MISPE-HPLC檢測水產(chǎn)品5種丁香酚麻醉劑的殘留量

何洪健

黃 和1,2,3

高 平4

劉 亞1,2,3

蔣志紅1,2,3JIANG Zhi-hong1,2,3

曹湛慧1,2,3

(1. 廣東省水產(chǎn)品加工與安全重點實驗室，廣東 湛江 524088；2. 廣東普通高等學(xué)校水產(chǎn)品深加工重點實驗室，廣東湛江 524088；3. 廣東海洋大學(xué)食品科技學(xué)院，廣東 湛江 524088；4. 湛江市食品藥品檢驗所，廣東 湛江 524022)

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MISPE-HPLC檢測水產(chǎn)品5種丁香酚麻醉劑的殘留量

何洪健1,2,3

黃 和1,2,3

高 平4

劉 亞1,2,3

蔣志紅1,2,3JIANGZhi-hong1,2,3

曹湛慧1,2,3

(1. 廣東省水產(chǎn)品加工與安全重點實驗室，廣東 湛江 524088；2. 廣東普通高等學(xué)校水產(chǎn)品深加工重點實驗室，廣東湛江 524088；3. 廣東海洋大學(xué)食品科技學(xué)院，廣東 湛江 524088；4. 湛江市食品藥品檢驗所，廣東 湛江 524022)

釆用分子印跡固相萃取結(jié)合高效液相色譜法，建立檢測水產(chǎn)品中5種丁香酚類麻醉劑殘留的方法。分別使用丁香酚、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯作為模板分子、功能單體和交聯(lián)劑，采用本體聚合法制備合成分子印跡聚合物并制成萃取柱。通過響應(yīng)面分析法得出模板分子、功能單體、交聯(lián)劑的最佳比例1∶4.55∶23.21；樣品溶劑選擇甲醇能使5種丁香酚類化合物回收率達到90%；洗脫劑選擇9∶1的甲醇∶乙酸溶液能夠使5種丁香酚類化合物回收率達90%以上；該方法的線性范圍均為 0.05～10 μg/mL，相關(guān)系數(shù)為 0.999 83～0.999 97，具有較好的線性關(guān)系；5種丁香酚類麻醉劑的定量限為0.05 mg/kg。該方法對樣品的回收率為82.04%～99.29%，RSD為0.06%～3.96%。所建立的方法具有簡單便于操作、準確快速、操作可行性高、有機溶劑耗量少等特點，可用于水產(chǎn)品中5種丁香酚類麻醉劑殘留的測定。

分子印跡聚合物；分子印跡固相萃取；高效液相色譜法；水產(chǎn)品；丁香酚類麻醉劑

分子印跡技術(shù)(molecular imprinting technique，MIT)是指為獲得在空間結(jié)構(gòu)和結(jié)合位點上與某一目標化合物(模板分子或印跡分子)完全匹配的高分子聚合物的制備技術(shù)，由于具有特異識別性、構(gòu)預(yù)性和廣泛適用性三大優(yōu)勢，被廣泛運用于醫(yī)藥、食品科學(xué)和環(huán)境等領(lǐng)域[1]。分子印跡聚合物(Molecularly imprinte polyers，MIPs)是人工合成的，對特定分子具有特異選擇性的聚合物，MIPs的制備和應(yīng)用是分子印跡技術(shù)的核心。分子印跡固相萃取(molecular imprinted soild phase extraction，MISPE)與傳統(tǒng)的固相萃取相比，利用MIPs的特性選擇性，將其用于高效液相(high performance liquid chromatography，HPLC)色譜固定相具有廣泛的應(yīng)用前景，既可拆分手性物質(zhì)，也可分離常規(guī)固定相難以分離的相似物；既可應(yīng)用于定性定量分析，也可用于制備性分離[2]。

丁香酚類化合物作為鮮活水產(chǎn)品的麻醉劑的安全性一直受質(zhì)疑。美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)也禁止丁香酚化合物作為活鮮食用水產(chǎn)品的麻醉劑和鎮(zhèn)定劑；有些國家如澳大利亞、新西蘭、智利等也嚴格規(guī)定了其休藥期和殘留量。而中國至今并沒有相關(guān)部門正式審批丁香酚類漁用麻醉劑應(yīng)用于水產(chǎn)品中的規(guī)定。因此，亟需建立水產(chǎn)品中多種丁香酚類化合物的高效、準確的樣品前處理方法和儀器定量、驗證方法。

現(xiàn)階段，中國檢測丁香酚類化合物的方法有高效液相色譜法[3-5]、液質(zhì)聯(lián)用[6-8]、氣相色譜法[9]、氣質(zhì)聯(lián)用[10]、熒光光譜法[11]、毛細管電泳高頻電導(dǎo)法[12]、紫外分光光度法[13]等，前處理主要有微波輔助萃取、分散固相萃取[14]等，這些方法的不足之處主要對含有多種丁香酚類化合物的基質(zhì)樣品和復(fù)雜的基質(zhì)樣品檢測還有一定的困難。本試驗擬釆用分子印跡固相萃取技術(shù)和高效液相色譜法，建立一種檢測水產(chǎn)品中5種丁香酚類麻醉劑殘留的方法，對MIPs的制備以及其固相萃取的重要因素(模板分子、功能單體、交聯(lián)劑、萃取洗脫劑、淋洗劑等)進行合理系統(tǒng)的優(yōu)化，旨在為水產(chǎn)品中丁香酚類麻醉劑的檢測提供試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料與試劑

南美白對蝦、石斑魚、鱖魚：湛江市霞山區(qū)昌大昌超市；

丁香酚標準品(CAS號：97-53-0)、異丁香酚標準品(CAS號：97-54-1)、甲基丁香酚標準品(CAS號：93-15-2)、甲基異丁香酚標準品(CAS號：93-16-3)、乙?；惗∠惴訕藴势?CAS號：93-29-8)：純度在98%以上，成都艾科達化學(xué)試劑有限公司；

偶氮二異丁腈、乙二醇二甲基丙烯酸酯、α-甲基丙烯酸：分析純，成都艾科達化學(xué)試劑有限公司；

甲醇：色譜純，天津市四友精細化學(xué)品有限公司；

乙腈：色譜純，德國 Merch 公司。

1.1.2 主要儀器設(shè)備

高效液相色譜儀：1260型，美國Agilent 公司；

組織勻漿機：HR2860型，珠海飛利浦有限公司；

漩渦混合儀：XW-80A型，海門市其林貝爾儀器制造有限公司；

超聲波清洗器：HS-10260D型，北京天地首和科技發(fā)展有限公司；

紫外分光光度計：TU1901型，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;

電子分析天平：XS-205型，美國Mettler-Toledo公司；

超純水機：arium-611VF型，德國Sartorius公司；

氮吹儀：N-EVAP111型，美國Organomation公司；

數(shù)顯恒溫水浴鍋：HH-6型，常州國華儀器有限公司；

高速離心機：3-18K型，德國Sigma公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 分子印跡固相萃取柱的制備 分子印跡萃取柱制備流程是將模板分子(丁香酚)、功能單體(甲基丙烯酸)、交聯(lián)劑(乙二醇二甲基丙烯酸酯)按照一定的比例混合，振蕩搖勻后靜置30 min，然后加入1 mmol的引發(fā)劑偶氮二異丁腈(EGDMA)，超聲處理(800 W，5 min)，氮吹15 min后密封，恒溫振蕩水浴55 ℃，加熱24 h取出聚合物，研磨過篩，收集40～80 μm的顆粒。以甲醇—乙酸(體積比9∶1)混合溶劑為洗脫劑，使用索氏洗脫法洗脫40 h，改用甲醇洗脫8 h將乙酸洗掉，至洗脫液在分光光度計檢測不到丁香酚。非分子印跡聚合物與分子印跡聚合物制備流程相同，但未加模板分子。稱量200 mg聚合物置于裝有0.45 μm的篩板的2 mL 注射器中，壓實后再次壓入篩板。以乙腈和高純水作為淋洗劑淋洗萃取柱，真空抽干后備用。分別用3 mL高純水和乙腈加壓淋洗，再依次用2 mL甲醇—乙酸(體積比9∶1) 混合溶劑和高純水淋洗，真空泵抽干約2 min，備用。

1.2.2 樣品前處理 稱取5.00 g樣品，置于50 mL離心管中，加入15 mL提取溶劑甲醇溶液，渦旋振蕩混勻1 min，然后用超聲波清洗器超聲提取5 min，功率為800 W，放入高速離心機中9 500 r/min離心5 min，吸取上層清液，剩下的殘渣再用15 mL甲醇溶液按照上述步驟混勻、超聲、離心、吸取上清液，合并兩次上清液；以3 mL甲醇—乙酸(體積比9∶1)混合溶劑和超純水作為淋洗劑淋洗活化萃取柱，取30 mL待測樣品溶液以7～9 mL/min的流速過萃取柱，此后，加入3 mL的高純水進行淋洗并且用真空泵抽干，使用2 mL甲醇—乙酸(體積比9∶1)混合溶劑以0.5 mL/min的流速對萃取柱進行洗脫，收集洗脫液在40 ℃氮氣保護下吹干，加入1.0 mL流動相甲醇溶液溶解。再將上述溶液過0.22 μm的有機濾膜到進樣小瓶，供高效液相色譜分析。

1.2.3 響應(yīng)面試驗 在溫度為55 ℃，引發(fā)劑為1 mmol EGDMA，模板洗脫使用甲醇—乙酸(體積比9∶1)混合液進行索氏洗脫法洗脫，以回收率作為因變量，考察功能單體、模板分子以及交聯(lián)劑比例對丁香酚分子印跡聚合物效果的影響并找到最佳方案。

1.2.4 靜態(tài)吸附試驗 稱取200 mg的MIPS分別置于裝有25 mL質(zhì)量濃度在 0～30 mg/mL范圍丁香酚溶液的50 mL離心管中，渦旋振蕩5 min，以4 500 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，然后移入150 mL燒杯，置于搖床在25 ℃、61 r/min條件下振搖24 h，使用分光光度計檢測吸附后的濃度，并按式(1)計算吸附量，考察其吸附效果。

(1)

式中：

Q——聚合物在吸附平衡時的吸附量，mg/g；

C0——吸附溶液吸附前質(zhì)量濃度，mg/mL；

C——吸附溶液吸附后質(zhì)量濃度，mg/mL；

V——吸附溶液的體積，mL；

M——分子印跡聚合物的質(zhì)量，g。

1.2.5 分子印跡固相萃取柱的優(yōu)化 通過單因素試驗，考察不同樣品溶劑、洗脫劑、淋洗劑對分子印跡固相萃取的效果。

(1) 樣品溶劑對分子印跡固相萃取效果的影響：樣品加標濃度為5 mg/kg，采用甲醇、乙酸乙酯、乙腈等作為提取溶劑，按照1.2.2 的流程進行樣品處理，高效液相檢測并計算其回收率。

(2) 淋洗劑對分子印跡固相萃取效果的影響：樣品加標濃度為5 mg/kg，采用乙腈、甲醇、水作為淋洗液，按照1.2.2 的流程進行樣品處理，高效液相檢測并計算其回收率。

(3) 洗脫液對分子印跡固相萃取效果的影響：乙酸、甲醇、乙腈、氯仿以及甲醇—乙酸(體積比9∶1)混合液作為洗脫液，加標濃度為5 mg/kg，按照1.2.2 的流程進行樣品處理，高效液相檢測并計算其回收率。

1.2.6 高效液相色譜條件 色譜柱：C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫：35 ℃；流動相體積比：甲醇∶乙腈∶水=24∶24∶52；流速：1.0 mL/min；檢測器：紫外檢測器；檢測波長：280 nm；進樣量：20 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 分子印跡聚合物的制備

2.1.1 分子模板、功能單體、交聯(lián)劑比例的選擇 試驗中分子印跡聚合物采用本體聚合法作為制備的方法，在溫度為55 ℃、引發(fā)劑為1 mmol EGDMA的條件下，參照文獻[15]引入了多元變量分析技術(shù)考察各參數(shù)的最優(yōu)值，通過曲線響應(yīng)面法考察模板、單體以及交聯(lián)劑比例對分子印跡聚合物回收效果的影響。根據(jù)單因素優(yōu)化結(jié)果進行試驗因素水平的選取，使用Design-Expert軟件進行多響應(yīng)值的最優(yōu)條件選擇，試驗設(shè)計及結(jié)果見表1～3 。

以丁香酚的回收率作為響應(yīng)值，根據(jù)表3的結(jié)果分析，擬合回歸方程，剔除不顯著項得到各因子對回收率影響的回歸方程：

表1 響應(yīng)面分析因素與水平Table 1 The response surface analysis of factors and levels mmol

表2 響應(yīng)面分析方案及試驗結(jié)果Table 2 The response surface analysis and the experimental results

表3 回歸結(jié)果分析?Table 3 Regression result analysis

(2)

使用Design-Expert軟件進行多響應(yīng)值的最優(yōu)條件選擇，得到最佳聚合反應(yīng)條件為：模板分子0.92 mmol，功能單體4.23 mmol，交聯(lián)劑21.59 mmol，即三者最佳比例為1∶4.55∶23.21。

根據(jù)模板分子∶功能單體∶交聯(lián)劑=1∶4.55∶23.21，1 mmol模板分子、4.55 mmol功能單體、23.21 mmol交聯(lián)劑、1 mmol引發(fā)劑、15 mL二氯甲烷制備丁香酚分子印跡聚合物，用濃度為10 mg/kg的濃度丁香酚標準溶液進行過柱萃取，結(jié)果表明，丁香酚標準液回收率為98.28%，RSD為1.29%，說明該方案可行。

圖1 模板分子、功能單體以及交聯(lián)劑比例的結(jié)果示意圖

Figure 1 Template molecule and functional monomer and crosslinking agent proportion of results

2.1.2 分子印跡聚合物吸附效果的考察 借鑒袁列江等[16]對分子印跡聚合物吸附性能的考察方式，通過靜態(tài)吸附試驗考察分子印跡聚合物以及非分子印跡聚合物對丁香酚溶劑的吸附效果，試驗分別取濃度范圍為0～35 mg/mL的丁香酚溶液，考察相同濃度下兩種聚合物的不同吸附效果。由圖2可知，分子印跡聚合物的吸附量隨著丁香酚溶液濃度的增加而快速增大；而非分子印跡聚合物的吸附量增加平緩。在相同的丁香酚溶液濃度下，分子印跡聚合物的吸附量均大于非分子印跡聚合物的吸附量，這是因為在分子印跡聚合物中含有能夠與模板分子在特殊形狀、一定尺寸以及功能基團相匹配的三維空穴，使得MIPs對于模板分子丁香酚具有特異性結(jié)合的作用，因此MIPs吸附能力得到較大提高。另一方面則是非分子印跡聚合物是由功能單體的隨機聚合，對丁香酚類物質(zhì)沒有特異性吸附的能力，所以吸附能力相對較差。

圖2 兩種分子聚合物中的吸附效果圖

Figure 2 The adsorption effect of two kinds of molecular weight polymer

2.2 分子印跡固相萃取的優(yōu)化

2.2.1 樣品溶劑對吸附效果的影響 借鑒肖琴等[17]對分子印跡固相萃取優(yōu)化的方法，考察溶劑對回收率的影響。丁香酚、異丁香酚、甲基丁香酚、甲基異丁香酚、乙?；惗∠惴佣际侨苡跇O性的有機溶劑，根據(jù)文獻[18～19]，通常采用甲醇、乙酸乙酯、乙腈等作為提取溶劑。本試驗中考察甲醇、乙酸乙酯、乙腈作為樣品溶劑，結(jié)果(圖3)表明選擇乙酸乙酯作為樣品溶劑分子印跡萃取柱的吸附率最低，乙腈作為樣品溶劑吸附率在67.10%～88.13%，而甲醇標準溶液進行分子印跡固相萃取，對于5種溶質(zhì)的吸附率在87.03%～95.46%，可能是以丁香酚為模板分子，各種樣品溶劑中的丁香酚吸附率都相對較高。

圖3 不同樣品溶劑的吸附效果Figure 3 The effect of different sample solvents

2.2.2 淋洗液的選擇 本試驗考察乙腈、甲醇、水作為淋洗液，試驗中，提取加標濃度為5 mg/kg的石斑魚樣品，過柱，考察不同的淋洗液對回收率的影響。結(jié)果(表4)表明，乙腈、水作為淋洗液時回收率都能達到90%以上，而甲醇作為淋洗液回收率最低，根據(jù)進一步考察在淋洗過程中使用水和乙腈分別進行淋洗，可以在保證回收率的同時，最大限度去除雜質(zhì)，達到提純凈化的目的。

表4 不同淋洗液的淋洗效果Table 4 The effect of different leacheates (n=3)

2.2.3 洗脫劑種類的影響 洗脫溶劑能有效地從柱上解吸附，這對目標化合物的純化和富集具有很大的作用，因此，選擇適合的洗脫劑對萃取柱的萃取效果十分重要。本試驗主要考察乙酸、甲醇、乙腈、氯仿以及甲醇—乙酸(體積比9∶1)混合液作為洗脫劑對萃取柱洗脫效果的影響。由圖4可知，甲醇和甲醇—乙酸混合液的效果都比較好，但是甲醇—乙酸混合液效果相對較好，丁香酚、異丁香酚、甲基丁香酚、甲基異丁香酚、乙?；惗∠惴拥目偭糠謩e占分子跡固相萃取柱吸附總量的102.32%，98.46%，90.37%，91.97%，90.67%。出現(xiàn)這種情況主要是因為底物的鍵合作用較弱，使用甲醇做為洗脫劑能一定程度上防止聚合物在洗脫劑中溶脹、縮小，并且乙酸使得其酸度適度增加，這樣能使其與分析物的結(jié)合能力增強，因此，選用甲醇—乙酸(體積比9∶1)混合液作為洗脫劑。

2.3 分子印跡固相萃取柱對樣品凈化和檢測效果

分別使用C18柱、MISPE柱對石斑魚加標濃度為1.20 mg/kg樣品溶液進行萃取，過濾膜進樣。由圖5、6可知，經(jīng)C18柱萃取后石斑魚樣品色譜圖雜峰較多，富集凈化作用不明顯，而經(jīng)MISPE柱萃取的石斑魚樣品色譜圖雜峰較少，峰形較好，基線噪音較少。由表5可知，C18柱與MISPE柱的萃取平均回收率分別為91.82%、54.47%，MISPE柱回收率相當于C18柱的兩倍左右。出現(xiàn)這種現(xiàn)狀的主要原因是MISPE柱對丁香酚類化合物具有特異性結(jié)合的功能，對其凈化和富集效果明顯，能有效地用于水產(chǎn)品中的丁香酚類麻醉劑的測定。

圖4 不同洗脫劑的洗脫效果Figure 4 The effect of different eluents表5 不同萃取柱的凈化效果Table 5 Extraction effects of different extraction column

萃取柱種類平均回收率/%RSD/%雜質(zhì)干擾峰形基線噪音C1854.471.43～3.62較多較好較小MIPPE柱91.820.45～2.31較少較好較小

1. 丁香酚 2. 異丁香酚 3. 甲基丁香酚 4. 甲基異丁香酚 5. 乙酰基異丁香酚

圖5 石斑魚C18柱的液相色譜圖

Figure 5 Grouper C18column liquid chromatogram(1.20 mg/kg)

1. 丁香酚 2. 異丁香酚 3. 甲基丁香酚 4. 甲基異丁香酚 5. 乙?；惗∠惴?/p>

圖6 石斑魚過分子印跡固相萃取柱液相色譜圖

Figure 6 Grouper molecularly imprinted solid-phase extraction column liquid chromatogram

2.4 線性關(guān)系與檢測限

用有機流動相甲醇分別配制成不同濃度(0.05，0.10，0.20，0.50，1.00，5.00，10.00 μg/mL)的混合標準溶液，然后按照設(shè)定的儀器條件進行HPLC分析，以濃度(x，μg/mL)為橫坐標，以峰面積(y)為縱坐標作圖，分別繪制5種丁香酚類麻醉劑的標準曲線，結(jié)果(表6)顯示：5種丁香酚類麻醉劑在0.05～10.00 μg/mL濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均高于0.999 0。按照標準樣品的上機條件，取10 g陰性石斑魚樣品，進行提取、富集、洗脫、濃縮、定容，當進樣量為20 μL時，以10倍信噪比(S/N)計算定量限，該方法對5種丁香酚類麻醉劑的定量限(LOQ)均為0.05 mg/kg。標樣濃度為10.0 mg/L的液相色譜圖見圖7。

表6 5種丁香酚類麻醉劑標準品線性方程、R2、定量限Table 6 Five clove pheno drug standard linear equation and R2, the detection limit

2.5 方法的重現(xiàn)加標回收率和精密度

向空白石斑魚、桂花魚、南美白對蝦肉樣品中添加0.20，0.50，1.00 mg/kg 3個濃度梯度的混合標準溶液，對其進行加標回收率試驗測定，得出的結(jié)果見表7。由表7可知，5種丁香酚類麻醉劑平均加標回收率為82.04%～99.29%，其相對標準偏差值為0.06%～3.96%，說明本方法的重現(xiàn)性好，同時符合藥物殘留的檢測要求。

3 結(jié)論

本試驗旨在以分子印跡固相萃取作為樣品前處理技術(shù)，與高效液相色譜法相結(jié)合，建立一種可用于水產(chǎn)品中丁香酚類麻醉劑殘留檢測的新方法。系統(tǒng)研究了影響分子印跡固相萃取的因素如模板分子、功能單體、交聯(lián)劑的比例、樣品溶劑、洗脫劑等，并對方法的分析性能進行了綜合評價。在優(yōu)化條件下，丁香酚、異丁香酚、甲基丁香酚、甲基異丁香酚、乙?；惗∠惴?種分析物均有較高的靈敏度，樣品的加標回收率為 82.04%～99.29%，RSD在0.06%～3.96%。綜上所述，該方法簡單快速，有機溶劑用量少，可應(yīng)用于水產(chǎn)品中丁香酚類麻醉劑殘留的測定，但是分子印跡固相萃取的聚合物制備方法以及萃取的模式還需要作更多的嘗試和更深入的研究。

1. 丁香酚 2. 異丁香酚 3. 甲基丁香酚 4. 甲基異丁香酚 5. 乙?；惗∠惴?/p>

圖7 280 nm波長下的5種丁香酚吸收圖譜

Figure 7 280 nm wavelength of five kinds of eugenol absorption spectrum (10.0 μg/mL)

表7 5種丁香酚類化合物加標回收率和相對標準偏差Table 7 The standard addition recoveries and relative standard deviation of five kinds of clove phenol compounds (n=5)

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Determination of five kinds of clove phenol anesthetic in aquatic product by HPLC with molecularity imprinted solid phase extraction

HE Hong-jian1,2,3

HUANGHe1,2,3

GAOPing4

LIUYa1,2,3

CAOZhan-hui1,2,3

(1.GuangdongProvincialKeyLaboratoryofAquaticProductProcessingandSafety,Zhanjiang,Guangdong524088,China; 2.KeyLaboratoryofAdvancedProcessingofAquaticProductsofGuangdongHigherEducationInstitution,Zhanjiang,Guangdong524088,China; 3.CollegeofFoodScienceandTechnology,GuangdongOceanUniversity,Zhanjiang,Guangdong524088,China;4.ZhanjiangInstituteofSupervision&TestonFood&Medicines,Zhanjiang,Guangdong524022,China)

A new method of molecularly imprinted solid phase extraction (MISPE) combined with high performance liquid chromatography (HPLC) was developed for detecting five kinds of clove phenol anesthetic in aquatic product. Using eugenol as template molecule, methacrylic acid as functional monomer, ethylene glycol dimethacrylate as cross linking agent, molecularly imprinted polymers were synthesized by bulk polymerization and made into extraction column. Through the response surface analysis template molecule and functional monomer, crosslinking agent the best proportion was 1∶4. 55∶23. 21, and the recovery rate of these compounds reached 90% by using methanol as solvent and acetic acid solution as eluent. The results showed that linear response data were obtained in the concentration range of 0.05～10 μg/mL for the five kinds of clove phenol anesthetic with correlation coefficients from 0.999 83 to 0.999 97, and the limits of quantitative were 0.05 mg/kg. The method of sample recovery rate was 82.04%～99.29% with the relative standard deviations ranging from 0.06%～3.96%. The new established method was found simple and fast，accurate and feasible, and this could be successfully applied for the determination of five kinds of clove phenol anesthetic in aquatic product and their residue with low solvent consumption.

Molecularly imprinted polymer; molecularly imprinted solid phase extraction (MISPE) ; high performance liquid chromatography (HPLC); aquatic product; clove phenol anesthetic

廣東省科技計劃項目(編號：2014A020208121)

何洪健，男，廣東海洋大學(xué)在讀碩士研究生。

黃和(1962—)，男，廣東海洋大學(xué)教授。 E-mail：zjhahe@163.com

2016—06—02

10.13652/j.issn.1003-5788.2016.11.009