腮腺癌組織表達(dá)KiSS-1與患者臨床特征的關(guān)系研究

賴敏棟 樂(lè) 飛

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腮腺癌組織表達(dá)KiSS-1與患者臨床特征的關(guān)系研究

賴敏棟 樂(lè) 飛

目的 探討腮腺癌組織表達(dá)KiSS-1與患者臨床特征的關(guān)系。方法選取2011年3月-2015年8月江西省腫瘤醫(yī)院收治的254例腮腺癌患者作為研究對(duì)象，所有患者均接受腮腺癌根治術(shù)治療，且術(shù)中取腫瘤組織采取免疫組化法進(jìn)行KiSS-1表達(dá)檢測(cè)。根據(jù)KiSS-1檢測(cè)結(jié)果將上述研究對(duì)象分為觀察組與對(duì)照組，KiSS-1表達(dá)陽(yáng)性為觀察組，KiSS-1表達(dá)陰性為對(duì)照組。結(jié)果觀察組與對(duì)照組之間性別、年齡、腫瘤大小相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，病理學(xué)類型、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論KiSS-1可能為腮腺癌侵襲、轉(zhuǎn)移抑制基因，腮腺癌組織檢測(cè)KiSS-1可以用于患者的預(yù)后判斷。

腮腺癌；KiSS-1；免疫組化法；預(yù)后

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:1429～1431)

腮腺癌是常見(jiàn)的唾液腺惡性腫瘤之一，它具有發(fā)病率低、病程長(zhǎng)等特點(diǎn)。值得注意的是，腮腺癌的組織學(xué)類型繁多，因此不同腮腺癌的生物學(xué)行為亦不相同[1-2]。KiSS-1基因是從黑色素瘤細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，隨著研究的深入，有研究認(rèn)為KiSS-1基因表達(dá)缺失與腮腺癌的發(fā)生、發(fā)展有著一定的關(guān)系[3]。本研究即旨在探討腮腺癌組織表達(dá)KiSS-1與患者臨床特征的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2011年3月-2015年8月江西省腫瘤醫(yī)院收治的254例患者作為研究對(duì)象，所有患者均經(jīng)術(shù)后病理檢查確診為腮腺癌，并符合腮腺癌根治術(shù)的治療指征，包括男性112例，女性142例；年齡17～79歲，平均(45.7±15.8)歲；腫瘤大小1.6～5.5 cm，平均(2.5±1.1)cm；病理類型黏液表皮樣癌162例、腺泡細(xì)胞癌37例、其他55例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期142例、Ⅲ～Ⅳ期112例；合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移50例、未見(jiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移204例。根據(jù)KiSS-1表達(dá)檢測(cè)結(jié)果將上述研究對(duì)象分為觀察組與對(duì)照組，KiSS-1表達(dá)陽(yáng)性為觀察組，KiSS-1表達(dá)陰性為對(duì)照組。

1.2 KiSS-1表達(dá)蛋白檢測(cè)方法

本研究采用免疫組化S-P法進(jìn)行KiSS-1表達(dá)蛋白Metastin檢測(cè)，步驟如下：⑴對(duì)石蠟包埋標(biāo)本進(jìn)行連續(xù)切片，切片厚度為5 μm，將切片裱于載玻片上，60 ℃烘烤24 h。⑵脫蠟至水，具體方法為二甲苯脫蠟2次，10 min/次→100%酒精洗滌5 min→95%酒精洗滌5 min→80酒精洗滌5 min→蒸餾水沖洗3次，5 min/次。⑶阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，具體方法為滴加3% 過(guò)氧化氫(H2O2)溶液50 μl，室溫下避光孵育20 min，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次，5 min/次。⑷修復(fù)抗原，具體方法如下：將含有0.01 M EDTA的修復(fù)盒置入高壓鍋中，待高壓鍋中水沸騰時(shí)，將待修復(fù)切片置入修復(fù)盒，注意整張切片必須浸沒(méi)在緩沖液中，蓋上鍋蓋、壓力閥，加熱約8 min，自然冷卻20 min。PBS洗滌3次，5 min/次。⑸滴加正常非免疫山羊血清50 μl，37 ℃孵育30 min，不沖洗。⑹滴加兔抗人Metastin單克隆抗體工作液(1∶500)50 μl，37 ℃孵育60 min，4 ℃冰箱過(guò)夜。PBS洗滌3次，5 min/次。⑺滴加生物素標(biāo)記二抗50 μl，37 ℃孵育40 min。PBS洗滌3次，5 min/次。⑻滴加鏈霉素抗生物素-過(guò)氧化物酶溶液，37 ℃孵育30 min。PBS洗滌3次，5 min/次。⑼二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，具體方法為滴加DAB溶液50 μl，顯微鏡下觀察2～10 min，適時(shí)終止染色，未顯色者達(dá)到10 min時(shí)終止染色。自來(lái)水充分沖洗。⑽蘇木精染色3 min，自來(lái)水沖洗。⑾常規(guī)脫水、吹干，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.3 結(jié)果判斷

①陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)計(jì)分：選擇10個(gè)高倍鏡視野，無(wú)細(xì)胞染色計(jì)0分，<10%細(xì)胞染色計(jì)1分，10%～30%細(xì)胞染色計(jì)2分，>30%細(xì)胞染色計(jì)3分。②顯色強(qiáng)度計(jì)分：選擇10個(gè)高倍鏡視野，不顯色或顯色不清計(jì)0分，著淺黃色計(jì)1分，著棕黃色計(jì)2分，著棕褐色計(jì)3分。③將陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)計(jì)分與顯色強(qiáng)度計(jì)分相乘，兩者之積0～2分為陰性，≥3分為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，組間計(jì)數(shù)資料比較采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)R×C表χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組與對(duì)照組之間性別、年齡、腫瘤大小相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，病理學(xué)類型、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

3 討論

腮腺癌是指發(fā)于腮腺的惡性腫瘤，盡管腮腺惡性腫瘤占所有腮腺腫瘤的比例不足20%，但它是涎腺癌中發(fā)生率最高的一種惡性腫瘤[4]。腮腺癌患者在臨床上主要表現(xiàn)有耳下或耳前緩慢生長(zhǎng)的無(wú)痛性腫塊以及面神經(jīng)麻痹，此外腮腺深葉腫瘤可見(jiàn)咽側(cè)壁及軟腭隆起，其余癥狀與腫瘤侵犯部位密切相關(guān)，如當(dāng)腫瘤侵犯皮膚或黏膜時(shí)，患者可出現(xiàn)經(jīng)久不愈的潰瘍；當(dāng)腫瘤侵犯骨質(zhì)時(shí)，可伴有間斷或持續(xù)性疼痛；當(dāng)腫瘤侵犯翼內(nèi)肌時(shí)可以導(dǎo)致張口困難；當(dāng)腫瘤侵犯下頜神經(jīng)時(shí)可以導(dǎo)致患者半舌、下唇、下牙槽麻木；當(dāng)腫瘤侵犯顳骨巖錐時(shí)可以出現(xiàn)聲音嘶啞、進(jìn)食嗆咳、軟腭麻痹等。由此可見(jiàn)，腮腺癌會(huì)給患者生存質(zhì)量帶來(lái)巨大影響，并進(jìn)一步嚴(yán)重影響患者身心健康，甚至威脅其生命，因此有關(guān)腮腺癌的研究一直以來(lái)都是頭頸外科學(xué)以及口腔醫(yī)學(xué)的重要研究方向[5]。

表1 2組患者臨床特征指標(biāo)的比較(例，%)

在腮腺癌治療方面，目前臨床上建議的主要治療原則是以外科手術(shù)治療為主，術(shù)后放療為輔，一般不做術(shù)前放療及單純放療[6]。盡管如此，由于腮腺癌的組織學(xué)類型繁多，不同腮腺癌的生物學(xué)行為亦不相同，從而導(dǎo)致上述治療原則難以對(duì)所有腮腺癌患者取得滿意療效。近年來(lái)，針對(duì)不同個(gè)體的個(gè)體化診療理論逐步興起，但在此之前，我們有必要從時(shí)間、空間、解剖、結(jié)構(gòu)、基因、人為等多角度分析腮腺癌患者的個(gè)體化特性，其中基因個(gè)體化特性由于可以提供新的治療靶點(diǎn)，因此在目前最受重視[7]。

KiSS-1基因是從黑色素瘤細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，既往研究認(rèn)為KiSS-1基因廣泛表達(dá)于正常組織，如睪丸、胰腺、肝臟、小腸、腦、胎盤等[8]。隨著研究的深入，KiSS-1基因與惡性腫瘤的關(guān)系逐漸被重視，多種研究認(rèn)為在多種已發(fā)生轉(zhuǎn)移的腫瘤組織中KiSS-1基因表達(dá)缺失[9-10]。分析其機(jī)制，當(dāng)腫瘤組織KiSS-1基因表達(dá)缺失時(shí)，其產(chǎn)物Metastin與天然配體GPR54結(jié)合減少，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的基質(zhì)金屬蛋白酶活性增強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞增殖、移行、集落形成能力隨之提高，腫瘤進(jìn)一步發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)觀察組與對(duì)照組之間病理學(xué)類型、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步詳細(xì)分析，結(jié)果顯示KiSS-1基因表達(dá)在侵襲、轉(zhuǎn)移能力較強(qiáng)的黏液表皮樣癌、Ⅲ～Ⅳ期腮腺癌、伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中明顯減弱，即KiSS-1基因表達(dá)缺失與腮腺癌患者的侵襲、轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)。綜上所述，KiSS-1基因可能為腮腺癌侵襲、轉(zhuǎn)移抑制基因，腮腺癌組織檢測(cè)KiSS-1可以用于患者的預(yù)后判斷。

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(編輯：甘 艷)

Relationship between Expression of Kiss-1 and Clinical Features of Parotid Gland Carcinoma

LAIMindong,YUEFei.JiangxiCancerHospital,Nanchang,330029

Objective To investigate the relationship between expression of Kiss-1 and clinical features of parotid gland carcinoma.Methods 254 cases of parotid gland carcinoma were given radical resection of carcinoma of parotid gland,and expression of Kiss-1 in tumor tissues were taken during surgery and detected by immunohistochemical method.According to their test results,the patients were divided into the observation group and the control group,and the observation group had positive expression of Kiss-1,and the control group had negative expression of Kiss-1.Results No significant differences were found in the gender,age,tumor size between the 2 groups(P>0.05),while there had obvious differences in the pathological type,TNM stage and lymph node metastasis between the 2 groups(P<0.05). Conclusion KiSS-1 may be an invasion and metastasis suppressor gene for carcinoma of parotid gland,and it can be used to judge the prognosis of patients with carcinoma of parotid gland.

Carcinoma of the parotid gland;KiSS-1;Immunohistochemical method;Prognosis

330029 江西省腫瘤醫(yī)院

樂(lè) 飛

10.3969/j.issn.1001-5930.2016.09.013

R739.87

A

1001-5930(2016)09-1429-03

2016-02-24

2016-03-15)