抗應(yīng)激劑對肉雞生長性能和抗氧化能力的影響

■ 劉水平 肖海思 曾 禹 周慧娟 嚴(yán)思思 李曉文 文利新*

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖南長沙 410128；2.湖南畜禽安全生產(chǎn)協(xié)同創(chuàng)新中心，湖南長沙 410128）

動物在自然條件下感染了某種不顯臨床癥狀的隱形傳染病或輕微傳染病后，免疫系統(tǒng)通常被激活，而短時間內(nèi)需接種多種疫苗則誘發(fā)復(fù)合免疫應(yīng)激，引起機體平衡的紊亂，從而直接或間接改變動物機體免疫系統(tǒng)的狀態(tài)，可能降低雞群的生長性能、飼料報酬率等，嚴(yán)重時甚至導(dǎo)致死亡[1-2]。

研究發(fā)現(xiàn)，由各種應(yīng)激因素導(dǎo)致的氧化損傷的主要原因分二類：一是氧自由基的異常增加，超過機體自身抗氧化系統(tǒng)清除的能力，致使機體氧化與抗氧化體系不能維持平衡狀態(tài)，從而誘發(fā)細胞、組織氧化損傷；二是機體本身的抗氧化系統(tǒng)受到侵害，導(dǎo)致機體抗氧化能力出現(xiàn)障礙，甚至有時兩種情況同時發(fā)生。其中，氧自由基的毒性作用為脂質(zhì)過氧化、破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的主要破壞途徑。所以，機體維持正常的氧自由基濃度對于其抵抗外界病原威脅以及增強自身免疫都有著重要作用[3-4]。Zhang等的研究結(jié)果表明，一定劑量的LPS可以導(dǎo)致肉雞血清中GSH-Px、T-SOD活性降低，胸肌和腿肌的MDA含量增加[5-6]。

抗應(yīng)激劑是調(diào)節(jié)動物的免疫應(yīng)答及增強機體免疫功能的飼料添加劑。本研究使用的抗應(yīng)激劑由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)臨床獸醫(yī)系課題研究組提供，由多種維生素（VA、VC、VE）、蘇氨酸、多維、茶多酚、抗氧胺、蝦青素、低聚異麥芽糖等多種抗氧化功能性成分組成。茶多酚是從茶葉中提取的酚類化合物總稱，大量研究表明，茶多酚具有抗氧化和提高免疫力的功效，可有效清除氧自由基和脂類自由基[7-9]。蝦青素是一種從蝦蟹外殼、牡蠣、鮭魚及藻類真菌中發(fā)現(xiàn)的紅色類胡蘿卜素，被譽為“超級抗氧化劑”，具有抗炎、抗癌、促進生長繁殖等功能[10]。VC是動物生長發(fā)育中必不可少的營養(yǎng)素，具有維持機體正常生理功能、造血功能及促進體內(nèi)多種激素的合成作用，發(fā)揮了促生長、提高免疫和抗應(yīng)激的生物學(xué)功能。VE作為一種天然的抗氧化劑，主要是通過抑制機體脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的一種必需的營養(yǎng)因子[11-12]。為有效防控免疫應(yīng)激，本研究設(shè)計了復(fù)合抗應(yīng)激劑，開展其對肉雞復(fù)合免疫應(yīng)激狀態(tài)下的免疫功能和抗氧化水平的效果評價，為生產(chǎn)中抗應(yīng)激劑的合理使用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗日糧

試驗日糧為基礎(chǔ)日糧，料型皆為粉料，原料組成及營養(yǎng)水平含量見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)水平

在抗應(yīng)激劑組中的日糧分別添加1%抗應(yīng)激劑，由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)臨床獸醫(yī)系課題研究組提供，由多種維生素（VA、VC、VE）、蘇氨酸、多維、茶多酚、抗氧胺、蝦青素、低聚異麥芽糖等多種抗氧化功能性成分組成，產(chǎn)品委托湖南長沙綠葉生物科技有限公司加工。

1.1.2 主要試劑與儀器（見表2、表3）

表2 試驗材料及試劑

表3 試驗儀器

1.2 方法

1.2.1 試驗動物與飼養(yǎng)管理

試驗動物選用128只體重一致、健康狀況良好的1日齡AA肉仔雞（湖南省畜牧獸醫(yī)研究所）。試驗開始前，雞舍進行徹底的清洗和消毒工作，待干燥后，用甲醛和高錳酸鉀熏蒸。整個試驗過程人工控溫，自由采食、飲水。保持固定的飼喂時間，保證水源干凈、充足。時時觀察、記錄雞的采食和精神健康狀況。

1.2.2 試驗設(shè)計

試驗選取體重一致的1日齡健康A(chǔ)A肉仔雞128只，隨機分為A、B、C、D共四組，每組32只。A組為250 μg/kg.BW LPS+2羽份NDVⅣ系疫苗免疫組；B組為250 μg/kg.BW LPS+2羽份NDVⅣ系疫苗免疫+1%抗應(yīng)激劑組；C組為500 μg/kg.BW LPS+2羽份NDVⅣ系疫苗免疫組；D組為500 μg/kg.BW LPS+2羽份NDVⅣ系疫苗免疫+1%抗應(yīng)激劑組（見表4）。從肉雞12日齡起每3 d腹腔注射1次大腸桿菌脂多糖（LPS），連續(xù)4次（即12、15、18、21 d）。于15 d和28 d分別接種NDVⅣ系疫苗，各組分隔飼喂，試驗周期42 d。每組于免疫前后稱取體重、采食量，計算料重比。分別于22、29、36、42 d殺雞采樣，檢測血清中的生化指標(biāo)。

表4 試驗動物分組

1.2.3 生長性能檢測

分別于22、29、36、42 d稱重，記錄其體重、采食量，計算料重比。

1.2.4 抗氧化功能指標(biāo)檢測

取每組肉雞血清，用南京建成試劑盒檢測活性丙二醛（MDA）含量、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性，測定方法按試劑盒說明書進行。

1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用SPSS17.0軟件對試驗數(shù)據(jù)進行ANOVA單因素方差分析，數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，結(jié)合分析結(jié)果運用GraphPad Prism 5軟件進行作圖。P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗應(yīng)激劑對肉雞生長性能的影響

圖1 抗應(yīng)激劑對AA肉雞體重影響

圖2 抗應(yīng)激劑對AA肉雞料重比（F/G）的影響

由圖1可知，在22、42 d時，與A組相比，B組體重極顯著升高（P＜0.01），體重分別提高了34.20%、10.49%。42 d時，D組體重與C組相比顯著升高（P＜0.05），提高了5.80%。D組與B組相比體重顯著降低（P＜0.05）。由圖2可知，與復(fù)合免疫應(yīng)激組相比，添加1%抗應(yīng)激劑組料重比均降低，但無差異顯著性（P＞0.05）。

上述結(jié)果表明：在日糧中添加抗應(yīng)激劑對肉雞42 d體重均有顯著升高影響（P＜0.01），且注射250 μg/kg.BW LPS的情況下添加1%的抗應(yīng)激劑比注射500 μg/kg.BW LPS的情況下添加1%的抗應(yīng)激劑效果更好，同時，添加抗應(yīng)激劑降低肉雞的料重比，有提高飼料轉(zhuǎn)化率的趨勢，但無差異顯著性(P＞0.05)。

2.2 抗應(yīng)激劑對肉雞抗氧化能力的影響

圖3 抗應(yīng)激劑對AA肉雞MDA含量的影響

由圖3可知，在22、29、36 d 時，D組血清中MDA含量與 B組相比差異顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01），分別降低了21.33%、24.93%、24.18%。由圖4可知，22 d時，B組血清中T-SOD活性與A組相比差異極顯著（P＜0.01），提高了95.45%；42 d時，D組血清中T-SOD活性與C組、B組相比均差異極顯著（P＜0.01），分別降低了39.89%、41.18%。

由圖5可知，在22、36 d時，與A組相比，B組血清中GSH-Px活性差異極顯著（P＜0.01），分別提高了60.21%、24.19%，42 d GSH-Px活性降低了19.31%；在29、36 d時，D組血清中GSH-Px活性與B組相比差異極顯著（P＜0.01），分別降低了30.75%、23.60%。

上述結(jié)果表明：日糧中添加抗應(yīng)激劑能有效改善機體抗氧化功能，降低了MDA含量（P＜0.05），對T-SOD活性的影響呈先提高后降低的趨勢（P＜0.05），提高了GSH-Px活性（P＜0.01）。此外，抗應(yīng)激劑的效果在注射250 μg/kg.BW LPS的情況下更顯著。

3 討論

3.1 抗應(yīng)激劑對肉雞生長性能的影響

圖4 抗應(yīng)激劑對AA肉雞T-SOD活性的影響

圖5 抗應(yīng)激劑對AA肉雞GSH-Px活性的影響

抗應(yīng)激劑對肉雞生長性能的影響是通過多種物質(zhì)的生物活性疊加而實現(xiàn)的，其疊加所產(chǎn)生的促生長效果比單一成分的促生長效果有不同程度的改善。本試驗中，第22、42 d低劑量LPS+NDVⅣ系疫苗+1%抗應(yīng)激劑組的肉雞體重相對低劑量LPS+NDVⅣ系疫苗而言顯著提高（P＜0.01），隨著日齡增加，對體重的影響作用從試驗22 d持續(xù)到第36 d。第42 d時，高劑量LPS+NDVⅣ系疫苗+1%抗應(yīng)激劑組的肉雞體重低于低劑量LPS+NDVⅣ系疫苗+1%抗應(yīng)激劑組（P＜0.05）。日糧中添加抗應(yīng)激劑組的料重比低于其試驗對照組，但差異不顯著（P＞0.05）。這表明，肉雞日糧中添加抗應(yīng)激劑提高了動物的生產(chǎn)性能，緩解了復(fù)合免疫應(yīng)激對肉雞生長發(fā)育的影響。采食量、消化能力、飼料養(yǎng)分是影響動物生產(chǎn)性能的物質(zhì)基礎(chǔ)，結(jié)合之前的試驗結(jié)果，復(fù)合免疫應(yīng)激能顯著降低肉雞生長性能可能是應(yīng)激導(dǎo)致機體紊亂、采食量降低從而導(dǎo)致生長性能降低，而抗應(yīng)激劑中的茶多酚、蝦青素、VC、VE等抗氧化劑恰恰緩解了應(yīng)激對機體的紊亂效應(yīng)，從而改善了肉雞的生產(chǎn)性能[11-13]。

3.2 抗應(yīng)激劑對肉雞抗氧化功能的影響

機體通過酶和非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，正常情況下，機體內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生和清除是處于動態(tài)平衡的[14]。免疫應(yīng)激可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生大量脂質(zhì)過氧化物，脂質(zhì)過氧化最常見的檢測指標(biāo)是丙二醛（MDA）的含量，血清中MDA含量的高低從一定程度上來說可以反映機體氧化反應(yīng)的活躍程度，MDA含量的高低能反映脂質(zhì)過氧化強度和膜系統(tǒng)傷害程度。機體內(nèi)清除自由基的酶系統(tǒng)主要包括T-SOD、GSH-Px、CAT等，T-SOD和GSH-Px是機體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)中起主要作用的抗氧化物酶。本試驗中，抗應(yīng)激劑在日糧中的添加，一定程度上能提高血清中GSH-Px和T-SOD活性，降低MDA的含量，這有可能是抗應(yīng)激劑中的茶多酚以及VC、VE的功效。大量研究表明，飼料中VE含量增高時，將導(dǎo)致血清中GSH-Px、T-SOD活性顯著升高，從而有效提高機體的抗氧化能力[15-18]。試驗結(jié)果表明：日糧中添加抗應(yīng)激劑能有效改善機體抗氧化功能，降低了MDA含量（P＜0.05），對T-SOD活性的影響呈先提高后降低的趨勢（P＜0.05），提高了GSH-Px活性（P＜0.01）。而高劑量LPS+NDV+1%抗應(yīng)激劑組血清中T-SOD活性顯著降低，有可能是復(fù)合免疫應(yīng)激LPS濃度過大對機體刺激強度超過了機體抗氧化系統(tǒng)的負(fù)荷，從而無法改善，若抗應(yīng)激劑添加濃度加大也有可能修復(fù)機體的氧化應(yīng)激的刺激強度，具體機制有待進一步研究。本次研究結(jié)果中低劑量LPS+NDVⅣ系疫苗+1%抗應(yīng)激劑組對提高機體的抗氧化性能效果較好。

4 結(jié)論

抗應(yīng)激劑在日糧中的添加能夠提高肉雞生長性能和抗氧化能力，有效緩解免疫應(yīng)激帶給機體的刺激。