艾司奧美拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)的反相—HPLC法測定

摘 要：艾司奧美拉唑為一種質(zhì)子泵抑制劑，在治療消化系統(tǒng)相關(guān)疾病方面取得良好的效果。艾司奧美拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)的檢測（包含7個已知雜質(zhì)）采用高效液相色譜法測定，文章對該方法進行簡單的闡述。色譜柱為Agilent Eclipse C18柱（100×4.6mm，3um），乙腈：磷酸鹽緩沖液（pH7.6）：水=80：10：10；流動相B：乙腈：磷酸鹽緩沖液（pH7.6）：水=80：1：19，流速為0.9ml/min，檢測波長為280nm，柱溫30℃，進樣量20μL。結(jié)論：該方法準確可靠，簡便，靈敏，專屬性強，重復(fù)性好，可用于艾司奧美拉唑鈉原料藥的有關(guān)物質(zhì)測定。

關(guān)鍵詞：艾司奧美拉唑鈉；HPLC；有關(guān)物質(zhì)測定

艾司奧美拉唑鈉的中文名是5-甲氧基-2-（（S）-（（4-甲氧基-3，5-二甲基-2-吡啶基）甲基）亞磺?；?1H-苯并咪唑鈉。艾司奧美拉唑是奧美拉唑單一的S異構(gòu)體。其口服后肝臟代謝率較低，血藥濃度和生物利用度比奧美拉唑或R-異構(gòu)體高[1]。艾司奧美拉唑為第一個上市的光學(xué)純質(zhì)子泵抑制劑[2]，應(yīng)用于臨床的10多年間，以其良好的療效和較低的不良反應(yīng)發(fā)生率低，得到臨床的廣泛應(yīng)用和人們越來越多的關(guān)注。艾司奧美拉唑鈉的有關(guān)物質(zhì)檢測已有文獻報道[3-4]，但文中主要對含量測定及4個已知雜質(zhì)進行了方法學(xué)驗證。文章詳細研究了7個已知雜質(zhì)的有關(guān)物質(zhì)HPLC測定方法，對測定方法進行相關(guān)的分析方法學(xué)研究。結(jié)果表明，該方法操作簡單，靈敏度高，專屬性強，重復(fù)性好，可以很好的控制艾司奧美拉唑鈉的質(zhì)量。

1 色譜條件

流動相A：乙腈：磷酸鹽緩沖液（pH7.6）：水=20：10：70；流動相B：乙腈：磷酸鹽緩沖液（pH7.6）：水=80：10：10；磷酸鹽緩沖液（pH7.6）：每1L中含磷酸二氫鈉0.0052mol和磷酸氫二鈉0.032mol的溶液。

檢測波長：λ=280nm；柱溫：25℃；樣品室溫度：6℃；流速：0.9ml/min；進樣量：20ul，色譜柱：Agilent Eclipse C18，100×4.6mm，

3um。

2 溶液配制

2.1 系統(tǒng)適用性溶液

分別稱取雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)Cg、雜質(zhì)D、雜質(zhì)E約、雜質(zhì)G、雜質(zhì)H各約1mg，置同一50ml量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度。稱取艾司奧美拉唑鈉2mg至10ml容量瓶，移取上述系統(tǒng)適用性儲備液1ml至同一10ml量瓶中，用溶劑溶解稀釋至刻度，搖勻。

2.2 供試品溶液的配制

取艾司奧美拉唑鈉樣品20mg，精密稱定，置100ml的量瓶中，加入乙腈10ml使溶解，加磷酸鹽緩沖液（pH7.6）10ml，用水稀釋至刻度溶解，搖勻。

3 方法驗證

3.1 系統(tǒng)適用性實驗

取溶劑、系統(tǒng)適用性溶液20ul注入色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果如下：雜質(zhì)H、雜質(zhì)A、雜質(zhì)E、雜質(zhì)D、雜質(zhì)B、艾司奧美拉唑、雜質(zhì)G、雜質(zhì)C依次出峰，相鄰峰之間的最小分離度為2.68，符合實驗要求。

3.2 選擇性

3.2.1 溶液配制。稱取雜質(zhì)H、雜質(zhì)A、雜質(zhì)E、雜質(zhì)D、雜質(zhì)B、艾司奧美拉唑鈉、雜質(zhì)G、雜質(zhì)C各約20mg置100ml的量瓶中，加溶劑溶解、定容、搖勻，作為選擇性實驗溶液。移取上述選擇性溶液各1ml置100ml量瓶中，加溶劑定容、搖勻，作為1%混合溶液。取艾司奧美拉唑鈉樣品20mg，精密稱定，置100ml的量瓶中，移取除艾司奧美拉唑鈉外的選擇性溶液各1ml置該100ml量瓶中，加溶劑定容、搖勻，作為加樣混合溶液。

3.2.2 分析。依次進溶劑及3.2.1配制的溶液，記錄色譜圖。雜質(zhì)H、雜質(zhì)A、雜質(zhì)E、雜質(zhì)D、雜質(zhì)B、艾司奧美拉唑鈉、雜質(zhì)G、雜質(zhì)C都有出峰，具有很好的分離效果，峰純度符合規(guī)定，各雜質(zhì)不干擾結(jié)果測定。

3.3 精密度

3.3.1 系統(tǒng)精密度。取20ul的供試品溶液注入色譜儀，記錄色譜圖，連續(xù)進樣六次，主峰峰面積RSD為1.26%。

3.3.2 方法精密度。配制雜質(zhì)H、雜質(zhì)A、雜質(zhì)E、雜質(zhì)D、雜質(zhì)B、雜質(zhì)G、雜質(zhì)C混合溶液（各雜質(zhì)稱取20mg置同一100ml量瓶中），稱取艾司奧美拉唑鈉六份，每份20mg置100ml量瓶中，加1ml雜質(zhì)混合溶液，加溶劑溶解并定容、搖勻。每份進兩針，計算各雜質(zhì)的含量，總共12針每種雜質(zhì)的含量RSD均<30%，符合實驗要求。

3.4 檢測限與定量限

以溶劑為空白，連續(xù)進樣三次，按信噪比10：1的要求，配制溶液，進樣三次，計算定量限。按信噪比3：1的要求，配制溶液，進樣三次，計算檢測。測得各樣品檢測限與定量限結(jié)果見表2。

3.5 線性

線性范圍確認：包括定量限、0.05%、0.1%、0.2%、0.5%。各濃度點（定量限→0.5%）各取20ul，進樣3次。以濃度（ug/ml）為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，r應(yīng)>0.999，所得回歸方程（n=5）及線性范圍見表2。結(jié)果顯示，各樣品溶液均有良好的線性關(guān)系。

3.6 準確度

稱取艾司奧美拉唑鈉約20mg16份置100ml量瓶中，配制成原始溶液、含各雜質(zhì)定量限濃度溶液、含各雜質(zhì)0.1%濃度溶液和含各雜質(zhì)0.2%濃度溶液各三份，每份進樣1針。按定量測定方法，計算加入雜質(zhì)的回收率，結(jié)果三份平均回收率均在95.0%～105.0%之間。

3.7 方法耐用性

為了研究不同的柱溫度、不同的流速、流動相中有機相比例改變，對檢測的影響。要求：分離度符合規(guī)定，雜質(zhì)含量與未改條件之前的含量RSD≤30%。樣品溶液配制方法同“3.3.2方法精密度”。柱溫度改為25±2℃；流速改為0.9±0.2ml/min；有機相的比例修改條件為±5%。每次實驗均改變一個項目，其余條件不變。結(jié)果顯示，改變條件后各相鄰峰之間的分離度符合實驗要求，雜質(zhì)含量與未改條件之前的含量RSD均≤30%，符合實驗要求。

3.8 溶液穩(wěn)定性

配制供試品溶液，放置在高效液相色譜儀儀的進樣器中，樣品室溫度為6℃，分別與0、2、4、6、8h進樣。雜質(zhì)A含量從0h0.01%、2h0.02%、4h0.03%、8h0.06%，增幅在4h時就達到了20%，其余雜質(zhì)峰面積在8h才發(fā)生明顯變化，說明溶液2h內(nèi)穩(wěn)定，超過2h雜質(zhì)A含量明顯增加，繼續(xù)檢測導(dǎo)致檢測結(jié)果不真實。表明檢測艾司奧美拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)時應(yīng)臨時配制，現(xiàn)配現(xiàn)用。

4 結(jié)束語

綜上，選擇性、精密度、定量限、檢測限、線性范圍、回收率、方法耐用性均符合實驗要求。此外，在溶液穩(wěn)性試驗中發(fā)現(xiàn)，艾司奧美拉唑鈉溶液放置超過2h將會造成雜質(zhì)H的含量增加，說明其穩(wěn)定性差。為確定穩(wěn)定性狀況，需進行強降解實驗，并在穩(wěn)定性考察時特別注意，進而給貯藏艾司奧美拉唑鈉提供依據(jù)，文章不對強降解實驗結(jié)果進行闡述。

參考文獻

[1]代小松，韓盛璽.埃索美拉唑——質(zhì)子泵抑制劑的新成員[J].華西藥學(xué)雜志，2007，22（3）：356-357.

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[3]胡曉，唐小海，謝永美.RP-HPLC法測定S-奧美拉唑鈉及其有關(guān)物質(zhì)的含量[J].中國藥房，2009，20（22）：1744.

[4]李婷婷，鄭子棟.RP-HPLC法測定埃索美拉唑鈉的有關(guān)物質(zhì)[J].藥物分析雜質(zhì)，chin J Pharm Anal ，2013，33（4）.