白細胞介素-24基因用于膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病患者中的效果

李洪強，劉 偉，趙立強

（哈爾濱市第五醫(yī)院骨科，黑龍江 哈爾濱 150040）

白細胞介素-24基因用于膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病患者中的效果

李洪強，劉 偉，趙立強

（哈爾濱市第五醫(yī)院骨科，黑龍江 哈爾濱 150040）

目的 評估白細胞介素-24基因用于膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病患者中的效果。方法 篩選本市三甲醫(yī)院2015年6月～2016年4月接收的膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病患者46例，設(shè)置為研究組（實驗標本：膝關(guān)節(jié)滑膜標本）；同時篩選同期在本市三甲醫(yī)院體檢的健康人45例，設(shè)置為參照組（實驗標本：膝關(guān)節(jié)滑膜組織），提取機體RNA，以實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)來檢測膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜組織中白細胞介素-24基因表達。結(jié)果 研究組白細胞介素-24基因表達值（0.051±0.006），參照組白細胞介素-24基因表達值（0.940±0.070），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)論 臨床檢驗膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病患者過程中，白細胞介素-24基本表達降低，可為臨床確診及救治膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎提供依據(jù)。

白細胞介素-24；基因；膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎

為了解白細胞介素-24基因用于膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病患者中的效果，篩選本市三甲醫(yī)院接收的膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病患者46例，同時篩選同期在本市三甲醫(yī)院體檢的健康人45例作研究對象，提取機體RNA，以實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)來檢測膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜組織中白細胞介素-24基因表達，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

篩選本市三甲醫(yī)院2015年6月～2016年4月接收的膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病患者46例，女26例/男20例，40至60歲，均值（52±3.15）歲；同時篩選同期在本市三甲醫(yī)院體檢的健康人45例（參照組），女25例/男20例，42至60歲，均值（53±5.05）歲。比對兩組各項資料，差異無統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

1.2 方法

提取機體RNA，以實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)來檢測膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜組織中白細胞介素-24基因表達：（1）選取電子天平稱取組織樣本0.3～0.5 g，以液氮預(yù)冷研缽將組織樣本研磨，為保證組織不會融化，研磨時可添加定量液氮。根據(jù)RNA提取液100：1的比例慢慢加入RNA，而后研磨組織直至粉末狀，將其轉(zhuǎn)到干凈工作臺，待融化之后將液體轉(zhuǎn)移至1.5 ml體積離心管內(nèi)，1 ml/管，并在室溫下保存超過15 min；檢驗人員根據(jù)氯仿：RNA提取液為0.2:1的比例融入氯仿，將其搖勻30秒左右，且并室溫下保存2～3 min，并于4℃環(huán)境下，每分鐘15000 r，時間保持在15 min左右[1]。將離心后所得上清液轉(zhuǎn)移至Eppendorf管中；（3）異丙醇：RNA提取液為0.5:1的比例融入異丙醇，搖勻，于零下20℃的環(huán)境下放置超過10 min，在4℃環(huán)境下，每分鐘15000 r，大約15 min；（4）把異丙醇完全棄掉，融入乙醇1 ml75%，反復(fù)顛倒，于4℃環(huán)境下，7500 r/min，離心大約5 min。而后把75%的乙醇棄掉，于超凈臺內(nèi)自然干燥大約15～30 min；根據(jù)RNA沉淀大小慢慢加入體積適宜的無核酸酶水，并在65℃的環(huán)境下助溶大約5～10 min，放于零下80℃的環(huán)境下長時間冷凍保存。

選取2 ugRNA放在反應(yīng)管內(nèi)，添加1uLO ligodT，而后加入2.5 mmol 4 uLdNTPm，搖勻，加入加dd H2O直到13 uL。于60℃環(huán)境下保存10 min后，于冰上保存超過1 min。向反應(yīng)管內(nèi)倒入5×4 uL第一鏈緩沖液，1 ul二硫蘇糖醇0.1 mol，1ulRNaseout，1ulSuperscri ptⅢ RT，搖勻后離心，于70℃環(huán)境下經(jīng)滅活逆轉(zhuǎn)錄酶，以合成cDNA第一鏈，保存在4℃環(huán)境下。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結(jié) 果

檢驗結(jié)果顯示，研究組白細胞介素-24基因表達值0.051±0.006，參照組白細胞介素-24基因表達值0.940±0.070。差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

3 討 論

作為臨床常見關(guān)節(jié)炎病癥之一，膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎主要指膝關(guān)節(jié)受慢性勞損、外傷及關(guān)節(jié)嚴重畸形等伴發(fā)的關(guān)節(jié)軟骨增生，臨床表現(xiàn)為疼痛、伸屈受限、腫脹等癥狀。患者一旦伴發(fā)膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎，易使軟骨代謝發(fā)生較大變化，主要表現(xiàn)在關(guān)節(jié)軟骨結(jié)構(gòu)不斷變化，滑膜炎癥一直影響此過程。

此次重點了解白細胞介素-24基因用于膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病患者中的效果，白細胞介素內(nèi)包含抑制白細胞介素、促炎癥白細胞介素2類，運用到膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎中的效果確切[2]。白細胞介素-24與炎癥抑制、腫瘤抑制及損失修復(fù)作用等有緊密聯(lián)系，可抑制機體鼻咽癌、宮頸癌、肺癌等癌細胞持續(xù)生長。而且白細胞介素-24在機體損傷修復(fù)中，可提升皮膚角化內(nèi)的細胞表達，進一步抑制因TGF-α所產(chǎn)生的促炎癥作用。

綜上所述，經(jīng)分析白細胞介素-24I基因運用到膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病患者中的具體作用機制，結(jié)果顯示，可大大降低基因表達，表明白細胞介素-24與膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病有直接聯(lián)系。

[1] 趙 霽.通絡(luò)止痛膏治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎臨床療效與護理[J].中國民間療法,2016,24(7):40-41.

[2] 衡 麗.超聲電導(dǎo)藥物治療老年膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的臨床觀察[J].中國保健營養(yǎng),2016,26(12):87-88.

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B

ISSN.2095-6681.2017.29.89.01

吳宏艷