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    運(yùn)脾止瀉湯對脾虛型遷延性腹瀉患兒腸道菌群調(diào)整作用的臨床研究※

    2017-01-06 02:27:34梁山玉
    河北中醫(yī) 2016年10期
    關(guān)鍵詞:球桿涂片脾虛

    王 靜 梁山玉 楊 燕

    (廣東省深圳市兒童醫(yī)院中醫(yī)科,廣東 深圳 518038)

    運(yùn)脾止瀉湯對脾虛型遷延性腹瀉患兒腸道菌群調(diào)整作用的臨床研究※

    王 靜 梁山玉 楊 燕1

    (廣東省深圳市兒童醫(yī)院中醫(yī)科,廣東 深圳 518038)

    目的 觀察運(yùn)脾止瀉湯對脾虛型遷延性腹瀉患兒腸道菌群的調(diào)整治療作用。方法 將60例脾虛型遷延性腹瀉患兒隨機(jī)分為2組,治療組30例予運(yùn)脾止瀉湯治療,對照組30例予蒙脫石散治療,2組療程均為7 d。觀察2組治療前后糞便pH值、糞便涂片球桿比及腸道菌群數(shù)量變化。另選同期健康體檢小兒30例作為正常組。結(jié)果 治療前治療組和對照組患兒糞便pH值分布在6~8,治療組pH值≥7者占77%,對照組pH值≥7者占70%;正常組小兒糞便pH值分布在5~6.5,pH值≤5.5者占84%。治療前治療組和對照組患兒糞便pH值與正常組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療后治療組與對照組患兒糞便pH值比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療組治療后糞便pH值與正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療前治療組和對照組患兒糞便涂片球桿比分布在2/8~8/2 ,治療組球菌≥40%者占90.0%,對照組球菌≥40%者占96.5%;正常組小兒糞便涂片球桿比分布在1/9~3/7。治療前治療組與對照組患兒糞便涂片球桿比與正常組小兒比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療后治療組和對照組患兒糞便涂片球桿比比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療組治療后糞便涂片球桿比與正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療組治療前除腸球菌,其余腸道菌群數(shù)量與正常組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),對照組治療前腸道菌群數(shù)量與正常組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);治療后治療組和對照組腸道菌群數(shù)量比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療組治療后腸道菌群數(shù)量與正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 運(yùn)脾止瀉湯對脾虛型遷延性腹瀉患兒的腸道菌群失調(diào)具有調(diào)整治療作用。

    辨證分型;腹瀉;中藥療法;慢性病

    小兒腹瀉是多發(fā)生于2歲以下小兒的常見病,其中又以脾虛型遷延性腹瀉最為常見,是影響小兒生長發(fā)育的重要因素之一,也是臨床治療的難題。中醫(yī)藥治療脾虛型遷延性腹瀉歷史悠久,療效可靠。目前,兒科領(lǐng)域尚缺乏中藥對于脾虛型遷延性腹瀉在腸道微生態(tài)系統(tǒng)調(diào)整方面的研究[1-2]。2011-09—2012-08,我們應(yīng)用運(yùn)脾止瀉湯治療小兒脾虛型遷延性腹瀉30例,并與蒙脫石散治療30例對照,觀察對患兒腸道菌群的影響,結(jié)果如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 全部60例均為廣東省深圳市兒童醫(yī)院中醫(yī)科門診患兒,隨機(jī)分為2組。治療組30例,男 16 例,女 14 例;其中3個月~1歲7例,1~2歲 12 例,2~3歲 11 例;平均身高(83.75±10.60) cm;平均體質(zhì)量(11.24±2.14) kg;平均病程(14.1±3.2) d。對照組30例,男 17 例,女 13 例;3個月~1歲8例,1~2歲10例,2~3歲12例;平均身高(83.15±11.12) cm,平均體質(zhì)量(11.3±2.31) kg;平均病程(15.0±2.9) d。同時選取廣東省深圳市兒童醫(yī)院保健科健康體檢小兒30例為正常組,男15例,女15例;其中3個月~1歲6例,1~2歲13例,2~3歲11例;平均身高(84.20±10.16) cm,平均體質(zhì)量(11.54±2.23) kg。3組性別、年齡、身高、體質(zhì)量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

    1.2 病例選擇

    1.2.1 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照《諸福棠實用兒科學(xué)》[3]中遷延性腹瀉的診斷標(biāo)準(zhǔn)。①臨床表現(xiàn):大便性狀有改變,呈稀便、水樣便、黏液便或膿血便;大便次數(shù)比平時增多。②病程:2周~2個月。③實驗室檢查:食物不耐受實驗為陽性。

    1.2.2 中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則(試行)》[4]辨證為脾虛型,表現(xiàn)為①主證:久泄不止,或反復(fù)發(fā)作,大便稀薄,或水樣,含奶瓣或不消化食物殘渣。②次證:神疲納呆,面色少華,舌質(zhì)偏淡,苔薄膩,脈弱無力。

    1.2.3 納入標(biāo)準(zhǔn) ①符合上述中、西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)及脾虛型中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)。②年齡3個月~3歲,性別不限。③食物不耐受實驗為陽性。

    1.2.4 排除標(biāo)準(zhǔn) ①細(xì)菌性痢疾、輪狀病毒腸炎、霍亂、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、食餌性腹瀉。②合并有嚴(yán)重的肝、腎、心血管和血液系統(tǒng)等原發(fā)性疾病。

    1.3 治療方法

    1.3.1 治療組 予運(yùn)脾止瀉湯。藥物組成:肉豆蔻9 g,丁香1 g,赤石脂9 g,茯苓9 g,黃連3 g,寒水石9 g,蓮子6 g。每日1劑,水煎2次, <1歲20 mL,1~3歲30 mL,早、中、晚3次口服。

    1.3.2 對照組 予蒙脫石散[博福-益普生(天津)制藥有限公司,國藥準(zhǔn)字H20000690],<1歲3 g/d,1~2歲3~6 g/d,>2歲6~9 g/d,均分早、中、晚3次口服。

    1.3.3 療程及其他 2組療程均為7 d,根據(jù)患兒病情可給予口服補(bǔ)液鹽或靜脈補(bǔ)液糾正脫水及退熱等對癥處理。

    1.4 觀察指標(biāo)及方法 采集2組患兒及正常組小兒新鮮的自然排出的大便1 g置于密閉的無菌便盒中,常溫下快速(最好10 min內(nèi))送檢。觀察其性狀、顏色,測pH值,涂片革蘭染色檢查球菌與桿菌所占比例,同時做細(xì)菌培養(yǎng)。

    1.4.1 糞便pH值測定 pH試紙(上海化學(xué)試劑總廠試劑三廠)的測試范圍為5.5~9.0,取試紙1條浸入糞便中,30 s后取出與標(biāo)準(zhǔn)比色卡比較得出pH值。

    1.4.2 糞便涂片 用無菌棉簽挑取新鮮糞便直接涂抹在潔凈的載玻片上,以30 °~40 °角勻速推片,面積約( 1~1.5) cm×2 cm,自然干燥后在酒精燈火焰上通過3次固定,革蘭染色,油鏡下計數(shù)1 000個細(xì)菌,計算球菌與桿菌的比例(簡稱球桿比)。

    1.4.3 腸道菌群檢測 ①標(biāo)本的稱量和稀釋:在稱取標(biāo)本前,分別在9個滅菌離心管內(nèi)加入0.9%氯化鈉注射液0.9 mL待用。用天平稱0.1 g糞便于離心管中,加入0.9%氯化鈉注射液0.9 mL,在振蕩器上混合均勻,將標(biāo)本稀釋呈系列10-1、10-2、10-3……10-9,連同原液共10個稀釋度;②接種:取上述標(biāo)本系列稀釋液0.01 mL分別接種于用于培養(yǎng)雙歧桿菌、乳酸桿菌、類桿菌、大腸桿菌和腸球菌的TPY、MRSA、KV、EMB、PZ選擇性培養(yǎng)基上,每種稀釋度接種3滴,計數(shù)時取其菌落的平均數(shù);③培養(yǎng):將TPY、MRSA、KV培養(yǎng)基放在厭氧罐中,放入?yún)捬醍a(chǎn)氣袋封閉,再置于37 ℃的孵育箱中培養(yǎng)48 h,將EMB、PZ培養(yǎng)基直接置于37 ℃的孵育箱中培養(yǎng)24 h;④菌落計數(shù)方法:確定目的菌后,采用平板活菌計數(shù)法[5],按活菌計數(shù)公式計數(shù),結(jié)果以每g糞便濕質(zhì)量中菌落形成單位的對數(shù)值表示(1gCFU/g)。

    2 結(jié) 果

    2.1 治療組、對照組治療前后糞便pH值比較 見表1。

    表1 治療組、對照組治療前后糞便pH值比較 例(%)

    與正常組比較,*P<0.05;與對照組治療后比較,△P<0.05

    由表1 可見,治療前治療組和對照組患兒糞便pH值分布在6~8,治療組pH值≥7者占77%,對照組pH值≥7者占70%;正常組小兒糞便pH值分布在5~6.5,pH值≤5.5者占84%。治療前治療組和對照組患兒糞便pH值與正常組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療后治療組與對照組患兒糞便pH值比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療組治療后糞便pH值與正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

    2.2 治療組、對照組治療前后糞便涂片球桿比比較 見表2。

    表2 治療組、對照組治療前后糞便涂片球桿比比較 例(%)

    與正常組比較,*P<0.05;與對照組治療后比較,△P<0.05

    由表2可見,治療前治療組和對照組糞便涂片球桿比分布在2/8~8/2 ,治療組球菌≥40%者占90.0%,對照組球菌≥40%者占96.5%;正常組小兒糞便涂片球桿比分布在1/9~3/7。治療前治療組和對照組糞便涂片球桿比與正常組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療后治療組和對照組糞便涂片球桿比比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療組治療后糞便涂片球桿比與正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

    2.3 治療組、對照組治療前后腸道菌群數(shù)量比較 見表3。

    表3 治療組、對照組治療前后腸道菌群數(shù)量比較

    腸道菌群治療組(n=30)治療前治療后對照組(n=30)治療前治療后正常組(n=30)腸球菌7.063±1.3585.721±0.778△6.153±0.958*6.136±0.8657.301±1.078乳酸桿菌7.588±1.319*10.080±1.270△7.316±1.145*8.295±1.14810.110±0.980雙歧桿菌7.444±1.377*9.732±1.704△7.054±1.275*7.908±1.37910.121±1.158類桿菌7.729±0.595*8.363±0.239△7.333±0.349*7.911±0.35610.948±1.258腸桿菌8.656±1.229*6.903±1.215△8.096±0.624*8.024±0.6295.928±0.858

    與正常組比較,*P<0.05;與對照組治療后比較,△P<0.05

    由表3可見,治療組治療前除腸球菌,其余腸道菌群數(shù)量與正常組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),對照組治療前腸道菌群數(shù)量與正常組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);治療后治療組和對照組腸道菌群數(shù)量比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療組治療后腸道菌群數(shù)量與正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

    3 討 論

    遷延性腹瀉病因較復(fù)雜,與感染、食物過敏、乳糖不耐受、免疫功能低下及營養(yǎng)不良等相關(guān)。正常人體腸道內(nèi)pH值多為5~6.5,腸道球桿比1/9~3/7,桿菌占明顯優(yōu)勢。腹瀉遷延不愈,腸道內(nèi)雙歧桿菌等有益的優(yōu)勢菌減少,對乳糖的分解減弱,酸性產(chǎn)物減少,腸道內(nèi)pH值上升,對有害菌的抑制作用下降,過路菌或條件致病菌如腸球菌、腸桿菌等異常繁殖,球桿比升高,導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)[6]。蒙脫石散臨床適用于成人及兒童急、慢性腹瀉,對消化道黏膜具有很強(qiáng)的覆蓋保護(hù)能力,修復(fù)、提高黏膜屏障對攻擊因子的防御功能,具有平衡正常菌群和局部止痛作用。主要藥理為: ①覆蓋消化道黏膜,與黏液蛋白結(jié)合,增強(qiáng)黏液屏障,起到防止胃蛋白酶、膽鹽、溶血卵磷酯、非類固醇類抗炎藥、酒精及各種病毒、細(xì)菌及其毒素對消化道黏膜的侵害作用,可維護(hù)消化道的正常生理功能,同時還具有降低結(jié)腸過分敏感性的作用。②促進(jìn)損傷的消化道黏膜上皮再生,修復(fù)損傷的細(xì)胞間橋,促使細(xì)胞緊密連接。③吸附消化道內(nèi)氣體和各種攻擊因子,并使之失去致病作用,如輪狀病毒和致病性大腸桿菌、霍亂弧菌、金黃色葡萄球菌、幽門螺桿菌、空腸彎曲菌及其所產(chǎn)生的毒素。④平衡正常菌群,提高消化道免疫功能。⑤對消化道局部有止血作用(通過激活凝血因子Ⅶ和Ⅷ)。

    小兒腹瀉屬中醫(yī)學(xué)泄瀉范疇,病位在脾胃,日久不愈者多有脾胃虛弱,不能腐熟水谷,水谷精微與糞便合污而下,表現(xiàn)為大便稀溏、次數(shù)增加、食欲不振、形體消瘦等一系列臨床表現(xiàn)。脾氣虛可導(dǎo)致或加重腸道菌群失衡[7-8],故健運(yùn)脾氣止瀉為治療小兒脾虛型遷延性腹瀉的關(guān)鍵治則。

    運(yùn)脾止瀉湯由已故全國著名中醫(yī)兒科專家王鵬飛教授針對脾虛瀉這一證型創(chuàng)立[9-10]。方中肉豆蔻溫中止瀉,赤石脂主澀,丁香降逆行氣,茯苓益氣健脾,黃連清熱燥濕,寒水石利水止渴,蓮子補(bǔ)脾止瀉。諸藥共用,標(biāo)本兼治,共奏運(yùn)脾止瀉之功。通過大鼠實驗觀察,運(yùn)脾止瀉湯可以通過促進(jìn)胃內(nèi)蛋白質(zhì)消化功能,促進(jìn)小腸吸收功能,抑制胃腸運(yùn)動,抑制腸黏膜分泌,修復(fù)小腸微絨毛等環(huán)節(jié)達(dá)到止瀉作用[11]。近年來有關(guān)中藥對腸道菌群作用的研究發(fā)現(xiàn),健脾中藥對脾虛小鼠腸道菌群的失調(diào)具有一定的調(diào)節(jié)功能,對不同原因引起的動物胃腸道菌群失調(diào)具有調(diào)節(jié)和改善功能[12]。健脾益氣類中藥經(jīng)現(xiàn)代藥理研究認(rèn)為其中含有大量苷類和糖類物質(zhì)及多種微量元素,這些苷類和糖類物質(zhì)直接促進(jìn)益生菌生長,恢復(fù)腸道正常菌群[13-14]。

    本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),治療前治療組、對照組的糞便常規(guī)檢查中,pH值全部≥6,腸道環(huán)境偏堿,球桿比則分布在3/7~8/2,有明顯球桿比倒置現(xiàn)象;同時進(jìn)行的腸道菌群檢測中,腸桿菌、腸球菌等有害菌數(shù)量顯著增多,雙歧桿菌、乳酸桿菌、類桿菌等有益的優(yōu)勢菌數(shù)量顯著減少;以上均與正常組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。這說明患有脾虛型遷延性腹瀉的患兒同時存在腸道菌群紊亂現(xiàn)象,脾虛證與腸道菌群紊亂密切相關(guān)。而治療后治療組患兒pH值、球桿比、腸道主要菌群種類及數(shù)量明顯改善,與正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),說明經(jīng)中藥治療后患兒糞便pH值趨于正常,腸球菌、腸桿菌數(shù)量明顯減少,雙歧桿菌、類桿菌及乳酸桿菌明顯增多,接近同齡正常兒童的腸道內(nèi)環(huán)境,球桿比基本恢復(fù)正常。對照組患兒治療前后腸道菌群數(shù)量無明顯改善,提示運(yùn)脾止瀉湯療效優(yōu)于西藥蒙脫石散。脾虛型遷延性腹瀉存在腸道菌群失衡,運(yùn)脾止瀉湯對于改善患兒大便次數(shù)、性狀,改善和調(diào)節(jié)患者腸道菌群具有一定療效,但具體發(fā)生作用的藥物有效成分還有待深入研究。

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    (本文編輯:習(xí) 沙)

    Adjustment effects of decoction for activating spleen and anti-diarrhea on intestinal flora in children with spleen-deficiency type protracted diarrhea

    WANGJing*,LIANGShanyu,YANGYan.

    *DepartmentofTraditionalChineseMedicine,ShenzhenChildren'sHospitalinGuangdongProvince,Guangdong,Shenzhen518038

    Objective To observe the adjustment and therapeutic effects of decoction for activating spleen and anti-diarrhea on intestinal flora in children with spleen-deficiency type protracted diarrhea. Methods 60 children with spleen-deficiency type protracted diarrhea were randomly divided into two groups. 30 cases in treatment were treated by decoction for activating spleen and anti-diarrhea, and 30 cases in control group were treated by montmorillonite powder, continuously treatment for 7 d. The feces pH, the proportion of cocci and bacilli of feces smear, and the intestinal microflora before and after treatment were observed in two groups. Another 30 healthy children were conducted as the normal group. Results The feces pH before treatment was distributed on 6 to 8 in two groups. The pH greater than or equal to 7 account for 77% and 70% of the treatment group and control group, respectively. The feces pH in normal group was distributed on 5 to 6.5, and the pH over than or equal to 5.5 account for 84%. The feces pH before treatment in treatment and control group had significant difference with that in normal group (P<0.05). There were statistical differences on the feces pH after treatment between treatment and control group (P<0.05). There were no statistical differences on the feces pH after treatment between treatment and normal group (P>0.05). The proportion of cocci and bacilli of feces smear was distributed on 2/8 to 8/2 before treatment in treatment group and control group, and the coccus greater than or equal to 40% account for 90% and 96.5% in treatment and control group, respectively. The proportion of cocci and bacilli in normal group was distributed on 1/9 to 3/7. The proportion of cocci and bacilli before treatment in treatment and control group had significant difference with that in normal group (P<0.05). There were statistical differences on the proportion of cocci and bacilli after treatment between treatment and control group (P<0.05). There were no statistical differences on the proportion of cocci and bacilli after treatment between treatment and normal group (P>0.05). There were statistical differences on the number of intestinal flora before treatment between treatment and normal group (P<0.05), except the enterococcus. There were statistical differences on the number of intestinal flora before treatment between control and normal group (P<0.05). There were statistical differences on the number of intestinal flora after treatment between treatment and control group (P<0.05), and there were no statistical differences between treatment and normal group (P>0.05). Conclusion Decoction for activating spleen and anti-diarrhea has adjustment effects on intestinal flora in children with spleen-deficiency type protracted diarrhea.

    Syndrome differentiation; Diarrhea; Traditional Chinese herbs therapy; Chronic disease

    10.3969/j.issn.1002-2619.2016.10.007

    ※ 項目來源:2011年深圳市科技計劃項目(醫(yī)療衛(wèi)生類)(編號:201103145)

    王靜(1976—),女,副主任醫(yī)師,學(xué)士。從事中醫(yī)兒科臨床工作。

    R442.2;R725.746.205;R289.6

    A

    1002-2619(2016)10-1474-05

    2014-06-27)

    1 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京兒童醫(yī)院中醫(yī)科,北京 100045

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