福建省蛋鴨主要細(xì)菌感染檢測(cè)及其生物學(xué)特性測(cè)定與分析

傅秋玲 ， 程龍飛 ， 傅光華 ， 劉榮昌 ， 萬(wàn)春和 ， 施少華 ， 陳紅梅 ， 陳 珍 ， 陳翠騰 ， 黃 瑜

(福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所福建省畜禽疫病防治工程技術(shù)研究中心福建省禽病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 福建福州350013)

福建省蛋鴨主要細(xì)菌感染檢測(cè)及其生物學(xué)特性測(cè)定與分析

傅秋玲 ， 程龍飛 ， 傅光華 ， 劉榮昌 ， 萬(wàn)春和 ， 施少華 ， 陳紅梅 ， 陳 珍 ， 陳翠騰 ， 黃 瑜

(福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所福建省畜禽疫病防治工程技術(shù)研究中心福建省禽病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 福建福州350013)

為明確福建省蛋鴨(金定鴨、山麻鴨、連城白鴨)流行的主要細(xì)菌病及其生物學(xué)特性，采用PCR方法對(duì)2013年以來(lái)福建省及周邊省(區(qū))臨床調(diào)查采集和送檢的病死或表現(xiàn)產(chǎn)蛋下降的852份以上3種蛋鴨樣品進(jìn)行了禽多殺性巴氏桿菌、致病性鴨大腸桿菌、鴨疫里默菌和禽沙門(mén)菌感染的病原學(xué)檢測(cè)，并對(duì)陽(yáng)性樣品進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定及其生物學(xué)特性研究。結(jié)果表明,金定鴨、山麻鴨與連城白鴨樣品中以上4種細(xì)菌感染的陽(yáng)性率分別為8.6%、18.2%、5.3%、1.4%，10.4%、21.8%、4.2%、1.7%和8.8%、17.6%、3.8%、0%，其中鴨大腸桿菌病、禽霍亂是危害以上3種蛋鴨養(yǎng)殖的主要細(xì)菌病。經(jīng)血清型鑒定表明，以上4種致病菌的主要血清型(抗原群)分別為莢膜A型，O78、O2、O88為2型、11型和腸炎沙門(mén)菌與鼠傷寒沙門(mén)菌為主；經(jīng)長(zhǎng)期藥敏試驗(yàn)監(jiān)測(cè)表明，對(duì)4種致病菌的首選敏感藥物分別有5種、2種、7種和10種，可見(jiàn)對(duì)致病性大腸桿菌敏感的藥物少、其耐藥譜最廣。

蛋鴨 ； 主要細(xì)菌病 ； 血清型 ； 耐藥性

我國(guó)為世界水禽生產(chǎn)大國(guó)，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，2015年我國(guó)鴨飼養(yǎng)量達(dá)52億只，約占世界鴨總量的75%以上，對(duì)我國(guó)的禽肉生產(chǎn)、肉蛋結(jié)構(gòu)調(diào)整、農(nóng)村脫貧致富及改善人民生活等方面發(fā)揮了重要作用。而我國(guó)對(duì)鴨養(yǎng)殖、疫病防控等相關(guān)研究更多聚焦于肉鴨[1]。隨著人民生活水平的提高，大家對(duì)鴨蛋的需求量也日漸增多，對(duì)蛋品的要求也越來(lái)越高。然而，沙門(mén)菌和大腸桿菌而引發(fā)的鴨蛋食源性食品安全事件也不斷發(fā)生，再加上抗生素的殘留問(wèn)題，蛋品的衛(wèi)生安全日益引起大眾的密切關(guān)注[1-5]。

為此，只有提高蛋鴨的健康養(yǎng)殖水平，減少蛋中致病菌的感染與攜帶，才能從源頭提高蛋品質(zhì)量。而疫病防控又是蛋鴨健康養(yǎng)殖的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，因此,我們對(duì)2013年以來(lái)自福建省及周邊省(區(qū))臨床調(diào)查采集和送檢的病死或表現(xiàn)產(chǎn)蛋下降的金定鴨、山麻鴨、連城白鴨3種蛋鴨樣品進(jìn)行了禽霍亂、鴨大腸桿菌病、鴨傳染性漿膜炎和禽沙門(mén)菌感染的病原學(xué)檢測(cè)，并對(duì)陽(yáng)性樣品開(kāi)展細(xì)菌分離鑒定及其血清型鑒定和敏感藥物篩選，為福建省蛋鴨(金定鴨、山麻鴨、連城白鴨)細(xì)菌病的臨床防治提供科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支撐，也為生產(chǎn)健康無(wú)藥物殘留的綠色鴨蛋提高其食品安全發(fā)揮作用。

1 材料與方法

1.1 試劑與藥敏紙片 DNA抽提試劑盒、DNA瓊脂膠回收試劑盒，購(gòu)自QIAGEN科技有限公司；DNA聚合酶，購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司；藥敏紙片，購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.2 樣品的來(lái)源及處理 2013年以來(lái)，自福建、江西、廣東、廣西、江蘇、浙江6個(gè)不同省(區(qū))蛋鴨場(chǎng)采集或送檢的病死或表現(xiàn)產(chǎn)蛋下降的金定鴨、山麻鴨、連城白鴨肝臟樣品分別為209份、404份和239份，共852份。

1.3 樣品的PCR檢測(cè) 取1mL細(xì)菌培養(yǎng)液離心取沉淀以DNA提取試劑盒提取核酸，參照已報(bào)道的禽多殺性巴氏桿菌[6,10,12]、致病性大腸桿菌[12-13]、鴨疫里默菌[8,14]、禽沙門(mén)菌[15]等PCR方法檢測(cè)各肝臟樣品中4種細(xì)菌的感染情況。

1.4 細(xì)菌的分離及鑒定 對(duì)經(jīng)PCR檢測(cè)為陽(yáng)性的病死或表現(xiàn)產(chǎn)蛋下降鴨的樣品，參照已報(bào)道的禽多殺性巴氏桿菌[6]、致病性大腸桿菌[7]、鴨疫里默菌[8]、禽沙門(mén)菌[9]等培養(yǎng)方法分離培養(yǎng)細(xì)菌，挑取單個(gè)疑似陽(yáng)性菌落接種于細(xì)菌培養(yǎng)液中，取培養(yǎng)液進(jìn)行革蘭染色、鏡檢及其PCR鑒定。

1.5 藥敏試驗(yàn) 采用藥敏紙片檢測(cè)陽(yáng)性菌對(duì)常用抗生素的敏感性，按中國(guó)食品藥品檢定研究院制定的《抗菌藥物藥敏試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)》進(jìn)行判定，測(cè)定對(duì)阿莫西林、氨芐青霉素、青霉素、丁胺卡那霉素、多黏菌素B、氟苯尼考、氟哌酸、復(fù)方新諾明、紅霉素、卡那霉素、鏈霉素、強(qiáng)力霉素、磺胺甲基異惡唑、慶大霉素、頭孢氨芐、頭孢唑啉、頭孢拉定、壯觀霉素、大觀霉素、新霉素、泰樂(lè)菌素、四環(huán)素、林可霉素和克林霉素等抗生素的敏感程度。

1.6 血清型(抗原群)鑒定 參照已報(bào)道的禽多殺性巴氏桿菌[6]、致病性大腸桿菌[7]、鴨疫里默菌[8]、禽沙門(mén)菌[17]等血清型(抗原群)鑒定方法，對(duì)陽(yáng)性菌進(jìn)行血清型或抗原群鑒定。

2 結(jié)果

2.1 3種蛋鴨細(xì)菌感染的檢測(cè)結(jié)果 自2013年以來(lái)，以建立的PCR方法對(duì)從福建、江西、浙江、廣東、廣西和江蘇6個(gè)不同省(區(qū))蛋鴨場(chǎng)采集或送檢的金定鴨、山麻鴨、連城白鴨樣品共852份進(jìn)行對(duì)禽多殺性巴氏桿菌、致病性大腸桿菌、鴨疫里默菌和沙門(mén)菌感染的檢測(cè)，其中金定鴨樣品中4種細(xì)菌感染的陽(yáng)性率分別為8.6%(18/209)、18.2%(38/209)、5.3%(11/209)、1.4%(3/209)；山麻鴨樣品中其陽(yáng)性率分別為10.4%(42/404)、21.8%(88/404)、4.2%(17/404)、1.7%(7/404)；連城白鴨樣品中其陽(yáng)性率分別為8.8%(21/239)、17.6%(42/239)、3.8%(9/239)、0%(見(jiàn)圖1)?？梢?jiàn)，3個(gè)品種蛋鴨均以致病性大腸桿菌和禽多殺性巴氏桿菌感染的陽(yáng)性率更高。

圖1 蛋鴨主要細(xì)菌病感染檢測(cè)結(jié)果

2.2 不同年份蛋鴨細(xì)菌感染的檢測(cè)結(jié)果 自2013年以來(lái)，以上6個(gè)省(區(qū))不同年份3個(gè)品種蛋鴨感染細(xì)菌的陽(yáng)性率存在差異。以福建省為例，2013—2016年期間福建省3個(gè)品種蛋鴨樣品檢測(cè)以上4種細(xì)菌感染的陽(yáng)性率分別為36.3%、29.5%、33.6%和31.8%，因此，以2013年感染的陽(yáng)性率最高為36.3%，2014年感染的陽(yáng)性率最低為29.5%。

2.3 不同省(區(qū))蛋鴨細(xì)菌感染的檢測(cè)結(jié)果 對(duì)從福建、江西等6個(gè)省(區(qū))采集或送檢的引起產(chǎn)蛋下降或病死的3個(gè)品種蛋鴨樣品進(jìn)行禽多殺性巴氏桿菌、致病性大腸桿菌、鴨疫里默菌和沙門(mén)菌感染的檢測(cè)，除連城白鴨樣品沙門(mén)菌感染率為0%外，其余均檢出陽(yáng)性，只是陽(yáng)性感染率高低不同而己，其中以江西省的3種蛋鴨感染4種細(xì)菌的陽(yáng)性率最高達(dá)43.7%(詳見(jiàn)表1)。

表1 2013—2016年不同省(區(qū))蛋鴨樣品感染細(xì)菌的檢測(cè)

2.4 細(xì)菌分離 對(duì)經(jīng)PCR檢測(cè)為陽(yáng)性的病死或表現(xiàn)產(chǎn)蛋下降鴨的樣品進(jìn)行以上細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定，結(jié)果獲得禽多殺性巴氏桿菌、致病性大腸桿菌、鴨疫里默菌和沙門(mén)菌菌株數(shù)分別為54、119、24、6株，其分離率分別為66.7%、70.8%、64.9%和60%，其中以致病性大腸桿菌的分離率最高、沙門(mén)菌的分離率最低(見(jiàn)表2)。

表2 陽(yáng)性樣品的細(xì)菌分離

2.5 血清(抗原)型鑒定 對(duì)已分離鑒定的4種細(xì)菌分別進(jìn)行血清型測(cè)定，結(jié)果54株中禽多殺性巴氏桿菌的莢膜血清群均為A型；119株致病性大腸桿菌中，除3株自凝、5株未能定型，其余菌株分屬于9個(gè)血清型，其中O78血清型菌株53株，占44.54%，結(jié)果表明，致病性大腸桿菌主要血清型為O78、O2和O88；24株鴨疫里默菌血清型包括1、2、11、13、14和17等血清型，其中最多的是2型(11株，占45.8%)，其次為11型(4株，占16.7%)、1型(3株，占12.5%)和17型(2株，占8.3%)，這4種血清型合計(jì)占所有菌株的83.3%，其中又以2型和11型最為常見(jiàn)；6株沙門(mén)菌以腸炎沙門(mén)菌和鼠傷寒沙門(mén)菌為主。

2.6 藥敏試驗(yàn) 對(duì)已分離的4種細(xì)菌分別進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，80%以上菌株禽多殺性巴氏桿菌的敏感藥物為氨芐青霉素、復(fù)方新諾明、頭孢唑啉、多黏菌素B和強(qiáng)力霉素，共5種；119株致病性大腸桿菌中，全部菌株對(duì)多黏菌素B和紅霉素耐藥，80%以上的菌株對(duì)氟哌酸、復(fù)方新諾明、磺胺甲基異惡唑、慶大霉素、泰樂(lè)菌素耐藥，敏感藥物僅有頭孢唑啉和氟苯尼考2種；37株鴨疫里默菌中80%以上菌株對(duì)丁胺卡那霉素、氨芐青霉素、頭孢拉定、頭孢氨芐、頭孢唑啉、壯觀霉素和氟苯尼考等7種藥物敏感；6株沙門(mén)菌的敏感藥物較多，共有氨芐青霉素、丁胺卡那霉素、多黏菌素B、氟苯尼考、氟哌酸、復(fù)方新諾明、鏈霉素、強(qiáng)力霉素、頭孢唑啉和大觀霉素共10種。

3 討論與分析

3.1 自2013年以來(lái)，以建立的PCR方法對(duì)從福建、江西、廣東、廣西、江蘇、浙江6省(區(qū))蛋鴨場(chǎng)采集或送檢的金定鴨、山麻鴨、連城白鴨樣品共852份分別進(jìn)行禽多殺性巴氏桿菌、致病性大腸桿菌、鴨疫里默菌和沙門(mén)菌感染陽(yáng)性率表明，福建省的3個(gè)品種蛋鴨(金定鴨、山麻鴨和連城白鴨)存在較嚴(yán)重的細(xì)菌感染，主要為大腸桿菌病和禽霍亂，且以山麻鴨的陽(yáng)性感染率更高，揭示山麻鴨的養(yǎng)殖條件有待改善。

3.2 對(duì)6省(區(qū))引起產(chǎn)蛋下降或死亡的蛋鴨樣品進(jìn)行禽多殺性巴氏桿菌、致病性大腸桿菌、鴨疫里默菌和沙門(mén)菌感染檢測(cè)，均檢出陽(yáng)性，陽(yáng)性率為31.4%-43.7%，其中以江西省的蛋鴨樣品陽(yáng)性檢出率最高，表明江西省蛋鴨的養(yǎng)殖條件相對(duì)較差，有待改進(jìn)。

3.3 結(jié)合細(xì)菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果，近期防治禽霍亂的首選藥物為氨芐青霉素、復(fù)方新諾明、頭孢唑啉、多黏菌素B和強(qiáng)力霉素5種，防治鴨傳染性漿膜炎敏感藥物共有7種，主要為丁胺卡那霉素、氨芐青霉素、頭孢唑啉和氟苯尼考等，防治禽沙門(mén)菌病的敏感藥物共有10種，主要為丁胺卡那霉素、氟哌酸、復(fù)方新諾明等，而致病性大腸桿菌的耐藥譜較廣，只有頭孢唑啉和氟苯尼考兩種藥物可供選用。自不同樣品中分離的同一種細(xì)菌，其藥敏結(jié)果差異較大、耐藥譜寬窄不一，這與每個(gè)飼養(yǎng)場(chǎng)的用藥情況直接相關(guān)。因此，針對(duì)不同養(yǎng)殖場(chǎng)實(shí)際用藥時(shí)，需結(jié)合對(duì)每個(gè)場(chǎng)每次發(fā)病的細(xì)菌分離及藥敏試驗(yàn)結(jié)果指導(dǎo)用藥，且每次用藥盡量不要重復(fù)，以免產(chǎn)生耐藥情況。

3.4 經(jīng)血清型試驗(yàn)鑒定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，禽多殺性巴氏桿菌的莢膜血清群為A型，致病性大腸桿菌的血清型主要為O78、O2和O88，鴨疫里默菌的血清型主要為2型和11型，沙門(mén)菌以腸炎沙門(mén)菌與鼠傷寒沙門(mén)菌為主，為以上4種主要細(xì)菌病疫苗研發(fā)血清型(群)的選擇提供科學(xué)依據(jù)，也為生產(chǎn)中防控這4種主要細(xì)菌病的疫苗選擇提供參考。

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Epidemiological Survey and Analysis on main bacteria from Fujian laying ducks

FU Qiu-ling， CHENG Long-fei， FU Guang-hua， LIU Rong-chang， WAN Chun-he，SHI Shao-hua， CHEN Hong-mei， CHEN Zhen， CHEN Cui-teng， HUANG Yu

(Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Fujian Academy of Agricultural Sciences，F(xiàn)ujian Animal Diseases Control Technology Development Center,Fujian provincial key laboratory for avian diseases control and prevention, Fuzhou 350013, China)

To define the characteristics of the main bacteria from Fujian laying ducks including Jinding duck,Shanma duck and Liancheng white duck, 852 samples were collected from laying ducks with irregularity and reduction or death from duck farms of Fujian Province and its periphery during 2010—2013.Pasteurellamultocida,Escherichiacoli,Riemerellaanatipestifer,andsalmonellaswere detected by PCR. The results showed that the rates of the four kinds of bacteria were 8.6%,18.2%，5.3% and 1.4% for Jinding duck， 10.4%, 21.8%, 4.2% and 1.7% for shanma duck and 8.8%、 17.6%、 3.8% and 0 for Liancheng white duck. SoEscherichiacoliandPasteurellamultocidawere the main bacteria which post threat to Fujian laying ducks, The capsular serotype A and O78, O2, O88 and 2, 11 serotypes andSalmonellatyphimuriumorSalmonellatyphimuriumwere the main serotypes of the four kinds of bacteria. Five, two, seven and ten kinds of preferred drugs were used for the four kinds of bacteria. And the resistance profile ofEscherichiacoliwas the widest.

laying duck;bacteria; serotype; resistance

HUANG Yu

2016-08-18

國(guó)家水禽產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專(zhuān)項(xiàng) (CARS-43)；福建省優(yōu)良蛋鴨品種與設(shè)施化養(yǎng)殖創(chuàng)新產(chǎn)業(yè)化工程項(xiàng)目(2014-2016)；福建省畜禽疫病防控技術(shù)重大研發(fā)平臺(tái)(2014N2003)；福建省屬公益類(lèi)項(xiàng)目(2015R1023—2)；福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院“雙百”行動(dòng)項(xiàng)目(sbmx1625)

傅秋玲(1985- )，女，助理研究員，碩士，主要從事水禽疫病研究，E-mail：qiulingfu0822@163.com

黃瑜，E-mail：huangyu_815@163.com

S858.32

A

0529-6005(2016)11-0010-03