蒙藥黃連-4湯對心肌缺血再灌注損傷SD大鼠炎癥因子TNF-α、IL-6的影響

李 平，金哈布日，張青山*，布仁巴圖*

（1．內(nèi)蒙古民族大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合在讀研究生，內(nèi)蒙古 通遼 028000；2．內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000）

近年來，防止缺血性心臟病方面取得了較滿意的成果，隨之出現(xiàn)的心肌缺血再灌注損傷（Myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI）成為目前急需解決的醫(yī)學(xué)難題[1]。有研究證實急性心肌梗死患者接受了最好的再灌注治療，但還是有10%～30%的幾率出現(xiàn)MIRI，MIRI現(xiàn)在被認(rèn)為是導(dǎo)致心梗后心力衰竭的發(fā)生率高達(dá)了25%及年死亡率達(dá)到了10%的最主要原因[2]。因此MIRI在心血管疾病當(dāng)中危及人們生命的最主要病因之一。缺血再灌注損傷與炎癥因子的關(guān)系現(xiàn)已成大家的共識[3]。目前對再灌注損傷機制的研究很多，發(fā)現(xiàn)缺血后心臟功能的損傷程度炎與癥因子水平的高低有直接的關(guān)系[4]。在治療心血管疾病方面?zhèn)鹘y(tǒng)蒙藥具有獨特的優(yōu)勢。蒙藥黃連-4湯是蒙藥傳統(tǒng)方劑之一，由黃連、梔子、瞿麥、多葉棘豆組成，具有清熱解毒、防止燥濁熱、調(diào)理赫依齊素相搏之功效。其主要成分黃連具有清熱燥濕、瀉火解毒、改善心臟赫依、齊素循環(huán)、抗癌、降糖、調(diào)節(jié)免疫功能、改善心血管功能、降血壓、抗血小板聚集等藥效。本文初步探討蒙藥黃連-4湯對SD大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用機制，為蒙藥黃連-4湯應(yīng)用與臨床提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 實驗材料

（1）試驗動物

60只健康雄性SD大鼠，體重大約（280±20）g，購自遼寧長生生物技術(shù)有限公司（許可證號碼：SCXK（遼）2015-0001）。要飼養(yǎng)于恒濕和恒溫的動物室中，在相同飼養(yǎng)環(huán)境中，自由取用飲用水和食物。

（2）主要試劑及藥品

蒙藥黃連-4湯（生產(chǎn)于內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院制劑室）；丹參片（南京厚生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)）；腫瘤壞死因子-alpha試劑盒（S0000-96T）；白細(xì)胞介素-6試劑盒（S0000-96T）；水合氯醛（天津市天力化學(xué)試劑有限公司）。

（3）主要儀器

酶標(biāo)儀（multiskanmd3，wellwash4mkz 芬蘭）；低速自動平衡離心機（北京時代北利離心機有限公司）；恒溫培養(yǎng)箱（BDR-82，上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；心電圖機、動物呼吸機（HX-300S）、BL-420S生物技能實驗系統(tǒng)（成都泰盟軟件有限公司）。

1.2 實驗方法

（1）動物分組

6 0只正常雄性S D大鼠喂養(yǎng)一周，體重約（280±20）g，隨機分成六個小組，每組10只大鼠。分為假手術(shù)組、模型組、蒙藥黃連-4湯高劑量組、蒙藥黃連-4湯中劑量組、蒙藥黃連-4湯低劑量組、丹參組。

（2）給藥方法

假手術(shù)組和模型組：灌胃等容量的生理鹽水，低劑量蒙藥黃連-4湯組：40 mg/kg·d，中劑量蒙藥黃連-4湯組：80 mg/kg·d，高劑量蒙藥黃連-4湯組：160 mg/kg·d，丹參組（陽性對照組）：40 mg/kg·d，溶于和假手術(shù)組、模型組等體積的生理鹽水，每天灌胃1次，連續(xù)15天。

（3）模型建立

按文獻(xiàn)[5]方法加以改進后進行造模。大鼠腹腔內(nèi)注射10%水合氯醛進行麻醉，麻醉后在手術(shù)臺上仰臥位固定，剪斷頸部毛，切開并暴露氣管，T字型切開氣管置氣管套管接小動物呼吸機（呼吸頻率70～80次/分，呼吸比3:2，潮氣量0.002-0.003L），大鼠的四肢皮下插入電極，連接實驗系統(tǒng)，記錄Ⅱ?qū)?lián)的心電圖。在胸骨左緣第3或4肋間分離肌肉及組織，逐層打開胸腔，暴露心臟，在左心耳下約2 mm處用6～0無損傷真絲線進針（深度約1.0～1.5 mm），結(jié)扎左冠狀動脈前降支，然后關(guān)胸腔，使心肌缺血30 min后松開結(jié)扎線再灌注1.5 h。對照組只穿線不予結(jié)扎處理。缺血時結(jié)扎下方的心肌組織蒼白，心電圖ST段抬高或T波異常，再灌注時缺血區(qū)心肌組織由蒼白轉(zhuǎn)紅潤，抬高的ST段下降至50%以上。

（4）生化指標(biāo)檢測

各組大鼠均再灌注90 min后，腹主動脈取血（約3 mL），離心15 min（3000r·min-1，4℃）取上清放入-80℃冰箱凍存?zhèn)溆茫瑴y定血清中炎癥因子TNF-α、IL-6的指標(biāo)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件對本次數(shù)據(jù)進行分析處理，計數(shù)資料以例（n），百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用x2檢驗，計量資料以“±s”表示，采用t檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 蒙藥黃連-4湯對大鼠MIRI血清TNF-α水平的影響

與假手術(shù)組比較，模型組血清TNF-α的表達(dá)顯著性升高（P＜0.05）。與模型組比較，蒙藥黃連-4湯各劑量組均使血清TNF-α水平降低，其中高劑量組產(chǎn)生顯著性作用（P＜0.05）。與模型組相比，丹參組血清TNF-α水平顯著性降低（P＜0.05）。與丹參組相比，黃連-4湯高劑量組血清TNF-α水平的表達(dá)顯著性降低（P＜0.05）。

2.2 蒙藥黃連-4湯對大鼠MIRI血清IL-6水平的影響

與假手術(shù)組相比，模型組血清IL-6水平的表達(dá)顯著性升高（P＜0.05）。與模型組相比，蒙藥黃連-4湯各劑量組均使血清IL-6水平降低，其中高劑量組產(chǎn)生顯著性作用（P＜0.05）。與模型組相比，丹參組血清IL-6水平顯著性降低（P＜0.05）。

3 討 論

心肌缺血再灌注損傷與炎癥密切相關(guān)。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，缺血再灌注不但會引起嚴(yán)重的組織損傷，還存在著深度的炎癥反應(yīng)[6]。研究顯示：再灌注過程中大量白細(xì)胞浸潤于心肌組織中，通過釋放多種炎癥細(xì)胞因子而加劇心肌損害[7]。本實驗結(jié)果顯示：心肌缺血再灌注損傷時，血清TNF-α、IL-6水平升高，黃連-4湯治療后血清TNF-α、IL-6β水平顯著性降低（P＜0.05）。因此達(dá)到了藥物干預(yù)的保護作用。在治療心血管疾病方面有很多蒙藥可以用，但最常用的往往幾種，比如：新-II，廣棗-7味丸等藥物。目前對蒙藥黃連-4湯的研究頗少，值得我們進一步研究。

TNF-α是一種單核因子（炎癥因子），主要有單核細(xì)胞和巨核細(xì)胞產(chǎn)生，心肌巨核細(xì)胞和心肌單核細(xì)胞本身都可以合成TNF-α，但是在心肌組織中的水平較低，發(fā)生損傷后細(xì)胞便會釋放大量的TNF-α，大量的TNF-α?xí)又匦募∪毖俟嘧p傷。有文獻(xiàn)報道，TNF-α參與急性心肌梗死發(fā)病，并與缺血-再灌注損傷的發(fā)病過程有關(guān)[8]。TNF-α能激活一系列級聯(lián)反應(yīng)，誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)表面黏附因子，促使中性粒細(xì)胞聚集在缺血區(qū)，加重缺血缺氧程度，釋放多種促炎性因子，同時也促進活性氧產(chǎn)生，加重再灌注期心肌組織的損傷[9]。IL-6也是一個重要的炎癥因子。IL-6能夠刺激參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞增值、分化、并提高其功能。TNF-α和IL-6可以導(dǎo)致心肌細(xì)胞壞死，因為它們是在缺血再灌注損傷過程中由炎癥浸潤細(xì)胞產(chǎn)生的前炎癥細(xì)胞因子[10]。心肌細(xì)胞喪失的原因之一是心肌梗死后激活免疫系統(tǒng)而發(fā)生的自身免疫反應(yīng)[11]。研究表明，缺血及再灌注可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞產(chǎn)生IL-6[12]。炎性細(xì)胞因子在缺血再灌注損傷的保護機制中起著反面作用[13]。

在本實驗中，形成心肌缺血再灌注損傷時模型組血清炎癥因子IL-6、TNF-α的含量比假手術(shù)組明顯升高。與模型組比較黃連-4湯各劑量組均使血清IL-6水平降低，其中高劑量組產(chǎn)生顯著性作用（P＜0.05），蒙藥黃連-4湯各劑量組之間沒有顯著性差異，但具有下降的趨勢。心肌缺血再灌注損傷血清IL-6的表達(dá)在高劑量組和丹參組之間沒有顯著性差異，但也具有下降的趨勢.在血清TNF-α的表達(dá)中，與丹參組相比，蒙藥黃連-4湯高劑量組血清TNF-α的表達(dá)顯著性降低（P＜0.05），蒙藥黃連-4湯高劑量組治療心肌缺血再灌注損傷可能比丹參組藥效好。蒙藥黃連-4湯治療心肌缺血再灌注損傷時可能是通過抑制炎癥因子的產(chǎn)生而發(fā)揮其保護心臟作用。

綜上所述，蒙藥黃連-4湯治療心肌缺血再灌注損傷時可能降低炎癥因子TNF-α、IL-6的含量，改善其炎癥狀態(tài)，達(dá)到保護心臟的目的。其具體機制、復(fù)方的有效成分及單體方面還需進行深入的研究，為蒙藥治療心肌缺血再灌注損傷提供更多的科學(xué)依據(jù)。

[1]譚國勝.藏醫(yī)方五味余甘子散對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用[D].青海大學(xué),2014.

[2]李俊平,郭麗麗,陳 中,等.丹蔞片對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用及機制[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2017,23(1):95-100.

[3]殷惠軍,王顯剛,史大卓,等.蒺藜總皂苷對心肌缺血再灌注損傷炎癥因子TNF-α、IL-1β釋放的影響[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2006,31(10):986-987.

[4]董六一,陳志武.心肌缺血再灌注損傷與炎癥反應(yīng)[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2008,13(5):582-588.

[5]韓 軍,宣佳麗,胡浩然,等.金絲桃苷預(yù)處理減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷作用與OI3K/AKT信號通路的關(guān)系[J].中國中藥雜志,2015,4(1):118-123.

[6]陳福暉,劉達(dá)興,容松.心肌缺血再灌注損傷發(fā)生機制的研究進展[J].安徽醫(yī)藥,2017,(12):2145-2148.

[7]董 博,周勝華,喻思揚,唐 亮,等.NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域3炎性體與心肌缺血再灌注損傷[J].中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2017,42(7):848-853.

[8]宋麗娟.卡托普利對兔心肌缺血-再灌注損傷血清炎癥因子的影響[J].南昌大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2010,50(8):21-23.

[9]Wang C,Sun H,Song Y,et al.Pterostilbene attenuates in fl ammation in rat heart subjected to ischemia-reperfusion:role of TLR4/NF-κB signaling pathway[J].Int J Clin Exp Med,2015,8(2):1737-1746.

[10]王裕勒,曹雪濱,馮義柏,等.粉防已堿抑制心肌細(xì)胞磷酸化減輕缺血/再灌注損傷引發(fā)的炎癥反應(yīng)[J].心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志,2010,19(1):57-60.

[11]谷高玲,趙國安,孫海燕,等.冠心病患者細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑1基因多態(tài)性的臨床意義[J].中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2013,42(5):436.

[12]齊曉云,徐 萍,李春華,等.血漿組織因子及其途徑抑制物對急性心肌梗死患者雷帕霉素支架置入后血栓形成的影響[J].中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2011,40(7):639-641.

[13]Chao W.Toll-like receptor signaling:a critical modulator of cell survivaland ischemic injury in the heart[J].Am J Physiol Heart Circ Physiol,2009,296(1):H1-12.