2014～2015年鮑曼不動(dòng)桿菌的醫(yī)院分離情況和耐藥性分析

侯學(xué)伶，孫 巖，李 娜，趙應(yīng)飛，劉 昱，銀廣悅

（中國(guó)石油天然氣集團(tuán)公司中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 廊坊 065000）

2014～2015年鮑曼不動(dòng)桿菌的醫(yī)院分離情況和耐藥性分析

侯學(xué)伶，孫 巖，李 娜，趙應(yīng)飛，劉 昱，銀廣悅

（中國(guó)石油天然氣集團(tuán)公司中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 廊坊 065000）

目的了解2014年至2015年鮑曼不動(dòng)桿菌在本院的分布情況，并對(duì)其耐藥性進(jìn)行分析，為臨床合理使用抗菌藥物及控制院內(nèi)感染提供依據(jù)。方法收集本院2014年1月至2015年12月間送檢的各種臨床標(biāo)本，應(yīng)用 VITEK 2 Compact全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)對(duì)臨床分離的病原菌進(jìn)行鑒定，同時(shí)用 K-B藥敏紙片法測(cè)定抗菌藥物敏感率，結(jié)果按照 CLSI標(biāo)準(zhǔn)判定。利用WHONT 5.6軟件分析鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥性及其分布。結(jié)果重癥監(jiān)護(hù)病房（ICU）和呼吸科的鮑曼不動(dòng)桿菌分離率最高，且以呼吸道標(biāo)本為主，達(dá)90%以上；2014至2015年我院共分離出鮑曼不動(dòng)桿菌212株，耐藥結(jié)果顯示，鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)氨曲南、頭孢他啶耐藥明顯，超過(guò)40%，對(duì)頭孢呋辛鈉表現(xiàn)出100%耐藥，但亞胺培南、頭孢哌酮-舒巴坦、復(fù)方磺胺甲惡唑?qū)︴U曼氏不動(dòng)桿菌仍有較好的抗菌作用（耐藥率 ＜25%），其中鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)頭孢哌酮-舒巴坦的耐藥率最低，耐藥率小于5%。結(jié)論鮑曼不動(dòng)桿菌感染率不斷上升，已成為 ICU感染的主要病原菌，但由于其耐藥性各不相同，對(duì)其進(jìn)行耐藥性分析，可以進(jìn)一步指導(dǎo)臨床合理使用抗生素，控制多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌傳播。

鮑曼不動(dòng)桿菌； 耐藥性； 抗菌藥物

鮑曼不動(dòng)桿菌是非發(fā)酵、需氧的一類革蘭氏陰性球桿菌，它廣泛分布于自然界，在土壤、污水、醫(yī)院環(huán)境、醫(yī)療器械中都可以分離出，是人體皮膚黏膜等部位存在的正常菌群，一般情況下被認(rèn)為是不致病或致病性很弱的菌群［1］。但近年來(lái)，它已經(jīng)成為醫(yī)院感染的重要條件致病菌，可以導(dǎo)致免疫缺陷的病人發(fā)生嚴(yán)重的院內(nèi)感染，它主要引起呼吸道感染，也可引發(fā)繼發(fā)性腦膜炎、泌尿系感染、菌血癥、敗血癥、呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎、手術(shù)部位感染等［2］。隨著廣譜抗生素的廣泛應(yīng)用，多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌迅速出現(xiàn)，甚至出現(xiàn)了全耐藥的菌株，給臨床治療帶來(lái)很大困難。因此，我們對(duì)2014至2015年我院各科室鮑曼不動(dòng)桿菌的分離情況作一總結(jié)，并對(duì)其耐藥特征進(jìn)行分析，為臨床合理使用抗菌藥物，嚴(yán)格控制院內(nèi)感染提供依據(jù)。

材料和方法

1 菌株來(lái)源

分離我院 2014年至 2015年間所有的住院和門診患者的細(xì)菌學(xué)送檢標(biāo)本，包括痰液、咽拭子、尿液、血液、傷口分泌物、引流液等等（同一患者重復(fù)標(biāo)本分離的細(xì)菌不計(jì)入在內(nèi)，同一患者不同部位標(biāo)本分離細(xì)菌計(jì)入在內(nèi)）。

2 主要儀器和試劑

主要儀器：法國(guó)生物梅里埃公司的VITEK 2 Compact全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)。主要試劑和耗材：血平板、中國(guó)藍(lán)、營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板購(gòu)自賽默飛世爾科技中國(guó)有限公司；GN鑒定卡購(gòu)自美國(guó)生物梅里埃公司。檢測(cè)抗菌藥物包括：氨曲南（ATM）、頭孢他啶（CAZ）、頭孢哌酮-舒巴坦（SCF）、環(huán)丙沙星（CIP）、頭孢曲松（CRO）、頭孢吡肟（FEP）、慶大霉素（GN）、亞胺培南（IPM）、左氧氟沙星（LEV）、哌拉西林（PIP）、頭孢呋辛鈉（CEL）、氨 芐西林／舒巴 坦（AMS）、復(fù)方磺胺甲惡唑（SXT）、妥布霉素（TOB）、哌拉西林／他佐巴坦（TZP），所有藥敏紙片均購(gòu)自英國(guó)的 OXOID公司。

3 質(zhì)控菌株

大 腸 埃 希 菌 ATCC25922、銅綠假單 胞 菌ATCC27853。質(zhì)控菌株購(gòu)自衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心。

4 細(xì)菌鑒定

所有實(shí)驗(yàn)菌株嚴(yán)格按照鮑曼不動(dòng)桿菌常規(guī)操作規(guī)程進(jìn)行操作。臨床標(biāo)本接種于血瓊脂平板及中國(guó)藍(lán)瓊脂平板，35℃及5%CO2條件下培養(yǎng)24h，觀察生長(zhǎng)情況，革蘭染色。作觸酶、氧化酶實(shí)驗(yàn)，挑取疑似菌落純培養(yǎng)后上機(jī)鑒定。

5 藥物敏感試驗(yàn)

K-B法測(cè)定所有入選菌株對(duì)15種抗生素的敏感性，操作及結(jié)果判讀嚴(yán)格按照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所（CLSI）2012年的抗菌藥物敏感性試驗(yàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)［3］。在已分純的實(shí)驗(yàn)菌平板上挑選 3～5個(gè)菌落接種于3mL無(wú)菌生理鹽水中，稀釋到0.5麥?zhǔn)媳葷岫?；用無(wú)菌棉簽蘸取菌液，均勻涂布在 MH瓊脂平板上，待平板略干后貼上抗生素紙片，置于35～37℃溫箱中培養(yǎng) 24h，測(cè)量各抑菌圈的直徑。（備注：由于頭孢哌酮-舒巴坦在CLSI 2012年的標(biāo)準(zhǔn)中沒有折點(diǎn)，本研究中參照頭孢哌酮的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判讀。）

6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用WHONET 5.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

結(jié) 果

1 鮑曼不動(dòng)桿菌在臨床標(biāo)本中的分離情況

在2014年至2015年間共分離出鮑曼不動(dòng)桿菌212株，其中以呼吸道來(lái)源的標(biāo)本最多，達(dá) 90%以上。構(gòu)成比見圖1。

2 鮑曼不動(dòng)桿菌在科室中的分布情況

鮑曼不動(dòng)桿菌在科室中的分布情況見表1。

表1 鮑曼不動(dòng)桿菌桿菌在科室中的分布（份）

3 鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)15種抗菌藥物的耐藥率

鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)15種抗菌藥物的耐藥率見表2。

討 論

鮑曼不動(dòng)桿菌是引起醫(yī)院感染的重要病原菌，由于其對(duì)化學(xué)消毒劑、濕熱、紫外線有很強(qiáng)的抵抗力，加之近年來(lái)廣譜抗生素的廣泛應(yīng)用和置入性醫(yī)療器械的增多，它引起的院內(nèi)感染情況日益突出，且多重耐藥甚至是全耐藥菌株的出現(xiàn)給院內(nèi)感染控制和臨床治療帶來(lái)了難題［4］。只有及時(shí)找到感染源頭，切斷多重耐藥／泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的傳播途經(jīng)，加強(qiáng)鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥監(jiān)測(cè)和耐藥機(jī)制研究，才能有效控制醫(yī)院內(nèi)感染的播散流行。

從本研究中可以看出，在臨床送檢標(biāo)本中，以呼吸道標(biāo)本的分離率最高，達(dá)91%，說(shuō)明呼吸道仍是鮑曼不動(dòng)桿菌感染的主要部位，臨床上使用呼吸機(jī)也可能是導(dǎo)致鮑曼不動(dòng)桿菌呼吸道感染的原因。有研究［5］表明，鮑曼不動(dòng)桿菌的易感因素中以患有肺部疾病和接受通氣治療的居多，另外進(jìn)行過(guò)侵襲操作的也不在少數(shù)，本研究結(jié)果與其一致。ICU患者由于免疫力低下，基礎(chǔ)疾病嚴(yán)重，使用呼吸機(jī)和使用氣管插管等侵入性操作增多，抗菌藥物的大量、長(zhǎng)時(shí)間使用，住院時(shí)間長(zhǎng)等，都使條件致病菌所致的各類感染增加。在本研究中，ICU患者的鮑曼不動(dòng)桿菌的分離率最高，恰恰說(shuō)明了患者病情較重、住院時(shí)間較長(zhǎng)、侵入性操作較多、用藥時(shí)間較長(zhǎng)等是造成鮑曼不動(dòng)桿菌院內(nèi)感染的重要原因，與文獻(xiàn)［6］報(bào)道一致。

本文表2結(jié)果顯示，本院鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥現(xiàn)象較嚴(yán)重，多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的分離率明顯增高，耐藥菌對(duì)常用的 β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥率最高，其耐藥機(jī)制主要是產(chǎn)生超廣譜 β-內(nèi)酰胺酶和Ampc酶，此酶種類多樣，由質(zhì)粒、染色體獲得，使細(xì)菌對(duì)頭孢類藥物不敏感。而對(duì)加入了酶抑制劑的 β-內(nèi)酰胺類藥物的耐藥率明顯低于單一成分藥物的耐藥率，如頭孢哌酮-舒巴坦，耐藥率小于5%。其原因是舒巴坦對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌具有天然的抗菌活性，對(duì)該菌的青霉素結(jié)合蛋白（PBP）有抑制和殺滅作用［7-8］，因而頭孢哌酮-舒巴坦是治療鮑曼不動(dòng)桿菌感染的首選藥物。

不動(dòng)桿菌的特征是對(duì)全部氨基青霉素、一代二代頭孢菌素天然耐藥［9］，其耐藥機(jī)制復(fù)雜，能夠獲得抵抗多種抗生素的能力以及在大多數(shù)環(huán)境表面生存的能力，因此，采取有效的感染控制措施，嚴(yán)格消毒、隔離制度，醫(yī)務(wù)人員勤洗手，規(guī)范無(wú)菌操作是預(yù)防感染發(fā)生的關(guān)鍵，尤其在重癥監(jiān)護(hù)病房。醫(yī)院應(yīng)開展規(guī)范的、連續(xù)的耐藥性監(jiān)測(cè)，及早了解本院臨床分離菌的耐藥特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)耐藥菌株，依據(jù)藥敏結(jié)果合理地指導(dǎo)和調(diào)整臨床用藥，為控制鮑曼不動(dòng)桿菌感染提供依據(jù)。

［1］Paterson D L.The epidemiological profile of infections with multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter species.Clin Infect Dis，2006，43（Suppl2）：S43-S48.

［2］羅湘蓉，李紅凌，何平，等.鮑曼不動(dòng)桿菌的感染分布及耐藥性分析.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9（10）：1248-1249.

［3］葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006：715-920.

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［5］Kempf M，Rolain J M.Emergence of resistance to carbapenems in Acinetobacter baumannii in Europe：clinical impact and therapeutic options.Int J Antimicrob Agents，2012，39（2）：105-114.

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［7］Pei G，Mao Y，Sun Y.In vitro activity of minocycline alone and in combination with cefoperazone-sulbactam against carbapenemresistant Acinetobacter baumannii.Microb Drug Resist，2012，18（6）：574-577.

［8］楊慧健，邢麗丹，糜祖煌，等.鮑曼不動(dòng)桿菌多重耐藥性與外排泵機(jī)制研究.中國(guó)抗生素雜志，2015，40（1）：70-74.

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（李 雁 張?jiān)鑫渚庉嫞?/p>

Distribution and Drug-resistance of Acinetobacter Baumanii

HOU Xue-ling，SUN Yan，LI Na，ZHAO Ying-fei，LIU Yu，YIN Guang-yue
（The Laboratory of CNPCCH，Langfang 065000，China）

ObjectiveTo investigate the distribution and drug-resistance of Acinetobacter baumanii（AB）in our hospital from 2014 to 2015 and to provide basis for rational drug use in clinical settings and control of nosocomial infections.MethodsAB was isolated from clinical samples collected from January 2014 to December 2015，and the samples were identified with automatic analysis system VITEK 2 compact.Drug sensitivity was detected with the K-B method and determined according to CLSI standards.WHONET 5.4 softwares were used to analyze the data.ResultsAcinetobacter baumanii was most often isolated from respiratory specimens，the rates are more than 90%，and ICU and the department of respiratory medicine were primary locations.A total of 212 strains of Acinetobacter baumannii were isolated.Drug resistance rate of Acinetobacter baumannii toaztreonam and ceftazidime was more than 40%.Cefuroxime sodium showed 100%resistance.Imipenem，cefoperazone-sulbactam and cotrimoxazole for Acinetobacter baumannii still had better antibacterial effect（R＜25%）.Antimicrobial susceptibility tests showed that AB had lowest resistances to cefoperazone／sulbactam in all antibacterial drugs（R＜5%）.ConclusionThe infection rate of Acinetobacter baumannii is rising.Acinetobacter baumannii has become the main pathogen of infection in ICU.Analysis of drug resistance can provide further guideline for clinical rational use of antibiotics and control the spread of the multiple drug resistant of acinetobacter baumanni.

Acinetobacter baumannii； Drug resistance； Antimicrobial agent

10.11748／bjmy.issn.1006-1703.2016.12.028

2016-06-20；

2016-10-18

侯學(xué)伶（1986—），女，中國(guó)石油天然氣集團(tuán)公司中心醫(yī)院檢驗(yàn)科。

銀廣悅，男，中國(guó)石油天然氣集團(tuán)公司中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，主任技師。