薜荔中的總黃酮含量測定研究

摘要：采用超聲提取技術(shù)對薜荔（Ficus pumila L.）葉、薜荔殼和薜荔子中的總黃酮含量進行了測定。以亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉為試劑，蘆丁為對照，溶液濃度在10～50 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為y=0.519 9x+0.002 9，相關(guān)系數(shù)為0.999 9。在合適的提取條件下，測得薜荔葉、薜荔殼和薜荔子中總黃酮提取率分別為7.05%、3.94%和2.54%。結(jié)果表明，薜荔葉中的總黃酮含量明顯高于在薜荔殼和薜荔子中的，對薜荔黃酮的提取具有一定的借鑒作用。

關(guān)鍵詞：薜荔（Ficus pumila L.）；總黃酮；超聲提?。惶J丁

中圖分類號：S789.2；Q946.4 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）14-3727-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.14.047

Abstract： Ultrasonic extraction is used to determine the total flavonoids content in leaf，shell and seeds of Ficus pumila L.. Sodium nitrite， aluminum nitrate and sodium hydroxide are used as reaction reagents， and rutin is used as standard substance. The concentration from 10 to 50 μg/mL has good linear relationship. The linear regression equation is y=0.519 9x+0.002 9， and the correlation coefficient is 0.999 9. Under optimum conditions， the obtaining rates of the total flavonoids measured are 7.05%，3.94% and 2.54% in leaf，shell and seeds of Ficus pumila L. respectively. The results show that the content of flavonoids in leaf is significantly higher than those in shells and seeds. This offers references for corresponding research about the flavonoids’ extraction of Ficus pumila L.

Key words： Ficus pumila L.； total flavonoids； ultrasonic extraction； rutin

薜荔（Ficus pumila L.）是?？崎艑僦参颷1]，主要產(chǎn)自中國，其野生資源極為豐富，生長不擇土壤、氣候，耐干旱，極易種植，是一種很有開發(fā)潛力的安全、健康性新型天然植物資源。薜荔含有豐富的黃酮類物質(zhì)，廣泛分布在薜荔的葉、種子等部位[2，3]。黃酮類化合物是一類生理活性較強的化合物，具有抗動脈硬化、降膽固醇、抗菌、抗炎、增強免疫、抗腫瘤等作用[4，5]。薜荔中總黃酮的提取研究對薜荔的開發(fā)具有非常重要的意義，吳文珊等[6，7]用傳統(tǒng)的回流提取法對薜荔葉及花序托中的總黃酮含量進行了測定，并對影響因素進行了探討，取得了較好的試驗結(jié)果，但是存在耗時長、步驟繁瑣等缺點。

超聲波提取是利用超聲波具有的機械、空化和熱效應(yīng)，通過增大介質(zhì)分子的運動速度與介質(zhì)穿透力以提取生物有效成分[8，9]，具有提取時間短、提高活性成分提取率、節(jié)約能源、避免高溫對成分的影響等優(yōu)點[10]。本研究在前人工作的基礎(chǔ)上，探索提取的優(yōu)化工藝，選取了超聲提取技術(shù)對薜荔葉、薜荔殼和薜荔子中的總黃酮含量進行了測定。結(jié)果表明，薜荔葉中總黃酮含量明顯高于在薜荔殼和薜荔子中的，為薜荔黃酮進一步開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

材料：薜荔果采集于湖南省永州市祁陽縣肖家村鎮(zhèn)八廟村，薜荔葉采集于湖南生物機電職業(yè)技術(shù)學(xué)院藤本研究基地，樣品均經(jīng)湖南生物機電職業(yè)技術(shù)學(xué)院藤本所專家進行鑒定。

試劑：蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（上海源葉生物科技有限公司），亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉等所有試劑均為分析純，所用水為蒸餾水。標(biāo)準(zhǔn)儲備液及由其稀釋而成的標(biāo)準(zhǔn)溶液均置于4 ℃冰箱中保存。

標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確稱取蘆丁10 mg，用無水乙醇溶解，定容至10 mL（濃度為1 mg/mL），置于4 ℃冰箱中保存。標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確移取2.5 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用60%乙醇稀釋至25 mL（濃度為100 μg/mL），置于4 ℃冰箱中保存。

儀器：752型紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司），HH-600型數(shù)顯三用恒溫水浴箱（無錫沃信儀器有限公司），KQ-100E型超聲波（昆山市超聲儀器有限公司），回流裝置（北玻實驗室玻璃儀器），F(xiàn)W177型中草藥粉碎機（上海隆拓儀器設(shè)備有限公司），SHA-D（Ш）循環(huán)式真空泵、RE-52C型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）。

1.2 方法

以薜荔葉和薜荔子為材料，考察了回流提取法和超聲提取法對薜荔總黃酮提取效率的影響。

1.2.1 回流提取法提取薜荔中的總黃酮

1）薜荔葉的提取。將新鮮采取的薜荔葉于70 ℃烘箱中干燥，粉碎，過40目篩。稱取干粉1.00 g，加入60%乙醇定容至100 mL，浸提1 h，在75 ℃水浴回流4 h。趁熱過濾，濾液冷卻至室溫，減壓回收乙醇，用60%乙醇定容至100 mL。

2）薜荔子的提取。將新鮮摘取的薜荔果切成小塊，將果殼和薜荔子分離，薜荔子置于70 ℃烘箱中烘干，粉碎，過40目篩。稱取干粉1.00 g，加入60%乙醇定容至100 mL，浸提1 h，在75 ℃水浴回流4 h。趁熱過濾，濾液冷卻至室溫，減壓回收乙醇，用60%乙醇定容至100 mL。

1.2.2 超聲提取法提取薜荔中的總黃酮

1）薜荔葉的提取。將新鮮采取的薜荔葉于70 ℃烘箱中干燥，粉碎，過40目篩。稱取干粉1.00 g，加入60%乙醇定容至100 mL，浸提1 h，在75 ℃超聲2 h。超聲頻率為40 kHz，超聲功率為100 W。趁熱過濾，濾液冷卻至室溫用60%乙醇定容至100 mL。

2）薜荔子的提取。將新鮮摘取的薜荔果切成小塊，將果殼和薜荔子分離，薜荔子置于70 ℃烘箱中烘干，粉碎，過40目篩。稱取干粉1.00 g，加入60%乙醇定容至100 mL，浸提1 h，在75 ℃超聲2 h。超聲頻率為40 kHz，超聲功率為100 W。趁熱過濾，濾液冷卻至室溫用60%乙醇定容至100 mL。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取6個25 mL容量瓶，按表1依次加入試劑，注意每加入一種試劑時需要充分搖勻，并靜置1 min。最后在室溫下放置10 min，于510 nm波長處測定吸光度。

1.2.4 樣品液的測定 分別準(zhǔn)確吸取適量樣液于3個25 mL容量瓶中（具體根據(jù)吸光度確定），按上述方法依次各加入0.75 mL 5%NaNO2溶液、0.75 mL 10%Al（NO3）3溶液和10 mL 1% NaOH溶液，用60%乙醇定容，搖勻，放置10 min，同時作試劑空白；以試劑空白為對照，于510 nm波長處測定吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以試劑空白（無蘆丁對照品）作為空白對照，在 510 nm處測定吸光度。以總黃酮含量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程y=0.519 9x+0.002 9，相關(guān)系數(shù)r2=0.999 9，結(jié)果見圖1。結(jié)果表明，蘆丁質(zhì)量濃度在10～50 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.2 回流提取法和超聲提取法提取總黃酮含量結(jié)果比較

采用回流提取法對薜荔葉和薜荔子中的總黃酮進行提取和測定，結(jié)果見表2。采用超聲提取法對薜荔葉和薜荔子中的總黃酮進行提取測定，結(jié)果見表3。結(jié)果表明，超聲提取法提取效率明顯高于回流提取法，同時具有提取時間短、操作簡單等優(yōu)點，是較優(yōu)的提取技術(shù)。

2.3 超聲提取法對薜荔不同部位總黃酮含量測定

采用超聲提取法對對薜荔不同部位薜荔葉、薜荔殼和薜荔子中的總黃酮含量進行測定，結(jié)果見表4。結(jié)果表明，薜荔不同部位中總黃酮含量測定結(jié)果為薜荔葉>薜荔殼>薜荔子。

3 小結(jié)與結(jié)論

本研究表明，薜荔葉中的總黃酮含量明顯高于薜荔子和薜荔殼中的總黃酮含量。在相同料液比、提取溫度等條件下，通過對超聲提取和回流提取試驗結(jié)果進行比較，發(fā)現(xiàn)超聲提取時間短，且提取效率要明顯優(yōu)于回流提取。這是由于超聲提取主要通過空化作用使薜荔中的細(xì)胞壁加速破裂，加快了細(xì)胞中總黃酮類物質(zhì)向溶劑中溶解的速度，從而加快了黃酮類物質(zhì)的提取。

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