陳家旭.逍遙散對(duì)慢性束縛應(yīng)激肝郁脾虛證模型大鼠杏仁核Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)的影響[J]．中華中醫(yī)藥雜志，2012，27(4)：882-885

[13]富文俊，曹國(guó)平，富麗俊. 慢性應(yīng)激神經(jīng)可塑性調(diào)控機(jī)制研究進(jìn)展及逍遙散的調(diào)控作用探討[J]．中華中醫(yī)藥雜志，2015，30(12)：4 384-4 387

(2016-07-31 收稿)

Ethological Changes of Chronic Stress Liver-qi and Spleen Deficiency Type Rats and Accomodation of Xiao Yao San

Basic Medical College, Hebei University of Chinese Medicine

WANGJie-pengKuangXiang-nanZHANGCheng-haoWANGShao-xianFANGChao-yi
ZHAODanSHENXiao-ri(Shijiazhuang 050200)

Objective: to study and analyze the ethologhical changes of chronic stress liver-qi and spleen deficiency type rats and the accomodation of Xiao Yao San (XYS). Methods: 60 model rats, made by binding mode, were randomly divided into three groups: control group, model group and model & XYS group，observing the changes of their common states, mass, food consumption, the open field and elevated plus experimental behavior. Results: rats of model group showed a state of active resistance at the early stage of chronic binding stress, and further depression, or even desperation; rats in the open field test had shortened total moving distance and distance in central zone in five minutes; in elevated plus experiment, in five minutes, the residence time in the open arm and entries of the rats reduced compared to control group; time in the closed arm lengthened while the entries reduced. It showed that chronic stress could decrease the animal's exploring ability of independent activities. With the lengthening of stress time, the rats became gloomy, indifferent, depressed and anxious, accompanying with the decreasing of body mass and food consumption significantly; XYS could regulate the changes mentioned above. Conclusion: XYS can in some degree improve the state of depression or anxiety in chronic stress liver-qi and spleen deficiency type rats, regulate the body mass, food consumption and abnormal behaviors.

Xiao Yao San; chronic stress; liver-qi and spleen deficiency; ethology; depression; anxiety

*國(guó)家自然基金資助項(xiàng)目：No.81202644、No.81673881；河北省自然科學(xué)基金項(xiàng)目：No.H2016423049；2012年度高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金資助課題(新教師類)；No.20121323120016；河北省教育廳高等學(xué)?？茖W(xué)研究項(xiàng)目：No.QN2014118

王少賢，女，副教授，醫(yī)學(xué)博士，碩士研究生導(dǎo)師； 方朝義，男，教授，醫(yī)學(xué)博士，博士研究生導(dǎo)師。

R285.5

A

1007-5615(2016)04-0007-05

△河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院(石家莊 050017)