中藥艾葉組合物對雛雞免疫功能的影響

高俊波 ， 張華琦 ， 陳 敏 ， 郁建生

(1.銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院 ， 貴州銅仁554300 ； 2.貴州省中獸藥工程研究中心 ， 貴州銅仁554300)

中藥艾葉組合物對雛雞免疫功能的影響

高俊波1,2， 張華琦1， 陳 敏1， 郁建生1,2

(1.銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院 ， 貴州銅仁554300 ； 2.貴州省中獸藥工程研究中心 ， 貴州銅仁554300)

為了探討中藥艾葉組合物對雛雞免疫功能的影響。將艾葉、陳皮、魚腥草、益母草、穿心蓮5味中藥按一定比例制成復(fù)方散劑，選取1日齡本地土雞200只，隨機(jī)分為試驗(yàn)低、中、高劑量組及對照組，低、中、高劑量組的日糧中分別添加0.3%、0.6%、1%中藥艾葉組合物，對照組只飼喂基礎(chǔ)日糧。分別于14、28、42日齡測定雛雞的新城疫抗體效價(jià)、免疫器官指數(shù)、T淋巴細(xì)胞百分率、血清免疫球蛋白含量。結(jié)果試驗(yàn)高劑量組的新城疫抗體效價(jià)、免疫器官指數(shù)、T淋巴細(xì)胞百分率、免疫球蛋白含量與對照組相比差異顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)，中劑量組對上述指標(biāo)均有不同程度的增強(qiáng)作用，低劑量組的作用效果較差。表明本試驗(yàn)中藥艾葉組合物能夠通過不同途徑有效增強(qiáng)雛雞的免疫功能。

中藥 ； 艾葉 ； 組合物 ； 雛雞 ； 免疫功能

隨著人民生活水平的不斷提高，綠色、安全、健康的飲食理念深入人心，土雞以其豐富的營養(yǎng)價(jià)值深受消費(fèi)者青睞。但由于雛雞病死率較高，在一定程度上制約了土雞養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。大量研究表明，化學(xué)類抗生素可以增強(qiáng)雛雞的免疫功能，有效的降低其發(fā)病率，但長期使用化學(xué)類抗生素作為飼料添加劑，可造成藥物殘留和耐藥性的產(chǎn)生，嚴(yán)重危害了人類的健康和土雞養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。

中藥含有多種天然化學(xué)成分,且無毒副作用，可通過綜合調(diào)節(jié)作用來增強(qiáng)動物的免疫機(jī)能。本試驗(yàn)選用艾葉、陳皮、魚腥草、益母草、穿心蓮5味中藥作為研究對象,將其制作成復(fù)方散劑，采用新城疫疫苗對雛雞進(jìn)行免疫，通過分析抗體效價(jià)、免疫器官指數(shù)、T淋巴細(xì)胞百分率及血清免疫球蛋白等指標(biāo)的變化，探討該中藥艾葉組合物對雛雞免疫功能的影響, 旨在為生產(chǎn)上開發(fā)優(yōu)質(zhì)高效的中藥飼料添加劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 中藥艾葉組合物的組方及加工 選取艾葉、陳皮、魚腥草、益母草、穿心蓮5味中草藥作為原料，購自貴州省銅仁市民生大藥房。將上述原料在熱風(fēng)循環(huán)干燥箱50 ℃烘干2 h，超微粉碎，80目過篩，按30%、15%、20%、15%、20%的比例混合，攪拌均勻，裝袋備用，密封保存，防止藥材質(zhì)量發(fā)生變化。

1.2 基礎(chǔ)日糧配方 基礎(chǔ)日糧自配，配方參照土雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)[1]。日糧配方及營養(yǎng)成分為：玉米61.17%、豆粕30.05%、魚粉6%、蛋氨酸0.19%、食鹽0.37%、石粉1.22%、多維預(yù)混料1%。

1.3 試驗(yàn)動物分組及處理 200只1日齡的本地雛雞，由銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院生態(tài)養(yǎng)殖園提供。采取隨機(jī)分組的方式，將200只雛雞分為4組，分別為對照組和試驗(yàn)低、中、高劑量組，每組50只。7日前統(tǒng)一飼喂基礎(chǔ)日糧，7日齡以滴鼻點(diǎn)眼的方式接種新城疫 LaSota 株活疫苗。7日后分別在試驗(yàn)低、中、高劑量組的基礎(chǔ)日糧中添加0.3%、0.6%、1%中藥艾葉組合物，對照組只飼喂相同質(zhì)量的基礎(chǔ)日糧。每組均采取自由飲水，24 h光照，試驗(yàn)用具嚴(yán)格清洗消毒。

1.4 血樣和臟器采集 分別于14、28、42日齡時(shí)，從各組雛雞中隨機(jī)抽取10只精確稱量體重，翅下靜脈采血并制作血涂片，心臟采血2 mL，離心分離血清，-20 ℃保存?zhèn)溆?。采血后將雛雞頸靜脈放血致死，摘取胸腺、脾臟、腔上囊等器官，分離脂肪組織，濾紙吸去表面水分，精確稱重。

(1)新城疫抗體水平的測定：采用紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)檢測雛雞新城疫抗體效價(jià)，結(jié)果以log2表示。

(2)免疫器官指數(shù)的測定：免疫器官指數(shù)= 免疫器官重(mg)/體重(g)。

(3)T淋巴細(xì)胞百分率測定[2]：采用酸性 A -醋酸萘酯酶(ANAE) 染色法檢測血涂片中 T 淋巴細(xì)胞百分率。對已采集的血涂片鏡檢，凡胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小和數(shù)量不等的深紅色顆粒者為ANAE陽性細(xì)胞(T淋巴細(xì)胞)，無此顆粒為B淋巴細(xì)胞。計(jì)數(shù)100個(gè)淋巴細(xì)胞，計(jì)算ANAE 陽性細(xì)胞率。ANAE陽性率=100個(gè)淋巴細(xì)胞中ANAE 陽性細(xì)胞數(shù)/100×100%。

(4)血清免疫球蛋白的測定：采用間接酶聯(lián)免疫吸附分析法測定IgA、IgM和IG的含量。

1.5 數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用 SPSS19.0分析軟件進(jìn)行處理，LSD進(jìn)行多重比較，數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 中藥艾葉組合物對雛雞新城疫抗體效價(jià)的影響 見表1。

表1 中藥艾葉組合物對雛雞新城疫抗體效價(jià)的影響±s, n=10) log2x

注：同行數(shù)據(jù)右肩注大寫字母完全不同表示差異極顯著(P<0.01)； 小寫字母完全不同表示差異顯著(P<0.05)，含有相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，下表同

由表2可知，雛雞14、28、42日齡時(shí)，中藥艾葉組合物高、中、低劑量組的ND-HI抗體效價(jià)均高于對照組，高、中劑量組與對照組相比差異極顯著(P<0.01)，低劑量組與對照組相比差異不顯著(P>0.05)。

2.2 中藥艾葉組合物對雛雞免疫器官指數(shù)的影響 見表2。

由表2可知，雛雞14日齡時(shí)，各組間胸腺、脾臟指數(shù)差異不顯著(P>0.05)，高劑量組的腔上囊指數(shù)與對照組相比差異顯著(P<0.05)；雛雞28日齡時(shí)，各組間胸腺指數(shù)差異不顯著(P>0.05)，高劑量組的脾臟指數(shù)與對照組相比差異顯著(P<0.05)，高劑量組的腔上囊指數(shù)與對照組相比差異極顯著(P<0.01)，中、低劑量組的腔上囊指數(shù)與對照組相比差異顯著(P<0.05)；雛雞42日齡時(shí)，高劑量組的胸腺、脾臟、腔上囊指數(shù)與對照組相比差異極顯著(P<0.01)，中劑量組的胸腺、脾臟指數(shù)與對照組相比差異顯著(P<0.05)，中劑量組的腔上囊指數(shù)與對照組相比差異極顯著(P<0.01)，低劑量組的腔上囊指數(shù)與對照組相比差異顯著(P<0.05)。

表2 中藥艾葉組合物對雛雞免疫器官指數(shù)的影響±s, n=10) mg/g

2.3 中藥艾葉組合物對雛雞外周血液T淋巴細(xì)胞百分率的影響 見表3。

表3 中藥艾葉組合物對雛雞外周血液T淋巴細(xì)胞百分率的影響±s, n=5) %

表4 中藥艾葉組合物對雛雞血清免疫球蛋白含量的影響±s, n=5) g/L

由表4可知, 雛雞14日齡時(shí)，各組間IgA、IgG、IgM含量差異不顯著(P>0.05)；28日齡時(shí)，高劑量組的IgG含量與對照組相比差異顯著(P<0.05)；42日齡時(shí)，高劑量組的IgA、IgG、IgM含量與對照組相比差異顯著(P<0.05)，中劑量組IgG含量與對照組相比差異顯著(P<0.05)。

3 討論

3.1 中藥添艾葉組合物提高雛雞免疫功能的機(jī)理 大量研究表明，諸多中草藥均可不同程度地提高動物機(jī)體免疫力，其作用機(jī)理包括促進(jìn)免疫器官發(fā)育，增強(qiáng)和活化免疫細(xì)胞，促進(jìn)和調(diào)節(jié)補(bǔ)體、抗體和溶菌酶的產(chǎn)生。如黃芪、枸杞、香菇中的多糖成分可以增加免疫器官指數(shù)、激活補(bǔ)體、提高抗體水平來實(shí)現(xiàn)增強(qiáng)動物機(jī)體免疫功能；黨參、柴胡、淫羊藿中的皂苷成分對提高動物機(jī)體免疫力均有作用[3]。本文選用的艾葉、陳皮、魚腥草、益母草、穿心蓮等5味中藥，含有豐富的多糖、黃酮、生物堿等有機(jī)成分，通過測定新城疫抗體水平、免疫器官指數(shù)、T淋巴細(xì)胞變化、血清免疫球蛋白含量等指標(biāo)，研究該中藥組合物對雛雞特異性免疫和非特異性免疫的影響。

3.2 中藥艾葉組合物對雛雞新城疫抗體水平的影響 體液免疫是由B細(xì)胞介導(dǎo)的特異性免疫，抗體水平的高低是衡量體液免疫的重要標(biāo)志。研究表明，中藥能有效地改善和提高機(jī)體體液免疫功能,與抗原同時(shí)使用能促進(jìn)抗體的生成，延長免疫期[4]。本試驗(yàn)高、中劑量組的新城疫抗體水平與對照組相比差異極顯著(P<0.01)，且抗體高峰維持時(shí)間長，抗體下降慢。表明中藥艾葉組合物能顯著提高雛雞新城疫抗體效價(jià)，且存在量效關(guān)系，高劑量組效果明顯優(yōu)與低劑量組。3.3 中藥艾葉組合物對雛雞免疫器官指數(shù)的影響 胸腺、脾臟和腔上囊是禽類的主要免疫器官，三者參與機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫，其相對質(zhì)量的增加提示機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫機(jī)能增強(qiáng)[5]。試驗(yàn)高、中劑量組的腔上囊、胸腺、脾臟指數(shù)在不同時(shí)期與對照組相比差異顯著或極顯著。表明，不同劑量的中藥艾葉組合物能有效地提高雛雞的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、腔上囊指數(shù)，特別對與腔上囊指數(shù)的提高更為明顯，且各組間存在量效關(guān)系，高劑量組的效果明顯優(yōu)與中、低劑量組。

3.4 中藥艾葉組合物對雛雞外周血液T淋巴細(xì)胞百分率的影響 ANAE陽性率代表了機(jī)體的細(xì)胞免疫水平，ANAE陽性率提高表明活化的T細(xì)胞顯著增多，機(jī)體的細(xì)胞免疫水平提高。本試驗(yàn)組ANAE陽性率14日齡時(shí)與對照組相比變化不明顯，但在雛雞28、42日齡時(shí)顯著高于對照組。表明隨著日齡的不斷增加，中藥艾葉組合物能顯著提高雛雞的外周血液T淋巴細(xì)胞百分率。

3.5 中藥艾葉組合物對雛雞血清免疫球蛋白的影響 免疫球蛋白是介導(dǎo)體液免疫的主要杭體，是參與黏膜免疫反應(yīng)的主要活性物質(zhì)，血清抗體的高低在一定程度上反映機(jī)體對疾病的抵抗能力[6]。通常檢測IgG、IgM、IgA就可以代表血清免疫球蛋白的水平。本試驗(yàn)結(jié)果表明,不同劑量組的IgG、IgM、IgA含量在42日齡時(shí)明顯高于對照組，表明中藥艾葉組合物有利于增強(qiáng)雛雞免疫球蛋白水平。

綜上所述，艾葉、陳皮、魚腥草、益母草、穿心蓮5味中藥組合物能夠顯著提高雛雞的新城疫抗體水平、免疫器官指數(shù)、T細(xì)胞百分率及血清免疫球蛋白等指標(biāo)，增強(qiáng)雛雞的免疫功能。

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2016-02-26

貴州省銅仁市科技計(jì)劃項(xiàng)目(銅市科研(2013)10-3號)

高俊波(1982-)，男，副教授，碩士，研究方向?yàn)榛A(chǔ)獸醫(yī)學(xué).E-mail:751213716@qq.com

S831.5

B

0529-6005(2016)11-0073-03