Akt通路及細(xì)胞凋亡在瘦素介導(dǎo)的大鼠慢性嗎啡鎮(zhèn)痛耐受中的作用*

胡 芬， 崔 宇， 郭瑞鮮， 莫利求， 馮鑒強(qiáng)△

(中山大學(xué) 1附屬第一醫(yī)院病理學(xué)教研室， 2中山醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室，廣東 廣州 510080； 3中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院黃埔院區(qū)麻醉科，廣東 廣州 510700)

Akt通路及細(xì)胞凋亡在瘦素介導(dǎo)的大鼠慢性嗎啡鎮(zhèn)痛耐受中的作用*

胡 芬1， 崔 宇2， 郭瑞鮮2， 莫利求3， 馮鑒強(qiáng)2△

(中山大學(xué)1附屬第一醫(yī)院病理學(xué)教研室，2中山醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室，廣東 廣州 510080；3中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院黃埔院區(qū)麻醉科，廣東 廣州 510700)

目的： 探討Akt(又稱蛋白激酶B)及活化的caspase-3在瘦素介導(dǎo)的大鼠慢性嗎啡鎮(zhèn)痛耐受中的作用。方法：在SD大鼠建立慢性嗎啡鎮(zhèn)痛耐受模型；采用Western blotting法測(cè)定脊髓Akt和cleaved caspase-3的水平；免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)脊髓磷酸化Akt (p-Akt)及cleaved caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞；免疫雙染檢測(cè)p-Akt及cleaved caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞的定位。結(jié)果：鞘內(nèi)慢性注射嗎啡(15 μg)7 d可明顯上調(diào)大鼠脊髓p-Akt及cleaved caspase-3的蛋白水平；在注射嗎啡前30 min，鞘內(nèi)注射瘦素拮抗劑(3 μg)7 d能顯著地抑制慢性嗎啡處理對(duì)p-Akt和cleaved caspase-3的上調(diào)作用；p-Akt只定位在脊髓神經(jīng)元，而cleaved caspase-3僅定位在星形膠質(zhì)細(xì)胞；瘦素拮抗劑、Akt抑制劑及caspase-3抑制劑均能抑制慢性嗎啡鎮(zhèn)痛耐受。結(jié)論：脊髓Akt通路及活化的caspase-3參與瘦素介導(dǎo)的大鼠慢性嗎啡鎮(zhèn)痛耐受。

瘦素； Akt； Caspase-3； 嗎啡鎮(zhèn)痛耐受

瘦素(leptin)是一種主要由脂肪組織分泌的分子量為16 kD的激素，隨血循環(huán)到達(dá)全身各系統(tǒng)發(fā)揮重要的生理及病理生理作用。近年，有研究證實(shí)，瘦素與神經(jīng)損傷引起的痛行為有關(guān)[1]。我們觀察到，瘦素可通過(guò)激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子與轉(zhuǎn)錄激活子3 (signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)通路和NMDA受體介導(dǎo)大鼠嗎啡(morphine, Mor)鎮(zhèn)痛耐受[2]。但是，瘦素在大鼠嗎啡鎮(zhèn)痛耐受中的作用機(jī)制是復(fù)雜的，可能還涉及其他的下游信號(hào)分子。

磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)-Akt(也被稱為蛋白激酶B)通路是瘦素介導(dǎo)的食物攝取快速作用的必需通路[3]。值得注意的是，嗎啡受體與嗎啡對(duì)Akt有明顯的調(diào)節(jié)作用， 例如嗎啡通過(guò)激活A(yù)kt引起體外培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞增殖[4]。但是Akt是否參與瘦素介導(dǎo)的嗎啡鎮(zhèn)痛耐受尚未明了。

近年來(lái)，慢性嗎啡處理的致神經(jīng)元凋亡作用受到重視。有報(bào)道慢性嗎啡處理能激活大鼠脊髓caspase-3(為反映細(xì)胞凋亡的指標(biāo))，此作用與嗎啡鎮(zhèn)痛耐受有關(guān)[5-6]。但是，瘦素是否參與慢性嗎啡耐受對(duì)caspase-3 的激活作用，國(guó)內(nèi)外迄今未見(jiàn)報(bào)道。

為了探討上述的研究?jī)?nèi)容，本研究擬在SD大鼠建立嗎啡鎮(zhèn)痛耐受模型，重點(diǎn)探討Akt通路在瘦素介導(dǎo)的嗎啡鎮(zhèn)痛耐受和活化的caspase-3在瘦素介導(dǎo)的嗎啡鎮(zhèn)痛耐受中的作用。

材 料 和 方 法

1 動(dòng)物和試劑

清潔級(jí)SD雄性大鼠36只，體重250～280 g，由國(guó)家級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心中山大學(xué)北校區(qū)動(dòng)物中心提供。

鹽酸嗎啡購(gòu)自青海制藥有限公司；瘦素拮抗劑(leptin antagonist，LA)由ProSpec供應(yīng)；兔抗大鼠瘦素多克隆抗體和羊抗大鼠瘦素受體多克隆抗體購(gòu)自Santa Cruz；Akt抑制劑LY294002(LY)、兔抗大鼠p-Akt多克隆抗體及兔抗大鼠Akt多克隆抗體購(gòu)自CST；caspase-3抑制劑Ac-DEVD-CHO (Ac)購(gòu)自Sigma；兔抗大鼠cleaved caspase-3 抗體購(gòu)自Bioworld；小鼠抗大鼠神經(jīng)元特異性核蛋白(neuron-specific nuclear protein,Neu)單克隆抗體、小鼠抗大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物OX-42單克隆抗體及小鼠抗大鼠GFAP單克隆抗體購(gòu)自Chemicon。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立、行為學(xué)測(cè)試及分組 大鼠于12 h光照-黑暗循環(huán)、安靜環(huán)境下單籠飼養(yǎng)，自由飲水?dāng)z食。室溫控制在(25±1) ℃。按照前文[2]介紹的方法，每只大鼠每天于上午9時(shí)接受1次鞘內(nèi)嗎啡注射(15 μg)，連續(xù)注射7 d。在給予注射嗎啡前及注射后30 min的第1、3、5、7天以熱甩尾法測(cè)試甩尾閾值，注射前為基礎(chǔ)閾值(basic latency，BL)，注射后為鎮(zhèn)痛閾值(total latency，TL)，動(dòng)物尾部在熱水[(50.0±0.2) ℃]中停留最長(zhǎng)時(shí)間為15 s(cut-off time)， 使用最大鎮(zhèn)痛百分比(percentage of maximal potential effect，%MPE)=(TL-BL)/(cut-off time-BL)×100%作為統(tǒng)計(jì)值來(lái)進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試。大鼠隨機(jī)分為8組，每組6只:生理鹽水(normal saline,NS)對(duì)照組、嗎啡耐受組(NS+Mor組)、瘦素拮抗劑(LA)干預(yù)組(LA+Mor組)、瘦素拮抗劑對(duì)照組(LA+NS組)、Akt抑制劑(LY)干預(yù)組(LY+Mor組)、Akt抑制劑對(duì)照組(LY+NS組)、caspase-3抑制劑干預(yù)組(Ac+Mor組)和caspase-3抑制劑對(duì)照組(Ac+NS組)。干預(yù)組在給予嗎啡注射前30 min給予藥物干預(yù)。

2.2 Western blot法測(cè)定Akt及caspase-3的蛋白水平 行為學(xué)測(cè)定結(jié)束后，立即處死大鼠取得新鮮脊髓組織，將組織與裂解液以1∶10比例于4 ℃混合勻漿后，迅速以15 000 r/min離心30 min，4 ℃離心取上清組織蛋白，于-80 ℃儲(chǔ)存。將組織蛋白與緩沖液以2∶1混合后加入SDS-PAGE凝膠中以恒壓進(jìn)行蛋白電泳，將組織蛋白以8 V、30 min轉(zhuǎn)至PVDF膜，再將PVDF膜分別置于I抗液中(cleaved caspase-3，1∶2 000；p-Akt，1∶500)4 ℃孵育過(guò)夜，沖洗后置于 II 抗液中(1∶3 000)室溫孵育1.5 h，使用ECL發(fā)光顯影法于暗房中顯影，使用圖像分析軟件進(jìn)行各條帶的灰度分析。

2.3 免疫熒光雙染法檢測(cè)p-Akt及cleaved caspase-3的細(xì)胞定位 行為學(xué)測(cè)定結(jié)束后，立即注射過(guò)量苯巴比妥鈉(100 mg/kg)處死大鼠，采用4%多聚甲醛溶液灌注后取腰段脊髓進(jìn)行脫水及切片。加3%正常羊血清封閉1 h；加入稀釋后的混合 I 抗50 μL：兔抗大鼠p-Akt多克隆抗體(1∶200)或兔抗大鼠cleaved caspase-3 抗體(1∶200)，分別與小鼠抗大鼠Neu單克隆抗體(1∶400)、小鼠抗大鼠OX-42(1∶400)或小鼠抗大鼠膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)單克隆抗體(1∶400)置于I抗稀釋液中混合，4 ℃孵育過(guò)夜；沖洗后再加入稀釋后的混合 II 抗50 μL：Cy3標(biāo)記的羊抗兔熒光II抗(1∶400)和FITC標(biāo)記的羊抗小鼠熒光II抗(1∶400)。室溫于暗盒中避光孵育2 h，甘油緩沖液封片置于暗玻片盒中。Olympus熒光顯微鏡下觀察并照相。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SEM)表示。組間均數(shù)比較采用SNK-q檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 瘦素拮抗劑抑制慢性嗎啡處理對(duì)大鼠脊髓p-Akt蛋白水平的上調(diào)作用

圖1顯示，在鞘內(nèi)連續(xù)7 d注射嗎啡(15 μg/d)可明顯上調(diào)大鼠脊髓p-Akt的蛋白水平，與注射生理鹽水組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)；但是在嗎啡注射前30 min，鞘內(nèi)連續(xù)7 d注射3 μg LA顯著抑制慢性嗎啡處理對(duì)脊髓p-Akt蛋白水平的上調(diào)作用(P<0.05)。而單獨(dú)鞘內(nèi)注射LA 7 d對(duì)p-Akt的基礎(chǔ)水平無(wú)明顯影響。

Figure 1.Leptin antagonist (LA) attenuated chronic morphine (Mor)-induced upregulation of spinal protein level of phosphorylated (p)-Akt in the rats. Mean±SEM.n=3.*P<0.05vsNS group;#P<0.05vsNS+Mor group.

圖1 瘦素拮抗劑抑制慢性嗎啡處理對(duì)大鼠脊髓磷酸化Akt表達(dá)的上調(diào)作用

2 慢性嗎啡耐受大鼠脊髓p-Akt特異定位于神經(jīng)元

免疫熒光雙染法可確定p-Akt陽(yáng)性的細(xì)胞類型。使用GFAP(綠色熒光)作為星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物，OX-42(綠色熒光)作為小膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物，Neu(綠色熒光)作為神經(jīng)元的標(biāo)志物。免疫熒光雙染結(jié)果顯示，p-Akt(紅色熒光)僅定位于脊髓神經(jīng)元，在星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞均未見(jiàn)p-Akt的熒光信號(hào),見(jiàn)圖2。

3 瘦素拮抗劑抑制慢性嗎啡處理對(duì)脊髓cleaved caspase-3蛋白水平的上調(diào)作用

圖3顯示，鞘內(nèi)連續(xù)7 d注射嗎啡顯著增加大鼠脊髓cleaved caspase-3(反映caspase-3被激活)的蛋白水平，與注射生理鹽水組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。然而，在注射嗎啡前30 min，鞘內(nèi)連續(xù)7 d注射LA明顯減弱了慢性嗎啡處理對(duì)脊髓cleaved caspase-3蛋白水平的促進(jìn)作用，與嗎啡耐受組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。而單獨(dú)鞘內(nèi)注射LA 7 d對(duì)脊髓cleaved caspase-3的基礎(chǔ)水平無(wú)明顯作用。

Figure 2.The p-Akt was exclusively observed in the spinal neurons in the chronic morphine-treated rats. GFAP as an astrocyte marker; OX-42 as a microglia marker; Neu as a neuron marker. The scale bar=50 μm.

圖2 慢性嗎啡耐受大鼠脊髓p-Akt僅表達(dá)于神經(jīng)元

Figure 3.Leptin antagonist (LA) ameliorated chronic morphine (Mor)-induced an increase in spinal protein level of cleaved caspase-3 in the rats. Mean±SEM.n=3.*P<0.05vsNS group;#P<0.05vsNS+Mor group.

圖3 瘦素拮抗劑減弱慢性嗎啡處理對(duì)大鼠脊髓cleaved caspase-3蛋白水平上調(diào)的促進(jìn)作用

4 Cleaved caspase-3特異定位于脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞

圖4結(jié)果顯示，在慢性嗎啡處理的大鼠，cleaved caspase-3(紅色熒光)只定位于脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞，在小膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元未見(jiàn)cleaved caspase-3的熒光信號(hào)。

Figure 4.The cleaved caspase-3 was exclusively observed in the spinal astrocytes in the chronic morphine-treated rats. GFAP as an astrocyte marker; OX-42 as a microglia marker; Neu as a neuron marker. The scale bar=50 μm.

圖4 慢性嗎啡處理大鼠脊髓cleaved caspase-3僅定位于星形膠質(zhì)細(xì)胞

5 瘦素拮抗劑、Akt抑制劑及caspase-3抑制劑減輕大鼠慢性嗎啡鎮(zhèn)痛耐受

疼痛行為學(xué)的檢測(cè)結(jié)果顯示，第1天給予大鼠鞘內(nèi)注射嗎啡可產(chǎn)生明顯的鎮(zhèn)痛作用[%MPE=(99.65±1.60)%]，與注射生理鹽水組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。在連續(xù)鞘內(nèi)注射嗎啡期間，從第3天開(kāi)始，嗎啡鎮(zhèn)痛作用明顯減弱，%MPE降至(73.34±3.95)%，與第1天的作用比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)，表明嗎啡鎮(zhèn)痛耐受開(kāi)始形成。隨著注射嗎啡的時(shí)間延長(zhǎng)，注射嗎啡的第5天和第7天的鎮(zhèn)痛作用進(jìn)一步減弱，其中注射嗎啡第7天的%MPE已降至(16.57±2.18)%，與注射嗎啡第1、3和5天的鎮(zhèn)痛作用分別比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。上述結(jié)果表明，鞘內(nèi)連續(xù)7天注射嗎啡已導(dǎo)致大鼠產(chǎn)生嗎啡鎮(zhèn)痛耐受。

Figure 5.The inhibitory effects of intrathecal injection of leptin antagonist (LA), Akt inhibitor (LY) and caspase-3 inhibitor (Ac) on chronic morphine (Mor) antinociceptive tolerance in rats. Mean±SEM.n=6.*P<0.05vsNS+Mor group;#P<0.05vsNS group.

圖5 鞘內(nèi)注射瘦素拮抗劑、Akt抑制劑和caspase-3抑制劑對(duì)慢性嗎啡鎮(zhèn)痛耐受的抑制作用

重要的是，在注射嗎啡前30 min，鞘內(nèi)分別連續(xù)7 d注射瘦素拮抗劑(3 μg)或Akt抑制劑(5 mmol/L)或caspase-3抑制劑(5 μg)均能明顯地減輕大鼠慢性嗎啡鎮(zhèn)痛耐受，其中注射的第5天，%MPE從(38.09±5.96)%分別增加至(66.27±3.90)%、(60.77±7.22)%和(66.46±8.20)%。注射的第7 d，%MPE從(16.57±2.18)%分別增加至(54.29±5.83)%、(49.53±6.43)%和(58.92±6.11)%。而單獨(dú)鞘內(nèi)分別注射LA、LY、Ac或生理鹽水均不影響大鼠的基礎(chǔ)痛閾。

討 論

嗎啡是一種臨床上常被用于治療急性和慢性疼痛的阿片類藥物。然而，長(zhǎng)期持續(xù)應(yīng)用嗎啡會(huì)產(chǎn)生嗎啡鎮(zhèn)痛耐受，表現(xiàn)為嗎啡的鎮(zhèn)痛作用逐漸減弱，甚至產(chǎn)生痛覺(jué)過(guò)敏，因此，限制了嗎啡的臨床應(yīng)用。目前，深入探討嗎啡鎮(zhèn)痛耐受機(jī)制已成為鎮(zhèn)痛原理的一個(gè)重要課題。

越來(lái)越多的研究證實(shí)，引起嗎啡鎮(zhèn)痛耐受的分子機(jī)制和細(xì)胞機(jī)制是復(fù)雜的，涉及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的多個(gè)部位，如海馬、脊髓等；涉及多種細(xì)胞，如神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞等；涉及多種受體，如阿片受體、NMDA受體等；涉及多種信號(hào)通路。近年來(lái)我們已證實(shí)大鼠脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞的p38絲裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)通路[7]、NMDA-JNK通路[8]及瘦素-STAT3通路[2]參與嗎啡鎮(zhèn)痛耐受。瘦素是一種主要由脂肪組織分泌的多肽激素，隨血循環(huán)到達(dá)全身多系統(tǒng)發(fā)揮其生理及病理生理作用[9]。我們最近證實(shí)，瘦素及其受體可在大鼠脊髓背角及背根節(jié)中表達(dá)，而且，慢性嗎啡處理可促進(jìn)它們的表達(dá)[2]。但是，一些受嗎啡處理調(diào)控的信號(hào)分子，如Akt和cleaved caspase-3是否參與瘦素介導(dǎo)的嗎啡鎮(zhèn)痛耐受，迄今未見(jiàn)報(bào)道。Akt是瘦素靶通路PI3K通路的一個(gè)下游激酶，參與病理性神經(jīng)痛的發(fā)生[10]。急性嗎啡處理(只注射1次)可上調(diào)大鼠伏核p-Akt的水平[11]?；谶@些研究基礎(chǔ)，本研究推測(cè)，Akt可能參與瘦素介導(dǎo)的慢性嗎啡鎮(zhèn)痛耐受。研究結(jié)果表明，鞘內(nèi)慢性嗎啡注射可明顯促進(jìn)大鼠脊髓背角神經(jīng)元p-Akt蛋白水平的上調(diào)；瘦素拮抗劑能抑制慢性嗎啡處理對(duì)p-Akt的上調(diào)作用，提示Akt通路位于瘦素的下游。進(jìn)一步的研究證實(shí)，Akt抑制劑能抑制慢性嗎啡鎮(zhèn)痛耐受，表明脊髓Akt通路參與慢性嗎啡鎮(zhèn)痛耐受的發(fā)生。上述結(jié)果表明，通過(guò)激活A(yù)kt通路可能是瘦素介導(dǎo)慢性嗎啡鎮(zhèn)痛耐受的作用機(jī)制之一。

另一方面，本研究探討了脊髓凋亡信號(hào)分子cleaved caspase-3在瘦素介導(dǎo)嗎啡鎮(zhèn)痛耐受中的作用。有報(bào)道稱慢性嗎啡處理能激活大鼠脊髓的caspase-3，caspase-3的抑制劑能減輕嗎啡鎮(zhèn)痛耐受[5-6]。與他們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致，本研究證實(shí)，鞘內(nèi)連續(xù)7 d注射嗎啡可明顯地促進(jìn)cleaved caspase-3的蛋白水平的上調(diào)，而且，cleaved caspase-3僅定位于大鼠脊髓背角的星形膠質(zhì)細(xì)胞。Caspase-3抑制劑(Ac)能明顯地減輕大鼠慢性嗎啡鎮(zhèn)痛耐受。有意義的是，我們證實(shí)瘦素拮抗劑能顯著地抑制慢性嗎啡處理對(duì)cleaved caspase-3的上調(diào)作用，提示cleaved caspase-3是瘦素的一個(gè)下游靶分子，瘦素可通過(guò)激活caspase-3引起大鼠嗎啡鎮(zhèn)痛耐受。由于有研究指出，慢性嗎啡處理可激活脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞[12-14]。因此，今后進(jìn)一步探討在嗎啡鎮(zhèn)痛耐受中，活化的caspase-3與星形膠質(zhì)細(xì)胞活動(dòng)的相互關(guān)系將有助于深入闡明慢性嗎啡鎮(zhèn)痛耐受的病理生理機(jī)制。

綜上所述，本研究清晰地證實(shí)脊髓的Akt通路及cleaved caspase-3參與瘦素介導(dǎo)的大鼠慢性嗎啡鎮(zhèn)痛耐受，有可能是嗎啡鎮(zhèn)痛耐受的一個(gè)新穎的病理生理機(jī)制。

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(責(zé)任編輯： 陳妙玲， 羅 森)

Roles of Akt pathway and cell apoptosis in leptin-mediated chronic morphine antinociceptive tolerance

HU Fen1, CUI Yu2, GUO Rui-xian2, MO Li-qiu3, FENG Jian-qiang2

(1DepartmentofPathology,FirstAffiliatedHospital,2DepartmentofPhysiology,ZhongshanMedicalSchool,SunYat-senUniversity,Guangzhou510080,China;3DepartmentofAnesthesiology,HuangpuArea,FirstAffiliatedHospital,SunYat-senUniversity,Guangzhou510700,China.E-mail:fengjq-sums@163.com)

AIM: To explore the roles of Akt (also called protein kinase B) and active caspase-3 in the leptin-mediated chronic morphine antinociceptive tolerance in rats. METHODS: A model of chronic morphine antinociceptive tolerance was established in the SD rats. The protein levels of spinal Akt and cleaved caspase-3 were tested by Western blotting. The technique of immunohistochemical staining was used to detect the immunoreactivity positive cells of phosphorylated (p)-Akt and cleaved caspase-3 in the spinal cord. Double staining of immunohistochemistry was used to examine the cellular location of the p-Akt and cleaved caspase-3 positive cells. RESULTS: The chronic intrathecal injection of morphine (15 μg) for 7 d markedly upregulated the spinal protein levels of p-Akt and cleaved caspase-3 in the rats. Thirty min before injection of morphine, intrathecal injection of leptin antagonist (3 μg) for 7 d significantly attenuated the upregulation of the protein levels of p-Akt and cleaved caspase-3 induced by chronic morphine treatment. The p-Akt was exclusively observed in the spinal neurons. The cleaved caspase-3 was only localized with the spinal astrocytes. Intrathecal injecting the inhibitors of leptin, Akt and caspase-3 ameliorated the chronic antinociceptive tolerance. CONCLUSION: The spinal Akt pathway and active caspase-3 are involved in the leptin-mediated chronic morphine antinociceptive tolerance in rats.

Leptin; Akt; Caspase-3; Morphine antinociceptive tolerance

1000- 4718(2016)12- 2163- 05

2016- 04- 29

2016- 08- 18

廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究基金資助項(xiàng)目(No.A2015415)

R363

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.12.007

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