不同產(chǎn)地盾葉薯蕷質(zhì)量綜合評(píng)價(jià)比較＊

左春芳，呂亞新，張賢良

藥學(xué)

不同產(chǎn)地盾葉薯蕷質(zhì)量綜合評(píng)價(jià)比較＊

左春芳，呂亞新，張賢良

目的 對(duì)采自3個(gè)不同產(chǎn)地的盾葉薯蕷的質(zhì)量進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)研究。方法 利用HPLC法對(duì)3個(gè)不同產(chǎn)地共計(jì)12批的盾葉薯蕷中薯蕷皂苷、偽原薯蕷皂苷、薯蕷皂苷元的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果 湖北鄖西、陜西安康、湖南安化3個(gè)產(chǎn)地中薯蕷皂苷的含量范圍為0.4752%～0.8931%、偽原薯蕷皂苷的含量為0.7348%～1.0023%、薯蕷皂苷元的含量范圍為2.3384%～5.6641%，經(jīng)分析表明3個(gè)產(chǎn)地的盾葉薯蕷中有效成分有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)論

盾葉薯蕷；產(chǎn)地；HPLC法；質(zhì)量評(píng)價(jià)

盾葉薯蕷（Dioscorea zingiberensis C.H.Wright），又名火頭根，是被子植物門，單子葉植物綱，薯蕷科薯蕷屬，草質(zhì)藤本，根莖橫生。根據(jù)中國(guó)薯蕷植物資源調(diào)查資料，盾葉薯蕷垂直分布在海拔100～1500 m的河谷﹑山地﹑落葉闊葉混交林的邊緣或稀疏的常綠灌木林內(nèi)，要求氣溫高﹑光照強(qiáng)。將其劃分為兩個(gè)區(qū)：Ⅰ秦巴－武當(dāng)區(qū)，Ⅱ西南－中南區(qū)。盾葉薯蕷以根狀莖入藥，其性味甘﹑苦﹑涼 ，具有清肺止咳，利濕通淋，通絡(luò)止痛，解毒消腫的功能，也有降低膽固醇、抗炎、抗腫瘤等藥理作用。它有祛痰、脫敏、抗炎、降脂、抗腫瘤等作用，而且它還是合成甾體激素類藥物的重要原料［1－3］。

該實(shí)驗(yàn)主要采集了湖北鄖西、陜西安康、湖南安化3個(gè)產(chǎn)地的盾葉薯蕷，建立能夠客觀反映盾葉薯蕷質(zhì)量的多類型多指標(biāo)成分的評(píng)價(jià)體系，并對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 1200型 HPLC儀 （Agilent公司）；ELSD 2000 ES型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 （德國(guó)Alltech公司）；DAD檢測(cè)器 （Agilent公司）；色譜柱為DIKMA C18色譜柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；KQ－700DB型數(shù)控超聲波清洗器；HHS－6型水浴鍋 （江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠）；FA2004A型電子分析天平（上海精天電子儀器有限公司）。

1.1.2 試藥 薯蕷皂苷標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)：19057－60－4，成都曼斯特生物科技有限公司）；薯蕷皂苷元標(biāo)準(zhǔn)品 （批號(hào)：512－04－9，成都曼斯特生物科技有限公司）；偽原薯蕷皂苷標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)：111855－201001；中國(guó)藥品生物制品檢定所）；乙腈為色譜純（TEDIA公司），水為雙蒸水，甲醇、乙醇均為分析純。中性氧化鋁（150目，上海陸都化學(xué)試劑廠），石油醚（60～90℃，深圳市奧斯朗科技有限公司）。

1.1.3 藥材 本實(shí)驗(yàn)所用的盾葉薯蕷藥材分別采自陜西安康、湖北鄖西、湖南安化，經(jīng)河南中醫(yī)學(xué)院董誠(chéng)明教授鑒定， 為盾葉薯蕷 Dioscorea zingiberensis C.H.Wright根莖，清除雜質(zhì)，60℃烘干，粉碎過四號(hào)篩。

1.2 方 法

1.2.1 薯蕷皂苷含量測(cè)定 （1）對(duì)照品的制備。精密稱取薯蕷皂苷對(duì)照品8.00 mg，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，制成0.800 mg/ ml的薯蕷皂苷對(duì)照品溶液，經(jīng)0.22 μm的微孔濾膜濾過，即得。（2）供試品的制備。稱取盾葉薯蕷藥材粉末2g，置具塞錐形瓶中，加入80%乙醇溶液50ml，密塞，稱重，在40 kHz、700 W的條件下超聲40 min，冷卻，用80%乙醇溶液補(bǔ)足重量，搖勻?yàn)V過，精密量取續(xù)濾液25 ml，濃縮至干，殘?jiān)眉状既芙?，定容? ml量瓶中，用0.22 μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得［4］。（3）色譜條件。流動(dòng)相為乙腈∶水（45∶55），進(jìn)樣量20 μl，流速1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，柱溫30℃。此色譜條件下薯蕷皂苷與相鄰色譜峰的分離度良好，理論塔板數(shù)按薯蕷皂苷峰計(jì)算為4000以上。

1.2.2 偽原薯蕷皂苷含量測(cè)定 （1）對(duì)照品的制備。精密稱取偽原薯蕷皂苷對(duì)照品11.25 mg，置于5 ml容量瓶中，加75%乙醇溶液至刻度，搖勻，制成濃度為2.25 mg/ml的溶液，即得。（2）供試品的制備。精密稱定盾葉薯蕷粉末2 g，置具塞錐形瓶中，加入75%乙醇50 ml，稱定重量，密塞，放置過夜，超聲處理（頻率40 kHz，功率700 W）30 min，放冷，再稱定重量，用75%乙醇補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，量取續(xù)濾液25 ml，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量，超聲處理使溶解，轉(zhuǎn)移至5 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得［5］。（3）色譜條件。色譜柱為DIKMA C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相乙腈-水（30∶70）；流速1.0 ml/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量20 μl。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器參數(shù)：漂移管溫度105℃，載氣流速3.0 L/min，氣壓4.5 kPa。在此色譜條件下，偽原薯蕷皂苷與樣品中相鄰色譜峰可得到良好地分離，理論塔板數(shù)按偽原薯蕷皂苷峰計(jì)算為8000以上。

1.2.3 薯蕷皂苷元含量測(cè)定方法 （1）對(duì)照品的制備。精密稱取薯蕷皂苷元對(duì)照品6.52 mg，置5 ml容量瓶中，加乙醇使溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得1.30 mg/ml薯蕷皂苷元的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。用0.22 μm的微孔濾膜過濾至進(jìn)樣瓶中，即得。（2）供試品的制備。精密稱取盾葉薯蕷粉末0.5 g，置具塞錐形瓶中，加2.0 mol/L的硫酸50 ml，超聲20 min后在100℃水浴鍋中水解4 h，放冷過濾，藥渣用蒸餾水洗至中性，60℃干燥后，用石油醚（60～90℃）50 ml在90℃水浴中索氏提取5 h，提取液回收至干后用無水乙醇溶解，過濾至10 ml容量瓶中，用無水乙醇定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得［6］。（3）色譜條件。色譜柱為DIKMA C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-水（90∶10），流速：1 ml/min，柱溫：30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm，進(jìn)樣量10 μl。理論塔板數(shù)按薯蕷皂苷元峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

1.2.4 高效液相色譜圖 薯蕷皂苷、偽原薯蕷皂苷、薯蕷皂苷元對(duì)照品及供試品色譜圖見圖1～3。

圖1 薯蕷皂苷對(duì)照品與供試品HPLC色譜圖

2 結(jié)果

通過上述實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)采集的3個(gè)不同產(chǎn)地的盾葉薯蕷中各指標(biāo)性成分進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果數(shù)據(jù)見表1、概況趨勢(shì)見圖4。

3 討論

運(yùn)用SPSS Statistics17.0分析軟件對(duì)上述結(jié)果進(jìn)行配對(duì)樣本t檢驗(yàn)。結(jié)果表明，對(duì)于湖北鄖西和陜西安康、湖南安化和陜西安康的盾葉薯蕷中薯蕷皂苷含量，其雙側(cè)P值分別為P1=0.000、P2=0.006、P3= 0.602，其中P1、P2＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，認(rèn)為湖北鄖西和陜西安康的盾葉薯蕷中薯蕷皂苷含量有差別，而P3＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，則認(rèn)為湖北鄖西和湖南安化的盾葉薯蕷中薯蕷皂苷含量沒有差別，由圖4可以直觀地看出陜西安康的盾葉薯蕷中薯蕷皂苷的含量略高于湖北鄖西和湖南安化。

圖2 偽原薯蕷皂苷對(duì)照品與供試品HPLC色譜圖

圖3 薯蕷皂苷元對(duì)照品與供試品HPLC色譜圖

表1 不同產(chǎn)地的盾葉薯蕷中各指標(biāo)性成分含量測(cè)定結(jié)果（n=12）

圖4 不同產(chǎn)地盾葉薯蕷中指標(biāo)性成分折線圖

對(duì)于湖北鄖西和陜西安康、湖南安化的盾葉薯蕷中偽原薯蕷皂苷含量，其雙側(cè)P值分別為P1= 0.005、P2=0.001、P3=0.023，則P1、P2、P3＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，認(rèn)為湖北鄖西、陜西安康和湖南安化盾葉薯蕷中偽原薯蕷皂苷含量有差別由圖4可以直觀地看出陜西安康的盾葉薯蕷中偽原薯蕷皂苷的含量最高，湖北鄖西次之，湖南安化最低。

對(duì)于湖北鄖西和陜西安康、湖南安化的盾葉薯蕷中薯蕷皂苷元含量，其雙側(cè)P值分別為P1= 0.000、P2=0.000、P3=0.187，其中P1、P2＜0.05，按α= 0.05水準(zhǔn)拒絕H0，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，認(rèn)為湖北鄖西和陜西安康的盾葉薯蕷中薯蕷皂苷元含量有差別，而P3＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，則認(rèn)為湖北鄖西和湖南安化的盾葉薯蕷中薯蕷皂苷元含量沒有差別，由圖4可以直觀的看出陜西安康的盾葉薯蕷中薯蕷皂苷的含量明顯高于湖北鄖西和湖南安化。

藥用植物有效成分含量的高低從某種意義上來說是種質(zhì)與生態(tài)環(huán)境雙重作用的結(jié)果，種質(zhì)是內(nèi)在因素，而生態(tài)條件則是種質(zhì)好壞得以體現(xiàn)的外在條件［7］。因此在盾葉薯蕷GAP基地的建設(shè)中，應(yīng)首選遺傳性狀好的種質(zhì)和適應(yīng)的生態(tài)條件，才能保證GAP的順利實(shí)施。由于各地所處的生態(tài)和地理環(huán)境不同，藥物本身的治療作用也有著顯著的差異［8］。盾葉薯蕷作為一種重要的提取原料，要保證薯蕷皂苷、偽原薯蕷皂苷、薯蕷皂苷元含量在有效地治療范圍內(nèi)，不僅要求有優(yōu)良的種質(zhì)作為前提，還與一系列的栽培環(huán)境有關(guān)。為此，本論文對(duì)不同產(chǎn)地的盾葉薯蕷中有效成分進(jìn)行分析比較，得出陜西安康的地理?xiàng)l件較適宜盾葉薯蕷的生長(zhǎng)，為盾葉薯蕷GAP的制定提供依據(jù)。

［1］黃亞輝，盛效邦.盾葉薯蕷植物學(xué)研究進(jìn)展與展望［J］.中國(guó)中藥雜志，2005，30（23）：1806-1808.

［2］王 輝，胡長(zhǎng)鷹，龐自潔，等.盾葉薯蕷中甾體皂苷的研究［J］.中草藥，2009，40（1）：36-39.

［3］秦松云，丁季春，舒 抒，等.中國(guó)盾葉薯蕷資源現(xiàn)狀及保護(hù)對(duì)策［J］.資源開發(fā)與市場(chǎng)，2004，20（4）：263-265.

［4］劉中博，王鐵杰，盧忠強(qiáng)，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定穿龍薯蕷中薯蕷皂苷和原薯蕷皂苷［J］.中草藥，2008，39（5）：774-776.

［5］荊文光，張啟偉，劉 安.HPLC測(cè)定黃山藥中偽原薯蕷皂苷的含量［J］.中國(guó)中藥雜志，2009，34（20）：2616-2618.

［6］劉 詠，任鳳蓮，禹文峰.黃姜中薯蕷皂苷元的提取、純化及其鑒定［J］.廣州化學(xué)，2006，31（3）：24-27.

［7］荊文光.黃山藥化學(xué)成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［D］.北京：中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，2007.

［8］謝彩俠，高山林，秦惠貞.不同產(chǎn)地來源的盾葉薯蕷中薯蕷皂苷元含量分析［J］.河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，24（1）：58-60.

［2016－06－16收稿，2016－07－13修回］ ［本文編輯：劉一洋］

Comprehensive evaluation and comparison on the quality of Dioscorea Zingiberensis C.H.Wright from different growing areas

ZUO Chun－fang①，LV Ya－xin，ZHANG Xian－liang.①The 150th Central Hospital of PLA，Luoyang，Henan 471031，China

Objective To draw comprehensive evaluation and comparison on the quality of Dioscorea zingiberensis C.H.Wright from three growing areas.MethodsHPLC method was used to detect 12 batches of shield in dioscin，Pseudoprodioscin，Diosgenin content，then the obtained results were compared.ResultsThe samples from were respectively as：Hubei YunXi，Shaanxi ankang，Huna anhua，dioscin content range of 0.4752%－0.8931%，Pseudoprodioscin content 0.7348%－1.0023% and diosgenin content range of 2.3384%－5.6641%.In effective components from the origins of the Dioscorea zingiberensis C.H.Wright there was relatively significant difference（P＜0.05）.ConclusionGeographical conditions on the content of active ingredients of the medicinal materials have a significant impact.From Shaanxi ankang region the effective component contents were all higher in the Dioscorea zingiberensis C.H.Wright，and the quality is good，so do provide basis for the establishment of GAP of Dioscorea zingiberensis C.H.Wright.

Dioscorea zingiberensis C.H.Wright；Growing area；HPLC；Quality evaluation

10.14172/j.issn1671－4008.2016.12.022

R282.5

A

河南省高等學(xué)校青年骨干教師資助計(jì)劃 （2010GGJS－134），河南省教育廳自然科學(xué)研究項(xiàng)目資助（2011A360021）

471031河南洛陽(yáng)，解放軍150醫(yī)院（左春芳，呂亞新）；472400河南三門峽，解放軍72660部隊(duì)（張賢良）

地理?xiàng)l件對(duì)藥材的有效成分的含量有顯著的影響，由該實(shí)驗(yàn)得出陜西安康地區(qū)的盾葉薯蕷中3種有效成分含量均較高，質(zhì)量較好，為盾葉薯蕷GAP的制定提供依據(jù)。